靶向二肽基肽酶维药体外筛选模型的建立及应用

二肽基肽酶IV(dipeptidyl peptidaseIV,DPPIV)是治疗II型糖尿病的新靶点,糖依赖性胰岛素释放肽和肠促胰岛素胰高血糖素样肽-1在体内有促进胰岛β细胞分泌胰岛素,胰岛素的生物合成,β细胞的生长并抑制其凋亡和抑制血糖升高等功能.二肽基肽酶Ⅳ可快速降解糖依赖性胰岛素释放肽和肠促胰岛素胰高血糖素样肽-1,使其失去生物活性.本实验利用Caco-2细胞中所得到的二肽基肽酶IV,优化酶活筛选体系.确定了二肽基肽酶Ⅳ最适底物Gly-Pro-pNA浓度为0.064 mg/mL、反应温度37?C、反应时间30 min和竞争性抑制剂Ile-Pro-Ile浓度0.68mmol/L,从而建立了靶向二肽基肽酶Ⅳ的快速筛选体系.应用该模型,对18种维药提取物进行了筛选.本研究结果将为维药的进一步开发和利用提供了理论依据.

兼有血管紧张肽转换酶抑制作用和脑啡肽酶抑制作用的药物在心血管疾病治疗中的应用

兼有血管紧张肽转换酶抑制作用和脑啡肽酶抑制作用的药物是一类全新的药物,比单纯的血管紧张肽转换酶抑制药和脑啡肽酶抑制药具有更强的作用和更多的优点,已在心力衰竭、高血压等的治疗中发挥重要作用。

高血压与血管紧张素转换酶基因多态性及血清水平的关系探讨

目的:探讨高血压与血管紧张素转换酶(ACE)基因插入/缺失(I/D)多态性及血清中ACE水平的关系。方法:应用聚合酶链反应扩增105例高血压患者和116例健康对照者的ACE基因上的DNA片段,并同时检测血清ACE水平,比较不同基因型间这些指标的差异。结果:高血压组缺失等位基因D频率58.57%和DD基因型频率35.24%,显著高于健康对照组的37.07%和18.11%(P<0.05)。同时血清ACE水平与基因型关系依次为DD型>ID型>II型,三型之间均有显著性差异(P<0.05)。结论:ACE基因的缺失多态性及血清ACE水平与高血压有关。

ACE基因I/D和ACE2基因A9570G多态性与心房颤动的相关性研究

目的研究血管紧张素转换酶（ACE）基因I/D和血管紧张素转换酶2（ACE2）基因A9570G多态性与心房颤动（简称房颤）的相关性。方法按入院先后顺序入选305例患者,其中房颤患者148例（房颤组）,基础疾病与房颤患者匹配的非房颤患者157例（对照组）,通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）和基因测序方法检测两组患者的ACE基因I/Dey ACE2基因A9570G多态性的基因型。结果房颤组ACE基因I/D基因型及等位基因分布与对照组无统计学差异（P=0.841;OR=0.948,95%CI 0.680~1.322,P=0.755）,且不同I/D基因型患者的左房前后径和右房横径大小均无统计学差异（P=0.887,P=0.664）。在男性人群中,ACE2基因A9570G基因型分布与对照组比较无统计学差异（OR=1.631,95%CI 0.880~3.023,P=0.119）,但在男性房颤患者中,G基因型的左房前后径及右房横径（分别为40.1±6.4、40.1±5.7mm）明显大于A基因型患者（分别为37.0±4.4、36.5±4.4mm）,差异有统计学意义（P=0.028,P=0.010）;在女性人群中,ACE2基因A9570G基因型及等位基因分布与对照组比较均无统计学差异（P=0.286;OR=1.415,95%CI 0.885~2.264,P=0.146）,在女性房颤患者中,ACE2基因A9570G不同基因型的左房前后径和右房横径大小均无统计学差异（P=0.924,P=0.432）。结论 ACE基因I/D和ACE2基因A9570G多态性与房颤的相关性均不明显。但在男性房颤患者中,ACE2基因A9570G多态性中G基因型可能是预测心房增大的一个危险因子。

双肾双夹易卒中型肾血管性高血压大鼠重要靶器官ACE2表达研究

目的:本实验观察在肾性高血压的发生发展过程中大鼠重要靶器官脑、心肌、肾、主动脉组织中血管紧张素I转化酶2(ACE2)的表达变化情况,探讨在高血压的发生发展过程中ACE2的变化规律,为防治高血压提供新的研究作用靶点。方法:建立双肾双夹易卒中型肾血管性高血压大鼠动物模型,用Western blotting的方法研究在高血压发生发展过程中重要靶器官组织中ACE2的表达。结果:2周末高血压组血压明显升高,4周末高血压组心脏体重比明显升高,高血压组重要靶器官心、脑、肾、主动脉中ACE2的表达随高血压的时程发展明显减少。结论:双肾双夹易卒中型肾血管性高血压大鼠重要靶器官组织中ACE2表达减少,提示ACE2参与高血压的发生发展,并与高血压靶器官的损害有关。

血管紧张素转换酶基因插入缺失多态性与原发性高血压患者合并心房颤动的相关性研究

目的 探讨中国河南豫北地区汉族原发性高血压人群血管紧张素转换酶（ACE）基因插入（I）/缺失（D）多态性与心房颤动（房颤） 的关系.方法 采用病例对照法,选择原发性高血压患者803例,分为房颤组405例和窦性心律组398例,采用PCR-RFLP方法进行ACE基因I/D多态性分析.结果 房颤组DD基因型频率明显高于窦性心律组（25.9% vs 13.1%）,ID基因型频率明显低于窦性心律组（38.8% vs 50.3%,P〈0.05）.与携带II＋ID基因型者比较,携带DD基因型高血压患者房颤的风险增加（OR=2.13,95%CI：1.60-3.29,P〈0.05）,携带DD基因型的高血压合并房颤患者左心房内径明显扩大,LVEF明显降低（P〈0.05）.结论 ACE基因I/D多态性与原发性高血压患者房颤的发生存在相关性,DD基因型可能使高血压患者发生房颤的危险增加.

ACE2基因过表达对糖尿病心肌病大鼠心功能的影响

目的研究腺病毒为载体的血管紧张素转换酶-2(ACE2)基因转染对大鼠糖尿病心肌病(DCM)的治疗作用。方法采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型,12周后分别将生理盐水、EGFP基因、ACE2基因注入对照组、EGFP组、ACE2组大鼠心脏。转染后10 d,实时荧光定量PCR比较各组大鼠ACE2mRNA的表达,转染后30d,超声检测各组大鼠的心脏功能,Masson染色测定心肌胶原含量,酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的水平。结果ACE2组分别与对照组和EGFP组比较,ACE2mRNA的表达明显升高(P<0.05),心脏收缩和舒张功能明显改善(P<0.05),心肌胶原和AngⅡ含量明显减少(P<0.01)。结论ACE2基因过表达可以改善糖尿病心肌病大鼠的心功能。

血管紧张素(1-7)在高盐高脂饮食诱导的代谢综合征小鼠肾脏损伤中的作用

目的采用高盐高脂饮食喂养C57BL/6小鼠建立代谢综合征(MS)模型,探讨血管紧张素转换酶2(ACE 2)及血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)]在MS导致的肾脏损伤中的作用。方法 56只SPF级C57BL/6小鼠随机分为7组(每组8只),分别给予正常饮食(ND),高盐(HSD)饮食,高脂(HFD)饮食,高盐高脂(HSFD)饮食,以及分别采用依那普利20mg/(kg·d)+高盐高脂饮食(HSFD-E),缬沙坦50mg/(kg·d)+高盐高脂饮食(HSFD-V),缬沙坦50mg/(kg·d)+Ang(1-7)Mas受体抑制剂A-779 150ng/(kg·d)+高盐高脂饮食(HSFD-VA)。16周后检测血压、体重、血糖及尿蛋白排泄率等基础代谢指标,然后颈动脉取血,ELISA法检测血清中AngⅡ及Ang(1-7)水平,Western blotting检测肾脏中ACE 2及Ⅲ型胶原的表达,HE及Masson染色观察肾脏病理学改变。结果高盐高脂饮食喂养16周后,C57BL/6小鼠血压、内脏脂肪重量与体重比、血脂、血糖以及尿蛋白排泄率等各项代谢指标均明显升高(P<0.05);肾脏出现明显纤维化改变;血清AngⅡ水平升高,Ang(1-7)水平降低(P<0.01);肾脏组织中ACE2表达降低(P<0.05)。给予缬沙坦干预可明显缓解高盐高脂引起的代谢异常,肾脏损伤程度减轻,肾脏和血清中ACE2及Ang(1-7)表达增加(P<0.05)。给予依那普利或缬沙坦+A-779干预后上述指标与未干预组比较均无明显变化。结论应用高盐高脂饮食喂养C57BL/6小鼠可成功建立MS模型。AngⅡ受体1阻滞剂缬沙坦能够缓解高盐高脂导致的代谢异常和肾脏损伤,其对肾脏的保护机制可能与Ang(1-7)表达增加有关。

肾素-血管紧张素系统基因多态与子痫前期的相关性

目的:探讨肾素-血管紧张素系统基因中血管紧张素原(AGT)基因M235T多态、血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE)基因插入/缺失(I/D)多态和血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT1R)基因A1166C多态与子痫前期的关系。方法:应用聚合酶链反应(PCR)、限制性酶切及电泳分型等方法对45例子痫前期患者(子痫前期组)和45例非高血压妊娠妇女(对照组)的AGT基因M235T多态、ACE基因I/D多态、AT1R基因A1166C多态性进行分析。结果:(1)AGTM235T多态的TT基因频率两组比较差异有显著性。(2)ACE基因DD、ID、II型在两组中分布无明显差异。(3)AT1R基因A1166CAA、AC、CC型在两组中分布无明显差异。(4)子痫前期组具备TT基因型者,其合并DD基因型的95%CI为1.473～31.919,合并1166C等位基因C的95%CI为1.316～18.991。结论:AGT变异基因235T与子痫前期发生有关,T等位基因可能是子痫前期的易感基因。ACE基因DD型与子痫前期的相关性限于携带有M235T等位基因的患者。携带有AT1R基因C等位基因和AGT基因TT型的妇女子痫前期发病危险升高。

原发性高血压患者血管紧张素转换酶基因多态性与左室肥厚的相关性研究

目的探讨原发性高血压(EH)患者血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性与左室肥厚(LVH)的关系。方法轻、中度高血压病患者420例,测定血浆肾素活性(PRA)、血浆ACE浓度、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度和醛固酮(ALD)浓度,同时用聚合酶链反应(PCR)法检测ACE基因的插入或缺失(I/D)多态性,用超声心动图测量舒张末期左心室内径(LVDd)、左心室后壁厚度(LVPWT)、舒张末期左心室间隔厚度(INSTd),比较不同左室构型患者ACE基因型的分布。结果420例患者中,左室构型异常者284例,其中向心性重构者占26.3%,向心性肥厚者占32.3%,离心性肥厚者占41.1%。正常左室构型、向心性重构、向心性肥厚、离心性肥厚患者血浆ALD浓度分别为(416.9±127.36)pmol/L、(379.2±117.9)pmol/L、(418.7±129.47)pmol/L和(457.1±134.29)pmol/L。不同左心室构型ACE基因型和等位基因分布差异无统计学意义。结论向心性肥厚和离心性肥厚者血浆ALD浓度显著高于其他构型者;向心性重构和向心性肥厚者收缩压高于其他构型患者;ACE基因I/D多态性与原发性高血压患者左室肥厚无相关性。

血管紧张素转换酶和内皮素与糖尿病微血管病变的关系

目的 探讨血管紧张素转换酶 (angiotensinconvertingenzyme ,ACE)和血浆内皮素 (endothelin ,ET)水平与糖尿病微血管病变的关系。方法 用紫外分光光度法和直接放射免疫法测定 5 5例糖尿病患者和 30名正常人血清ACE和血浆ET水平。结果 糖尿病微血管病变患者血清ACE和血浆ET水平显著高于糖尿病无微血管病变患者 ,且随着糖尿病微血管病变的加重 ,血清ACE和血浆ET水平显著增高。糖尿病患者血清ACE和血浆ET水平呈显著正相关。

血管紧张素转换酶2基因多态性与苯那普利降压水平的关联性分析

目的:探讨血管紧张素转换酶2(angiotensin-converting enzyme2,ACE2)基因rs2106809多态性与服用苯那普利后血压变化情况的关联,以及rs2106809与血管紧张素Ⅱ的1型受体(angiotensinⅡtype1receptor,AGTR1)和血管紧张素原(angiotensinogen,AGT)基因位点之间的交互作用。方法:在1831名高血压患者服用苯那普利2周的基础上,分析rs2106809与血压变化指标的关联,使用广义多因子降维法(generalized multifactor dimensionality reduc-tion,GMDR)分析rs2106809与AGTR1基因8个位点和AGT基因3个位点的交互作用。结果:rs2106809与女性服药后收缩压和脉压差变化情况相关,与男性脉压差变化情况相关,携带T等位基因者降压幅度较大。在男性收缩压变化情况的分析中发现了多基因参与的交互作用模型。结论:rs2106809可能以独立危险因素或交互作用组分的形式影响苯那普利的降压水平。

血管紧张素转换酶基因多态性与老年脑卒中的相关性

目的探讨血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性与老年脑卒中的相关性。方法选择186例脑卒中患者(脑卒中组)分为脑血栓组(126例)和脑出血组(60例),另选75例同期住院的非脑卒中患者作为对照组。采用PCR-RFLP技术,检测ACE第16内含子中长度为287bp碱基片段的插入/缺失情况,并分别测定其基因型频率和等位基因频率。结果脑卒中组D等位基因频率为41.9%,对照组为31.3%,两组比较差异有显著性意义(P<0.05);脑卒中组DD型基因频率为21.5%,对照组为9.3%,两组比较差异有显著性意义(P<0.05);脑血栓组和脑出血组D等位基因和DD型基因与对照组比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论ACE基因多态性与老年人脑卒中相关,其DD型基因和D等位基因是老年脑卒中的危险因素。

高血压左心室肥厚患者ACE和Chymase基因多态性与心房颤动的相关性研究

目的探讨高血压左心室肥厚(LVH)患者血管紧张素转换酶(ACE)基因和Chymase基因的多态性与心房颤动(AF)的相关性。方法选择2005年12月-2008年5月在福州总医院住院的881例原发性高血压合并LVH患者。纳入其中128例AF患者作为AF组,按年龄、性别、左心室体重指数等临床资料进行1∶2配比,选择256例窦性心律者作为对照组。运用聚合酶链反应检测ACE基因的I/D多态性,运用限制性片段长度多态性技术检测Chymase基因的CMA/B多态性。结果ACE基因的DD基因型和D等位基因在AF组和对照组间分布差异有统计学意义(分别为:χ2=11.020,P=0.004;χ2=9.327,P=0.002)。Logistic多元回归分析显示,与Ⅱ型纯合子相比,DD型纯合子使高血压LVH患者发生AF的风险增加2.6倍(OR=2.649,95%CI:1.47～5.31)。Chymase基因CMA/B多态位点的基因型及等位基因频率在AF组和对照组间分布差异无统计学意义。结论ACE基因I/D多态与高血压LVH患者AF的发生显著相关,DD基因型增加AF发生的风险。Chymase基因CMA/B多态与高血压LVH患者AF的发生无关。

高血压病并心力衰竭与ACE基因、SLC6A2基因多态性的关联研究

目的：探讨去甲肾上腺素转运基因[溶质载体家族6,成员2（SLC6A2）]启动子3、血管紧张素转换酶（ACE）基因多态性与高血压病合并心力衰竭（EH＋HF）的相关性。方法：收集176例心功能Ⅲ－Ⅳ级的EH＋HF汉族患者,及与之按性别、年龄±4、居住地相匹配的心功能Ⅰ－Ⅱ级的高血压病患者（EH组）及健康体检者（正常对照组）各176例,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）检测SLC6A2启动子3的A/G多态性及血管紧张素转换酶[ACE（I/D）]多态性基因型。结果：卡方分割显示EH＋HF组SLC6A2-P3-AG/GG基因型频率（41.48%）显著高于EH组（26.70%）和正常对照组（22.16%）,x2=7.937,P=0.005;EH＋HF组ACE-DD基因型频率（26.14%）显著高于EH组（12.50%）和正常对照组（10.80%）,x2=17.897,P〈0.001。Logistic回归以EH组为参照系,调整混杂因素后,SLC6A2-AG/GG,ACE-DD型,DD＋AG/GG的OR值分别为1.905（95%CI：1.138－3.188,P=0.014）,1.908（95%CI：1.009－3.609,P=0.047）,3.356（95%CI：1.188－9.475,P=0.022）。结论：携带有ACE-DD型、SLC6A2-AG/GG型可能是高血压病合并心力衰竭独立危险因素,DD＋AG/GG的危险性和预测作用最大。

血管紧张素转换酶基因多态性与不同性别慢性心力衰竭患者发病的相关性研究

目的探讨我国南方汉族人群中,血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性与不同性别慢性心力衰竭(CHF)发病的关系。方法应用聚合酶链反应技术测定82例男性和48例女性CHF患者(试验组),以及89名男性和41名女性健康者(对照组)的ACE基因插入/缺失(I/D)多态性,并进行统计学比较。结果共检测出3种ACE基因型,分别为II型、ID型和DD型。试验组患者DD基因型及D等位基因均高于同性别对照组;与非DD型者相比,男性DD型者发生CHF的相对风险率为1.918;女性DD型者发生CHF的相对风险率为2.727。结论ACE基因I/D多态性与中国南方汉族人群不同性别CHF的发生均相关,D等位基因可能是该地区CHF发病的遗传危险因素。与男性相比,DD基因型女性罹患CHF的可能性更大。

中国汉族人血管紧张素转换酶基因多态性与糖尿病视网膜病变相关性Meta分析

目的对中国汉族人血管紧张素转换酶基因(ACE)内含子16插入(Ⅰ)/缺失(D)多态性与糖尿病视网膜病变(DR)的关联性进行Meta分析。方法以糖尿病视网膜病变组和糖尿病对照组基因型分布的比值比(OR)为统计量,应用REVMAN4.2软件对各研究结果进行一致性检验和数据合并。结果相关文献未发现显著发表偏倚。研究共包括糖尿病视网膜病变组729例,糖尿病对照组903例,数据合并结果DD/(ID+Ⅱ)OR值为1.80,95%可信区间(CI)为1.29～2.50。Ⅱ/(ID+DD)OR值为0.67,95%CI为0.54～0.84。结论汉族人群ACEI/D多态性与DR有关联,糖尿病视网膜病变组DD基因型增多,Ⅱ基因型减少。

原发性高血压基因机制研究进展

原发性高血压是遗传和环境因素相互作用所致的多基因遗传性疾病,对其基因机制的研究有助于对高血压的诊断、治疗和预防等。现就原发性高血压易感基因的研究方法(候选基因策略和全基因组扫描策略)以及部分候选基因的研究进展进行综述。

人ACE2基因真核表达载体的构建及其转染人内皮细胞的研究

目的:克隆人血管紧张素转换酶2(ACE2)基因,构建其真核表达载体并将之转染入体外培养的人血管内皮细胞中。方法:采用PCR方法从人胎儿心脏cDNA文库扩增出人ACE2cDNA全长基因,克隆到pcDNA3.1-D/V5-His表达载体上,构建重组真核表达质粒phACE2,经酶切和测序鉴定。采用脂质体法将phACE2转染至人血管内皮细胞中,分别利用实时定量PCR和Western印迹检测重组ACE2的mRNA和蛋白的表达情况。结果:经PCR、酶切和基因序列测定证实重组入载体的片段(2419bp)为目的基因序列,在转染的内皮细胞中发现ACE2的mRNA和蛋白的表达明显增加(P<0.01)。结论:本研究成功构建并表达了pcDNA3.1-hACE2重组真核表达载体,为该基因在高血压病防治中的功效研究奠定了基础。

血管紧张素转换酶基因多态性与肥厚性心肌病相关性的Meta分析

目的系统评价血管紧张素转换酶（AcE）基因捅入／缺失（I／D）多态性与肥厚性心肌病（HCM）的相关性。方法检索PubMed、Embase、OVID、Web of Science、Cochrane library、CNKI、万方、VIP数据库，搜集ACEI／D多态性qHCM关系的研究义献，对符合纳入标准的文献采用Stata 11．0软件进行Meta分析：结果共纳入15篇文献，累计病例1114例，对照1648例。Meta分析结果显示：ACEI／D多态性与HCM易感性的相关性在4个比较模型中的差异均有统计学意义[DvsⅠ：OR=1．49，95％CI 1．20-1．84；DDvs（ID＋Ⅱ）：OR=1．56，95％CI 1．17～2．08；（DD＋ID）vsⅡ：OR=1．76．95％CI 1．30～2．38;DDvsⅡ：OR=2．20，95％CI 1．44-3．37]。亚组分析提示，ACEI／D多态性与HCM的相关性在亚洲人群中的差异有统计学意义，而在欧洲人群中的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论在全人群中ACEI／D多态性与HCM的易感性相关，D等位基因和DD基因型可能是其发病的危险因素．在欧洲人群中I／D多杰件与HCM的发病病无关。