肽基脯氨酰同分异构酶(Pin1)对子宫颈癌细胞脂质代谢的作用

目的探讨肽基脯氨酰同分异构酶(Pin1)蛋白对宫颈癌细胞脂质代谢的作用。方法应用免疫组织化学方法检测Pinl和ACC1蛋白在女性慢性宫颈癌及宫颈癌组织的表达;Western blotting技术和RT-PCR技术检测Pin1基因在宫颈癌SiHa、C33a及H8细胞中的蛋白本底表达情况,采用RNA干扰技术下调子宫颈癌C33a细胞中Pin1的表达;Western blotting技术检测宫颈癌细胞中Pin1蛋白表达水平变化对ACC1蛋白表达的影响;脂溶性荧光染色(BODIPY493/503)观察转染Pin1低表达慢病毒前后宫颈癌细胞中性脂肪含量的变化。结果与慢性宫颈炎相比,宫颈癌组织中Pin1和ACC1蛋白表达明显上调(P <0.05),两者在宫颈癌组织中的表达呈正相关(χ2=6.02,P <0.05)。与C33a细胞相比,SiHa细胞中Pin1蛋白的表达水平较低,故选用C33a细胞转染Pin1低表达慢病毒。C33a细胞转染Pin1低表达慢病毒后,Pin1及ACC1蛋白表达水平明显降低(P <0.05),与正常对照组和阴性对照组比,转染Pin1低表达慢病毒的细胞内中性脂肪酸含量降低。结论 Pin1蛋白的表达参与宫颈癌细胞内的脂质代谢,具体调控机制尚待研究。

肽基脯氨酰顺反异构酶1在肝癌中的研究进展

肽基脯氨酰顺反异构酶1(PIN1)在肝癌中异常表达,作为肿瘤催化分子在肝癌的增殖、侵袭、凋亡和血管生成等过程中发挥着重要作用。该文从PIN1的分子结构与功能、PIN1在肝癌中的表达及其在肝癌发生、发展中的作用等几方面进行综述。

系统性红斑狼疮患者外周血肽基脯氨酰顺反异构酶1与白细胞介素-17的分析及其临床意义

目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)活性的表达与细胞因子白细胞介素-17(IL-17)水平相关性及其临床意义。方法:选取98例SLE患者,其中42例为SLE初治患者,另选43例健康体检者为健康对照组。采用酶联免疫吸附试验检测所有研究对象入组时及98例SLE患者治疗后3个月血清中Pin1、IL-17水平,分析98例SLE患者血清Pin1水平变化及与细胞因子IL-17、SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分、实验室指标的相关性,分析42例SLE患者初治时、治疗后3个月时其水平变化及意义。结果:①SLE稳定组外周血的Pin1表达水平明显高于健康对照组(H=28.913,P<0.05),SLE活动组外周血的Pin1表达水平明显高于SLE稳定组(H=31.738,P<0.05)。②SLE患者Pin1与IL-17、SLEDAI评分呈正相关(r=0.640,P<0.05;r=0.461,P<0.05),与抗ds-DNA抗体、C反应蛋白、红细胞沉降率无明显相关性。③SLE初治组外周血的Pin1表达水平明显高于健康对照组(H=55.568,P<0.05),SLE初治组治疗后3个月的Pin1表达水平较治疗前下降(H=28.136,P<0.05)。④血清Pin1水平在有肾脏损害的SLE患者表达增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:SLE患者外周血Pin1过表达,IL-17增高且与其呈正相关,经过治疗能显著降低Pin1活性,降低IL-17细胞因子水平,抑制Pin1蛋白表达,可能会延缓SLE的进展,Pin1抑制剂可能成为SLE治疗的新靶点之一。

肽基脯氨酰顺反异构酶抑制剂胡桃醌对宫颈鳞癌SiHa细胞凋亡的作用

目的:探讨肽基脯氨酰顺反异构酶抑制剂胡桃醌对宫颈鳞癌Si Ha细胞增殖和凋亡的影响及其促凋亡的机制。方法:选取处于对数生长期的Si Ha细胞,将其分为空白对照组和不同剂量(10、20、50、80及100μmol/L)胡桃醌给药组,共6组。采用MTT法观察胡桃醌对Si Ha细胞的抑制作用,并计算出半数抑制浓度(IC50=20.4μmol/L),依据IC50确定胡桃醌的有效浓度;选取与IC50接近的浓度(20μmol/L)通过Hoechst 33258及流式细胞术测定胡桃醌对Si Ha细胞凋亡的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3、8、9以及抑癌基因PTEN的蛋白水平。结果:MTT实验结果显示,与对照组比较,各给药组对细胞活力的抑制作用明显,差异有统计学意义(P<0.05);Hoechst 33258检测表明,20μmol/L胡桃醌处理细胞12 h后可出现明显的细胞核典型凋亡细胞形态,流式细胞术检测结果说明胡桃醌可诱导Si Ha细胞出现早期凋亡;Western blot检测显示与正常对照组相比,20μmol/L胡桃醌处理细胞12 h后,cleaved caspase-3、8、9及PTEN的蛋白水平明显增加。结论:胡桃醌可以抑制Si Ha细胞的活力,并诱导细胞凋亡,其机制主要是通过抑制caspase途径并增加抑癌基因的表达。

脊椎动物Cyclophilin A肽基脯氨酰顺反异构酶活性及遗传变异分析

Cyclophilin A(简称CypA)由PPIA(Peptidylprolyl isomerase A)基因编码,是典型的Cyclophilin家族蛋白,具有肽基脯氨酰顺反异构酶活性,在蛋白质的折叠和转运、信号转导、炎症、免疫调节、细胞凋亡及病毒复制等生物学过程中发挥着重要作用。本研究重点探讨了不同脊椎动物CypA的肽基脯氨酰顺反异构酶活性及其遗传变异。根据Gen Bank数据库PPIA基因的序列信息,克隆了脊椎动物的PPIA基因并构建其原核表达载体,其中鼠耳蝠(Myotis davidi)和绿头鸭(Anas platyrhynchos)的PPIA基因序列为首次报道。利用大肠杆菌表达GST-Cyp A融合蛋白并进行亲和层析,切除GST标签后再进行分子筛层析,获得纯化的CypA蛋白。利用胰糜蛋白酶偶联法测定CypA的肽基脯氨酰顺反异构酶活性,发现12种脊椎动物CypA的肽基脯氨酰顺反异构酶活性无显著差异。同时,通过一系列遗传变异和分子进化分析,发现12种脊椎动物CypA的酶活位点、CsA结合位点等重要功能域的氨基酸序列完全一致,而且其结构和在染色体中的基因定位也非常保守。研究结果表明,脊椎动物CypA的关键功能域高度保守,这是CypA维持其酶活及生物学功能的有力保障。

大肠杆菌肽基脯氨酰顺反异构酶slyD基因缺失株的构建及生物学特性研究

肽基脯氨酰顺反异构酶(PPIases)广泛存在于原核生物中,主要生物功能是专一性催化已磷酸化的丝/苏-脯氨酞顺/反异构。为研究大肠杆菌PPIases sly D基因缺失对其生物学特性的影响,本研究利用改进的Red重组方法构建大肠杆菌BL21株的sly D缺失株,命名为BL21Δsly D;并通过突变株的形态学变化、生长特性、生化代谢特性、耐酸性、耐渗透压能力、耐温度缺氧能力对其进行鉴定。结果表明,缺失株生长速率、耐高温缺氧能力与亲本株相比差异不显著,然而突变株的耐酸性与耐渗透压能力则显著低于亲本株(p<0.01),表明大肠杆菌PPIases sly D基因可能影响双组份调控系统的调节作用。本研究构建的大肠杆菌sly D基因缺失株BL21Δsly D为进一步研究大肠杆菌sly D基因的功能奠定了基础。

肽基脯氨酰顺反异构酶在子宫内膜癌组织中的表达及与PR蛋白的关系

目的探讨肽基脯氨酰顺反异构酶（peptidyl prolyl cis-trans isomerase，Pin1）蛋白在子宫内膜癌组织中的表达与临床病理特征的关系，及其与病程相关蛋白的（PR）表达的相关性。方法回顾性分析湘雅医院 2010年2月~2012年10月收治50例子宫内膜癌临床病理资料，采用免疫组织化学方法对子宫内膜癌组织中pin1及PR蛋白的表达进行检测，结果采用卡方检验及Spearman相关系数法进行统计学分析。结果 pin1蛋白在子宫内膜癌中的阳性表达率为66%（33/50），其表达阳性率随着病理分化程度由高到低依次递减（高分化组93.3%，中分化组 84.6%，低分化组36.4%），浅肌层浸润组pin1阳性表达率（77.4%）显著高于深肌层浸润组（47.4%），淋巴结转移组pin1阳性表达率（28.6%）显著低于淋巴结未转移组（72.1%）。pin1与PR阳性表达呈现正相关（P〈0.05）。结论 pin1蛋白表达增高可能与子宫内膜癌的病理分化程度、肌层浸润深度及淋巴结转移有关，有望与PR一起成为预测子宫内膜癌患者治疗效果的一个重要的指标。

温度、二硫苏糖醇、基因定点突变对溶菌酶和肽基脯氨酰顺反异构酶蛋白交联反应的影响

目的研究二硫键对溶菌酶和肽基脯氨酰顺反异构酶(PPI)蛋白交联聚集作用的影响。方法以人总RNA为模板设计引物进行人类PPI基因的克隆,以获取的正常型表达载体为模板,利用PCR定点突变的方法破坏掉PPI基因中形成二硫键的两个半胱氨酸残基(Cys),将其构建到p Trc His C-hpp I原核表达系统,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达获得正常型和突变型PPI蛋白,与溶菌酶在不同温度、还原剂二硫苏糖醇(DTT)存在条件下进行蛋白聚集反应,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western印迹法分析和鉴定交联情况。结果溶菌酶和PPI在临界变性温度时有明显的二聚体和多聚体条带;反应体系中加入DTT后,几乎观察不到交联条带,两者的异源蛋白交联反应出现同样的现象;将突变型PPI置于与正常型PPI完全相同的反应条件下,均没有任何蛋白聚集现象。结论二硫键是蛋白质交联和多聚化发生的前提,破坏二硫键将导致蛋白结构和交联作用的丧失。

肽基脯氨酰顺反异构酶1和细胞周期蛋白D1在食管鳞状细胞癌中的表达

目的研究肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)在食管鳞状细胞癌中的表达及意义。方法通过免疫组织化学SP法检测37例食管鳞状细胞癌标本癌组织及癌旁组织中Pin1与Cyclin D1蛋白的表达,分析各临床病理参数对食管鳞状细胞癌组织中Pin1及Cyclin D1表达的影响。结果 Pin1在癌旁正常组织中不表达或呈微弱的核表达,在癌组织中呈阳性表达;Cyclin D1在癌旁正常组织中不表达,在癌细胞的细胞质或细胞核内呈阳性或强阳性表达。有淋巴结转移者Pin1表达较未转移者高,差异有统计学意义(P<0.05),分化程度、年龄、性别及TNM分期等临床病理参数对Pin1的表达无影响(P>0.05)。分化程度高者Cyclin D1表达较低,分化程度低者Cyclin D1表达较高,差异有统计学意义(P<0.05),年龄、性别及肿瘤分期等临床病理参数对Cyclin D1的表达无明显影响(P>0.05)。结论 Pin1和Cyclin D1在食管鳞状细胞癌中的表达明显增高,二者相互作用调节细胞周期,促进食管鳞状细胞癌的发生。

人肽基脯氨酰顺反异构酶基因的克隆、表达、纯化及热变性交联

蛋白质分子间交联是普遍存在的现象 .然而 ,蛋白质交联的分子机理还不太清楚 .为了进一步探测蛋白质交联的分子机理 ,以及交联能否在异源肽链间发生 ,本实验室克隆了人肽基脯氨酰顺反异构酶 (humanPeptidylproly cis trans isomerase ,hPPI)cyclophilincDNA基因 ,并纯化出了PPI蛋白 .最后 ,将PPI和lysozyme蛋白进行热变性交联实验 ,结果显示在同源和异源肽链间都有二聚体和多聚体形成 .并证实蛋白质交联可经三步完成 :1 )蛋白质构象包括二级结构改变 ;2 )形成分子间二硫键 ;3)

紫花苜蓿肽基脯氨酰顺反异构酶基因全长cDNA的电子克隆及同源建模

[目的]研究对紫花苜蓿肽基脯氨酰顺反异构酶基因全长cDNA进行电子克隆及同源建模的方法。[方法]根据物种间同源基因相对保守的特点,利用NCBI数据库,对公共EST数据库进行同源检索筛选和重叠群装配,获得拼接cDNA序列,经过ORFFinder分析后获得相应蛋白质的全长序列,并利用Swiss-Mode服务器预测各原子坐标,进而利用Swiss-PdbViewer生成三维空间模型。[结果]采用该方法成功获得紫花苜蓿肽基脯氨酰顺反异构酶基因的完整cDNA序列,全长为1880bp,mPPI蛋白质编码68AA,分子量约为7829.9Da,理论等电点pI=8.99,原子组成为C338H547N103O103S4,摩尔消光系数280nm处为4595,不稳定系数为42.16,脂肪系数为83.24,总平均亲水性为-0.456。[结论]根据物种间同源基因序列对跨物种间EST数据库进行同源检索筛选和拼接,是基因克隆的一条有效途径。

不同温度对人类肽基脯氨酰顺反异构酶蛋白及突变体交联反应的影响

目的研究不同温度对人类肽基脯氨酰顺反异构酶(hPPI)体外交联反应的影响。方法以人总RNA为模板设计正反引物进行h PPI基因克隆,以获取的正常型表达载体为模板,利用PCR定点突变的方法将hPPI基因中两个半胱氨酸(Cys)突变为丝氨酸(Ser),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达正常型和突变型蛋白,在不同温度条件下进行蛋白交联反应,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定交联现象。结论与溶菌酶表现相似,正常型hPPI蛋白交联反应随温度升高而逐渐加快,在达到蛋白变性温度时交联反应最明显,出现大量二聚体和多聚体条带;将突变型hPPI蛋白置于与正常型hPPI蛋白完全相同的反应条件下,观察不到任何交联条带。结论热变性可显著改变蛋白高级结构,蛋白对热变性无明显特异性,在变性温度临界条件下表现出相同的聚合作用;二硫键可导致蛋白结构改变,从而影响交联结果。

肽基脯氨酰顺反异构酶1对喉癌细胞系Hep-2细胞生物学行为的影响

目的探讨肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)对喉癌细胞系Hep-2细胞中心体扩增以及生物学行为的影响。方法培养人喉癌细胞系Hep-2细胞,构建、转染Pin1 siRNA并分组。Pin1过表达分为转染pcDNA3.1组(NC组)、转染pcDNA3.1-Pin1组(Pin1组)、转染pcDNA3.1-Pin1后加核转录因子(NF-κB/p65)抑制剂(BAY11-7082)组(Pin1+7082组)。Pin1干扰分为转染阴性对照组(NC组)、转染siRNA组(Si-Pin1组)、转染siRNA后加NF-κB/p65激活剂(IL-1β)组(Si-Pin1+IL-1β组)。Western blotting检测Pin1、CDK2及NF-κB/p65蛋白表达,实时PCR检测Pin1及CDK2基因表达,免疫荧光实验检测细胞中心体扩增及NF-κB/p65核转位,流式细胞仪检测Hep-2细胞周期、凋亡、克隆形成,CCK-8实验检测Hep-2细胞增殖能力,Transwell及划痕实验检测Hep-2细胞的迁移能力。结果Pin1过表达促进中心体复制异常、克隆形成、细胞迁移、细胞周期G1/S转化,NF-κB/p65核转位以及CDK2的表达;NF-κB/p65抑制剂能够减弱这些效应。下调Pin1表达能够抑制中心体异常复制、克隆形成、细胞迁移、细胞周期G1/S的转化,NF-κB/p65入核以及CDK2的表达;NF-κB/p65激活剂能够逆转这些作用。结论Pin1可能经NF-κB通路上调CDK2的表达来影响Hep-2细胞的生物学行为。

miR-200c调控肽基脯氨酰顺反异构酶对喉癌Hep-2细胞生物学行为的影响

目的探究miR-200c对喉癌Hep-2细胞生物学行为的影响以及miR-200c是否通过肽基脯氨酰顺反异构酶(PIN1)在喉癌中发挥其生物学功能。方法实时PCR检测喉癌组织中miR-200c的表达水平;miR-200c相关小RNAs瞬时转染喉癌Hep-2细胞,Transwell实验检测细胞的迁移能力,免疫荧光实验检测细胞中心体的异常扩增;双荧光素酶报告基因系统检测miR-200c与PIN1的结合;Western blotting检测PIN1蛋白的表达水平。结果 miR-200c在喉癌组织中的表达水平显著增高;Transwell结果显示,miR-200c能够抑制Hep-2细胞的迁移,免疫荧光实验显示,miR-200c能够减弱细胞中心体的异常扩增;双荧光素酶报告基因结果证实,PIN1是miR-200c的靶基因之一;Western blotting结果显示,miR-200c可在翻译水平抑制PIN1的表达;miR-200c能够通过调控PIN1PIN1抑制喉癌细胞的迁移能力和减弱细胞中心体的异常扩增。结论 miR-200c通过调控PIN1抑制喉癌细胞的迁移能力,并减弱中心体异常扩增。

肽基脯氨酰顺反异构酶及细胞周期蛋白D1在胃肠间质瘤中表达的临床意义

目的研究肽基脯氨酰顺反异构酶(Pin1)与细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)在胃肠间质瘤组织中的表达,探讨Pin1及Cyclin D1在胃肠间质瘤治疗中的应用潜力。方法通过免疫组织化学来定性检测55例胃肠间质瘤组织及其瘤旁正常组织中Pin1、Cyclin D1蛋白的表达情况,对阳性率进行统计分析。结果Pin1和Cyclin D1在胃肠间质瘤瘤旁组织中不表达,而在胃肠间质瘤组织中阳性表达率分别为74.5%和58.2%,Pin1和Cyclin D1在胃肠间质瘤组织中的表达阳性率明显高于瘤旁组织中的表达阳性率(P<0.05);胃肠间质瘤不同危险度组间比较差异有统计学意义(P<0.05),而在其他不同病理特征组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论Pin1与Cyclin D1在胃肠间质瘤组织中阳性表达,Pin1和Cyclin D1有望成为胃肠间质瘤有效的治疗靶标。

乳腺浸润性导管癌组织中肽基脯氨酰顺反异构酶1和细胞周期蛋白D1的表达及临床意义

目的探讨肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)在乳腺浸润性导管癌组织中的表达,分析Pin1和Cyclin D1表达与乳腺癌临床特征的相关性。方法选取2013年1月至2015年1月海南医学院第二附属医院保存的80例乳腺浸润性导管癌组织和40例癌旁正常乳腺组织标本,采用免疫组织化学法检测乳腺浸润性导管癌组织和正常乳腺组织中Pin1和Cyclin D1的表达,并分析Pin1和Cyclin D1表达与乳腺浸润性导管癌病理分级、TNM分期及淋巴结转移的相关性。结果乳腺浸润性导管癌组织中Pin1和Cyclin D1阳性表达率分别为56. 3%(45/80)、45. 0%(36/80),正常乳腺组织中Pin1和Cyclin D1阳性表达率分别为12. 5%(5/40)、20. 0%(8/40);乳腺浸润性导管癌组织中Pin1和Cyclin D1阳性表达率显著高于正常乳腺组织(χ~2=21. 001、7. 170,P <0. 05)。Pin1表达与乳腺浸润性导管癌病理学分级及淋巴结转移有关(χ~2=10. 381、4. 085,P <0. 05),与TNM分期无关(χ~2=2. 544,P> 0. 05)。Cyclin D1表达与乳腺浸润性导管癌病理学分级有关(χ~2=7. 024,P <0. 05),与TNM分期及淋巴结转移无关(χ~2=3. 236、0. 191,P> 0. 05)。乳腺浸润性导管癌组织中Pin1与Cyclin D1表达呈正相关(χ~2=4. 363,P <0. 05)。结论 Pin1和Cyclin D1在乳腺浸润性导管癌组织中表达上调,其可能与乳腺浸润性导管癌的发生、发展有关。

胃癌组织中膜转铁蛋白及肽基脯氨酰顺反异构酶的阳性表达率与临床病理参数的关系

目的分析胃癌组织中膜转铁蛋白(FPN)、肽基脯氨酰顺反异构酶(PIN1)的阳性表达率与临床病理参数的关系。方法检测深圳市龙华区中心医院2017年2月至2020年2月30例胃癌患者的胃癌组织及10例胃癌患者的正常胃黏膜组织中PIN1、FPN蛋白表达,分析其与临床病理参数的关系。结果FPN在正常胃黏膜组织中阳性表达率为80.0%,高于胃癌组织中的50.0%(P<0.05)。PIN1在胃黏膜组织中阳性表达率为20.0%,低于胃癌组织中的33.3%(P<0.05)。将30例胃癌组织标本按患者年龄、性别、胃癌TNM分期分组,各组PIN1蛋白阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05);按肿瘤淋巴结转移有无分组,2组PIN1蛋白阳性表达率比较差异有统计学意义(P<0.05)。按胃癌TNM分期分组,各组FPN蛋白阳性表达率比较差异有统计学意义(P<0.05),按年龄、性别、肿瘤淋巴结转移有无分组,各组FPN蛋白阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论胃癌组织中FPN低表达,检测FPN可反映胃癌TNM分期。同时胃癌组织PIN1表达可作为筛选高危淋巴结转移患者以及预测预后的指标。

Pin1通过调控脂质代谢关键酶影响宫颈癌细胞的增殖及凋亡

目的 探讨下调Pin1表达对宫颈癌SiHa细胞的脂质合成及增殖、凋亡的影响。方法 Western Blot检测Pin1在Hela、SiHa和H8细胞的表达情况;慢病毒转染技术构建Pin1低表达稳转细胞株,根据不同处理分为对照组(shPin1-NON)、敲低组1(shPin1-1)和敲低组2(shPin1-2),GEPIA2分析脂质代谢关键酶(ACC1、FASN)在宫颈癌及非肿瘤组织中的表达;Western Blot和qRT-PCR检测ACC1、FASN蛋白和mRNA的表达;Western Blot检测Caspase-8、BCL-2、C-myc蛋白表达;CCK-8检测细胞增殖能力;克隆形成实验检测细胞集落形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 Pin1在宫颈癌细胞中高表达,且在SiHa细胞中表达最高(P <0.05);Pin1低表达慢病毒有效下调了Pin1表达水平;宫颈癌中ACC1、FASN mRNA表达高于非肿瘤组织;shPin1-1组和shPin1-2组ACC1、FASN蛋白和mRNA表达均低于shPin1-NON组(P <0.05);shPin1-1组和shPin1-2组相较于shPin1-NON组Caspase-8蛋白表达被上调,而BCL-2、C-myc的表达均被抑制;shPin1-1组和shPin1-2组细胞增殖能力低于shPin1-NON组(P <0.05);shPin1-1组和shPin1-2组细胞集落形成能力小于shPin1-NON组(P <0.05)。shPin1-1组和shPin1-2组细胞总凋亡率相较shPin1-NON组显著增加(P <0.05)。结论 Pin1低表达有效下调宫颈癌SiHa细胞脂质代谢关键酶,抑制细胞增殖,诱发细胞凋亡,为靶向治疗宫颈癌提供新思路。

微小RNA-876-3p靶向肽基脯氨酰顺反异构酶A调控胃癌细胞增殖和顺铂耐药性的作用机制研究

目的研究微小RNA-876-3p(miR-876-3p)通过调控肽基脯氨酰顺反异构酶A(PPIA)对胃癌细胞增殖和顺铂(DDP)耐药性的影响。方法体外培养胃癌细胞MKN28,用低浓度梯度递增方法诱导MKN28细胞形成顺铂耐药性,以构建顺铂耐药细胞株(MKN28/DDP)。MKN28和MKN28/DDP细胞各包含4个实验组:阴性对照组、第1转染组(转染si-PPIA)、第2转染组(转染miR-876-3p mimics)和第3转染组(转染si-PPIA+miR-876-3p inhibitor)。用顺铂1μg·mL^-1处理各组MKN28细胞,用顺铂5μg·mL^-1处理各组MKN28/DDP细胞,培养24 h。以实时荧光定量-PCR法检测各组细胞中miR-876-3p表达水平,蛋白质印迹法检测各组细胞中PPIA蛋白的表达水平,细胞计数试剂盒法检测各组细胞增殖活力,流式细胞术检测各组细胞细胞凋亡水平。结果miR-876-3p在正常胃上皮细胞GES-1、胃癌细胞MKN28和MKN28/DDP中的相对表达量分别为1.01±0.21,0.41±0.15和0.32±0.11,MKN28与GES-1比较,差异有统计学意义(P<0.01);MKN28/DDP与MKN28比较,差异有统计学意义(P<0.05)。在表达miR-876-3p实验中,1μg·mL^-1顺铂处理MKN28,阴性对照组和第3转染组的细胞活力分别为(1.00±0.04)%,(0.65±0.03)%;这2组的细胞凋亡率(41.87±1.65)%,(68.98±4.12)%。5μg·mL^-1顺铂处理MKN28/DDP,阴性对照组和第3转染组的细胞活力分别为(1.01±0.02)%,(0.72±0.05)%;这2组的细胞凋亡率分别为(34.66±0.94)%,(56.71±3.03)%,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-876-3p可靶向结合PPIA。以1μg·mL^-1顺铂处理MKN28细胞,阴性对照组、第1转染组和第3转染组的细胞活性分别为(1.01±0.03)%,(0.58±0.04)%和(0.97±0.02)%;这3组的细胞凋亡率分别为(39.96±2.01)%,(71.12±2.98)%和(45.14±2.47)%。以5μg·mL^-1顺铂处理MKN28/DDP细胞,这3组的细胞活性分别为(1.01±0.04)%,(0.63±0.06)%和(0.94±0.05)%;这3组的细胞凋亡率分别为(31.95±1.31)%,(62.88±5.63)%和(36.84±2.11)%。上述指标:第1转染组与阴性对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);第3转染组与第1转染组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论过表达miR-876-3p可明显上调胃癌细胞对顺铂的敏感性,其机制是通过靶向下调PPIA的表达从而降低胃癌细胞增殖、增加其凋亡。

肽基脯氨酰顺反异构酶和钙结合蛋白S100A9在胃癌组织中的表达及意义

目的探讨胃癌组织中肽基脯氨酰顺反异构酶（Pinl）和钙结合蛋白S100A9的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学法检测46例胃癌患者手术切除的癌组织和癌旁组织中Pinl和S100A9表达水平。结果Pinl胃癌组织的阳性表达率为36．96％（17／46），明显高于癌旁组织阳性表达率17．39％（8／46），两者差异有统计学意义（P〈0．05），S100A9胃癌组织的阳性表达率为63．04％（29／46），明显高于癌旁组织的阳性表达率28．26％（13／46），两者差异有统计学意义（P〈0．01）。Pinl表达水平与胃癌TNM分期、淋巴结转移有关（P〈0．05），S100A9表达水平与胃癌组织学分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关（P〈0．05）。结论PINl和S100A9的过度表达与胃癌的发生、发展和转移密切相关。