人亲环素18抑制肌酸激酶的去折叠

新生肽链折叠过程中容易出现错误折叠与聚沉,从而导致折叠病等病理现象.分子伴侣具有辅助其他蛋白质正确折叠,保护蛋白质分子结构的功能.本文选用人肌肌酸激酶为靶蛋白,研究了肽基脯氨酰顺反异构酶人亲环素18(human cyclophilin 18,hCyp18)对人肌肌酸激酶去折叠的作用,发现hCyp18能够抑制人肌肌酸激酶在热变性与化学变性过程中的失活与构象变化,并抑制人肌肌酸激酶在化学变性过程中的聚沉,因此推断hCyp18具有针对人肌肌酸激酶的分子伴侣功能.本文同时研究了hCyp18与人肌肌酸激酶的结合作用,对hCyp18的作用机制进行了初步探讨.

人亲环素A基因克隆及在大肠杆菌中表达

目的 :用基因重组技术表达人亲环素 A( Cy PA) ,以避免从人组织材料中提取纯化该蛋白的麻烦。 方法 :应用反转录聚合酶链反应 ( RT- PCR)技术从人淋巴细胞系 ( MT4 )总 RNA中扩增得到 Cy PA基因片段 ,并用重组 DNA技术对该基因片段进行克隆 ,构建表达载体 ,转入大肠杆菌进行表达。 结果 :DNA序列分析表明 ,得到的基因片段与设计编码 Cy PA的结构基因序列完全相同。所构建的表达载体 p ET11/Cy PA转入大肠杆菌获得表达 ,重组蛋白表达量占菌体可溶性蛋白的 4 1% ,经测定具有肽基脯氨酸顺 /反异构酶活性。 结论 :利用基因重组技术使大肠杆菌高效表达出有生物活性的人 Cy PA。

PPIL1蛋白在肝癌组织的表达及临床意义

目的研究肝癌组织中肽酰脯氨酰异构酶(亲环素)样1(PPIL1)表达水平,及其在肝癌组织中表达的临床意义。方法运用免疫组织化学方法和实时荧光定量PCR技术,检测80例肝细胞癌及癌旁组织中PPIL1蛋白和mRNA表达情况,并分析其与临床指标、病理学特征的关系。结果 PPIL1蛋白主要表达于细胞浆,在肝癌组织中表达水平明显高于癌旁组织,在肿瘤分期较晚、分化程度较差以及有转移的病例中表达较高,差异有统计学意义(P<0.05),PPIL1mRNA表达水平与蛋白表达水平趋势一致(P<0.05)。结论在肝癌组织中,PPIL1高表达对肿瘤的发生发展和浸润转移起到一定的促进作用,是潜在的治疗靶点。

解脂耶氏酵母yPPI基因的克隆与功能研究

用硫酸二甲酯诱变解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)野生型菌株,获得了不能在油酸作惟一碳源的培养基上生长的突变株。通过功能互补突变株在含油酸的培养基上的生长,从解脂耶氏酵母基因组文库中克隆了一个基因。同源性比较发现,该基因产物与广泛分布于各种生物体中的亲环素类的肽基脯氨酰顺反异构酶(PPI)有较高的同源性,因此将该基因命名为yPPI。电子显微镜下观察发现,yPPPI基因突变株发生了一系列明显的结构变化,在其细胞核的周围出现了许多膜系结构,且细胞内没有过氧化物酶体．免疫荧光分析表明,yPPI基因突变细胞的过氧化物酶体基质蛋白能够正常地合成,但它们不是定位于过氧化物酶体内,而是均匀地分布于细胞质中。这些结果表明yPPI的存在与过氧化物体的形成和过氧化物酶体基质蛋白的正确定位有着密切的关系,证明了亲环素类肽基脯氨酰顺反异构酶对过氧化物酶体的生物合成作用。