肽基脯氨酰顺反异构酶1在肝癌中的研究进展

肽基脯氨酰顺反异构酶1(PIN1)在肝癌中异常表达,作为肿瘤催化分子在肝癌的增殖、侵袭、凋亡和血管生成等过程中发挥着重要作用。该文从PIN1的分子结构与功能、PIN1在肝癌中的表达及其在肝癌发生、发展中的作用等几方面进行综述。

系统性红斑狼疮患者外周血肽基脯氨酰顺反异构酶1与白细胞介素-17的分析及其临床意义

目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)活性的表达与细胞因子白细胞介素-17(IL-17)水平相关性及其临床意义。方法:选取98例SLE患者,其中42例为SLE初治患者,另选43例健康体检者为健康对照组。采用酶联免疫吸附试验检测所有研究对象入组时及98例SLE患者治疗后3个月血清中Pin1、IL-17水平,分析98例SLE患者血清Pin1水平变化及与细胞因子IL-17、SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分、实验室指标的相关性,分析42例SLE患者初治时、治疗后3个月时其水平变化及意义。结果:①SLE稳定组外周血的Pin1表达水平明显高于健康对照组(H=28.913,P<0.05),SLE活动组外周血的Pin1表达水平明显高于SLE稳定组(H=31.738,P<0.05)。②SLE患者Pin1与IL-17、SLEDAI评分呈正相关(r=0.640,P<0.05;r=0.461,P<0.05),与抗ds-DNA抗体、C反应蛋白、红细胞沉降率无明显相关性。③SLE初治组外周血的Pin1表达水平明显高于健康对照组(H=55.568,P<0.05),SLE初治组治疗后3个月的Pin1表达水平较治疗前下降(H=28.136,P<0.05)。④血清Pin1水平在有肾脏损害的SLE患者表达增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:SLE患者外周血Pin1过表达,IL-17增高且与其呈正相关,经过治疗能显著降低Pin1活性,降低IL-17细胞因子水平,抑制Pin1蛋白表达,可能会延缓SLE的进展,Pin1抑制剂可能成为SLE治疗的新靶点之一。

肽基脯氨酰顺反异构酶1和细胞周期蛋白D1在食管鳞状细胞癌中的表达

目的研究肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)在食管鳞状细胞癌中的表达及意义。方法通过免疫组织化学SP法检测37例食管鳞状细胞癌标本癌组织及癌旁组织中Pin1与Cyclin D1蛋白的表达,分析各临床病理参数对食管鳞状细胞癌组织中Pin1及Cyclin D1表达的影响。结果 Pin1在癌旁正常组织中不表达或呈微弱的核表达,在癌组织中呈阳性表达;Cyclin D1在癌旁正常组织中不表达,在癌细胞的细胞质或细胞核内呈阳性或强阳性表达。有淋巴结转移者Pin1表达较未转移者高,差异有统计学意义(P<0.05),分化程度、年龄、性别及TNM分期等临床病理参数对Pin1的表达无影响(P>0.05)。分化程度高者Cyclin D1表达较低,分化程度低者Cyclin D1表达较高,差异有统计学意义(P<0.05),年龄、性别及肿瘤分期等临床病理参数对Cyclin D1的表达无明显影响(P>0.05)。结论 Pin1和Cyclin D1在食管鳞状细胞癌中的表达明显增高,二者相互作用调节细胞周期,促进食管鳞状细胞癌的发生。

肽基脯氨酰顺反异构酶1对喉癌细胞系Hep-2细胞生物学行为的影响

目的探讨肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)对喉癌细胞系Hep-2细胞中心体扩增以及生物学行为的影响。方法培养人喉癌细胞系Hep-2细胞,构建、转染Pin1 siRNA并分组。Pin1过表达分为转染pcDNA3.1组(NC组)、转染pcDNA3.1-Pin1组(Pin1组)、转染pcDNA3.1-Pin1后加核转录因子(NF-κB/p65)抑制剂(BAY11-7082)组(Pin1+7082组)。Pin1干扰分为转染阴性对照组(NC组)、转染siRNA组(Si-Pin1组)、转染siRNA后加NF-κB/p65激活剂(IL-1β)组(Si-Pin1+IL-1β组)。Western blotting检测Pin1、CDK2及NF-κB/p65蛋白表达,实时PCR检测Pin1及CDK2基因表达,免疫荧光实验检测细胞中心体扩增及NF-κB/p65核转位,流式细胞仪检测Hep-2细胞周期、凋亡、克隆形成,CCK-8实验检测Hep-2细胞增殖能力,Transwell及划痕实验检测Hep-2细胞的迁移能力。结果Pin1过表达促进中心体复制异常、克隆形成、细胞迁移、细胞周期G1/S转化,NF-κB/p65核转位以及CDK2的表达;NF-κB/p65抑制剂能够减弱这些效应。下调Pin1表达能够抑制中心体异常复制、克隆形成、细胞迁移、细胞周期G1/S的转化,NF-κB/p65入核以及CDK2的表达;NF-κB/p65激活剂能够逆转这些作用。结论Pin1可能经NF-κB通路上调CDK2的表达来影响Hep-2细胞的生物学行为。

肽基脯氨酰顺反异构酶及细胞周期蛋白D1在胃肠间质瘤中表达的临床意义

目的研究肽基脯氨酰顺反异构酶(Pin1)与细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)在胃肠间质瘤组织中的表达,探讨Pin1及Cyclin D1在胃肠间质瘤治疗中的应用潜力。方法通过免疫组织化学来定性检测55例胃肠间质瘤组织及其瘤旁正常组织中Pin1、Cyclin D1蛋白的表达情况,对阳性率进行统计分析。结果Pin1和Cyclin D1在胃肠间质瘤瘤旁组织中不表达,而在胃肠间质瘤组织中阳性表达率分别为74.5%和58.2%,Pin1和Cyclin D1在胃肠间质瘤组织中的表达阳性率明显高于瘤旁组织中的表达阳性率(P<0.05);胃肠间质瘤不同危险度组间比较差异有统计学意义(P<0.05),而在其他不同病理特征组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论Pin1与Cyclin D1在胃肠间质瘤组织中阳性表达,Pin1和Cyclin D1有望成为胃肠间质瘤有效的治疗靶标。

乳腺浸润性导管癌组织中肽基脯氨酰顺反异构酶1和细胞周期蛋白D1的表达及临床意义

目的探讨肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)在乳腺浸润性导管癌组织中的表达,分析Pin1和Cyclin D1表达与乳腺癌临床特征的相关性。方法选取2013年1月至2015年1月海南医学院第二附属医院保存的80例乳腺浸润性导管癌组织和40例癌旁正常乳腺组织标本,采用免疫组织化学法检测乳腺浸润性导管癌组织和正常乳腺组织中Pin1和Cyclin D1的表达,并分析Pin1和Cyclin D1表达与乳腺浸润性导管癌病理分级、TNM分期及淋巴结转移的相关性。结果乳腺浸润性导管癌组织中Pin1和Cyclin D1阳性表达率分别为56. 3%(45/80)、45. 0%(36/80),正常乳腺组织中Pin1和Cyclin D1阳性表达率分别为12. 5%(5/40)、20. 0%(8/40);乳腺浸润性导管癌组织中Pin1和Cyclin D1阳性表达率显著高于正常乳腺组织(χ~2=21. 001、7. 170,P <0. 05)。Pin1表达与乳腺浸润性导管癌病理学分级及淋巴结转移有关(χ~2=10. 381、4. 085,P <0. 05),与TNM分期无关(χ~2=2. 544,P> 0. 05)。Cyclin D1表达与乳腺浸润性导管癌病理学分级有关(χ~2=7. 024,P <0. 05),与TNM分期及淋巴结转移无关(χ~2=3. 236、0. 191,P> 0. 05)。乳腺浸润性导管癌组织中Pin1与Cyclin D1表达呈正相关(χ~2=4. 363,P <0. 05)。结论 Pin1和Cyclin D1在乳腺浸润性导管癌组织中表达上调,其可能与乳腺浸润性导管癌的发生、发展有关。

三氧化二砷通过降低Pin1表达及调节Wnt/β-连环素通路抑制肝癌细胞增殖

目的探讨三氧化二砷(ATO)在肝癌中对肽基脯氨酰基顺反异构酶NIMA相互作用蛋白1(Pin1)表达的抑制作用及其分子机制。方法使用DepMap数据库和GEPIA数据库中的数据分析Pin1在人肝癌细胞系和肝癌组织中的表达情况。以人肝癌细胞系Huh7和小鼠肝癌细胞系H22为细胞模型,通过ATP法检测ATO对肿瘤细胞活力的影响;通过蛋白质印迹法、免疫荧光染色和qPCR检测ATO对Pin1在蛋白质水平和转录水平表达的作用。用氯喹预处理Huh7细胞抑制溶酶体途径后,通过蛋白质印迹法和免疫荧光染色检测ATO对Pin1表达的调控作用。通过皮下荷瘤小鼠模型和免疫组织化学染色验证ATO在体内对肝癌细胞生长和Pin1表达的影响。采用RNA测序分析ATO可能影响的信号通路,并通过蛋白质印迹法和qPCR验证。结果在DepMap数据库23种人肝癌细胞系和GEPIA数据库人肝癌组织中,Pin1的表达均呈现较高水平。在体外实验中,ATO处理后Huh7和H22细胞的细胞活力均降低,细胞中Pin1在蛋白质和转录水平的表达均降低,但用氯喹抑制溶酶体途径逆转了ATO对Pin1表达的影响。在皮下荷瘤小鼠模型中,ATO表现出一定的抗肿瘤效果,免疫组织化学染色显示ATO处理后Pin1表达和肿瘤细胞增殖受到抑制。在ATO处理的H22细胞中Wnt/β-连环素通路相关基因富集,抑制H22细胞中Pin1的表达后β-连环素表达减少。结论ATO通过溶酶体途径抑制Pin1表达,以及影响Wnt/β-连环素信号通路来抑制肝癌细胞增殖。

光谱法结合计算模拟探究胡桃醌与脯氨酰顺反异构酶1的相互作用

胡桃醌为胡桃科核桃属植物胡桃楸(Jugland mandshurica Maxim)和核桃(Juglans regia L)中存在的重要活性物质,脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)为细胞内主要起信号传导作用的小分子蛋白。为探究胡桃醌对Pin1的抑制机理,通过定点突变、计算模拟以及多种光谱学技术研究了胡桃醌与Pin1的相互作用。荧光光谱显示,胡桃醌可以有效地淬灭Pin1内源荧光。293 K温度时,其淬灭常数(Ksv)为1.36×10^(4) L/mol,结合常熟(Ka)为2.32×10^(4) L/mol,结合数(n)为0.85,随着温度升高,其Ksv和Ka逐渐降低,表明其淬灭机制为静态淬灭,n值接近1则表明两者可形成1:1复合物。同步荧光光谱表明,胡桃醌与Pin1结合会促使Pin1酪氨酸和色氨酸残基周围微环境疏水性降低,极性增加。圆二色谱揭示胡桃醌与Pin1结合会导致Pin1中的α-螺旋结构减少。热力学参数显示,在293 K条件下,ΔH=12.97 kJ/mol,ΔS=127.83 J/(mol·K),ΔG=-24.49 kJ/mol,表明胡桃醌与Pin1可自发结合,其主要作用力为疏水作用力。分子对接显示,氢键和范德华力在两者作用过程中同样扮演着重要角色。分子对接、定点突变以及分子动力学模拟进一步揭示Pin1催化残基Cys113在胡桃醌结合到Pin1过程中发挥着至关重要的作用。

脯氨酰顺反异构酶1调控低氧诱导内皮间充质转化的作用及机制

目的探讨低氧条件下肺动脉内皮细胞(PAECs)中脯氨酰顺反异构酶(Pin1)的表达及其调控内皮间充质转化(EndMT)的作用及机制。方法利用低氧(1%O_(2))24 h建立低氧诱导的EndMT细胞模型。将PAECs分为4组,常氧组(Nor)、常氧+Pin1慢病毒敲低组(Nor+Pin1-shRNA)、低氧组(Hyp)、低氧+Pin1慢病毒敲低组(Hyp+Pin1-shRNA),分别培养24 h。应用5-溴-2-脱氧尿嘧啶(EdU)方法检测各组细胞增殖,细胞迁移实验(Transwell)检测细胞迁移。蛋白印迹法(Western blot)检测Pin1、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达,并检测EndMT相关标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、锌指转录因子(Snail)以及转化生长因子-β1(TGF-β1)相关信号通路的表达。多组间均数比较采用单因素方差分析。结果Nor+Pin1-shRNA组Pin1的蛋白相对表达量(0.292±0.061)明显低于Nor组(0.798±0.054),Hyp+Pin1-shRNA组Pin1的蛋白相对表达量(0.475±0.039)明显低于Hyp组(1.403±0.076),差异有统计学意义(F=271.983,P<0.01);Hyp组(1.135±0.086)和Hyp+Pin1-shRNA组(1.043±0.054)HIF-1α的蛋白相对表达量明显高于Nor组(0.735±0.042),差异有统计学意义(F=60.954,P<0.01);Hyp组(20.500±1.871)EdU阳性细胞数明显高于Nor组(7.167±1.169),Hyp+Pin1-shRNA组(9.327±1.633)EdU阳性细胞数明显低于Hyp组,差异有统计学意义(F=128.416,P均<0.01);Hyp组(464.500±10.599)细胞数明显高于Nor组(179.250±11.955),Hyp+Pin1-shRNA组(320.000±17.607)细胞数明显低于Hyp组,差异有统计学意义(F=501.244,P<0.01);Hyp组(1.205±0.061)α-SMA的蛋白相对表达量明显高于Nor组(0.725±0.089),Hyp+Pin1-shRNA组α-SMA的蛋白相对表达量(0.870±0.058)明显低于Hyp组,差异有统计学意义(F=50.820,P<0.01);Hyp组(0.547±0.066)VE-cadherin的蛋白相对表达量明显低于Nor组(0.975±0.079),Hyp+Pin1-shRNA组(0.797±0.051)VE-cadherin的蛋白相对表达量明显高于Hyp组,差异有统计学意义(F=27.934,P<0.01);Hyp组Snail(0.955±0.063)、TGF-β1(1.042±0.087)、p-Smad2(1.180±0.062)的蛋白相对表达量明显高于Nor组(0.510±0.036、0.647±0.053、0.807±0.053),Hyp+Pin1-shRNA组Snail(0.492±0.061)、TGF-β1(0.792±0.051)、p-Smad2(0.910±0.036)的蛋白相对表达量明显低于Hyp组,差异有统计学意义(F=82.842、38.131、48.617,P<0.01)。结论低氧条件下,PAECs中Pin1表达升高,并发生EndMT,抑制Pin1可减弱EndMT,其机制是Pin1通过影响TGF-β1-Smad信号通路,促进Snail等转录因子的表达。

宫颈癌细胞株和宫颈上皮组织中Pin1和Cyclin D1的表达及临床意义

背景与目的:肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1在人类多种肿瘤中过表达,Pin1过表达可增强CyclinD1表达,在肿瘤发生发展中起重要作用。本研究拟探讨宫颈癌细胞株及宫颈上皮组织中Pin1、CyclinD1的表达及其临床意义。方法:应用RT-PCR、Westernblot法检测HeLa、SiHa、C33a、Caski细胞中Pin1和CyclinD1基因蛋白表达,免疫组化法检测10例正常宫颈、21例宫颈上皮内瘤样病变、57例浸润癌组织中Pin1和CyclinD1的表达状况,评价其临床意义。结果:HeLa、SiHa、C33a、Caski细胞存在不同程度Pin1mRNA及蛋白过表达(P<0.05)。正常宫颈、宫颈上皮内瘤样病变、浸润癌组织中Pin1蛋白表达逐渐增强,分别为0%、47.62%、64.91%(P<0.05)。Pin1蛋白过表达与宫颈癌临床分期、病理分级、淋巴结转移无关(P>0.05);但宫颈腺癌组织中Pin1表达明显高于鳞癌(P<0.05)。Pin1过表达与CyclinD1表达呈显著正相关(P<0.05)。结论:Pin1在宫颈癌细胞株及宫颈癌组织中存在mRNA及蛋白水平上的过表达,Pin1过表达与CyclinD1表达密切相关,Pin1和CyclinD1异常表达可能参与宫颈癌的发生发展。

慢病毒介导的shRNA对A549细胞Pin1表达的干扰作用

目的构建Pin shRNA慢病毒载体,建立稳定抑制肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)表达的A549细胞系。方法根据查阅文献获得Pin1shRNA干扰靶点序列并插入pLenR-GPH载体,构建pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体,随后转入人胚肾HEK293T细胞中,收集其上清进行病毒滴度测定,再行慢病毒的包装,将获得的慢病毒毒液感染A549细胞。通过实时定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测Pin1在不同组的表达抑制情况。结果经限制性内切酶鉴定及测序分析,成功构建了pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体质粒,包装并得到高滴度的病毒颗粒。通过qRT-PCR和Western blot法检测显示,与对照组相比,pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体感染的A549细胞中Pin1的表达在mRNA和蛋白水平均有所下降。结论慢病毒介导的shRNA能够有效下调A549细胞中Pin 1的表达。

Pin1在宫颈癌中过表达及其与Ki67关系的研究

目的:探讨宫颈癌中肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1表达、与Ki67的相关性及其临床意义。方法:应用RT-PCR和免疫组化技术检测宫颈癌组织中Pin1mRNA和蛋白表达水平及其与Ki67蛋白表达的相关性。结果:1)宫颈癌组织中Pin1mRNA表达明显高于正常宫颈组织(P<0.05);2)从正常宫颈到CIN再到浸润癌Pin1蛋白表达逐渐增强(P<0.05);3)Pin1蛋白过表达与临床分期、病理分级、淋巴结转移无明显相关(P>0.05);但宫颈腺癌Pin1表达明显高于宫颈鳞癌(P<0.05);4)Pin1过表达与Ki67表达呈显著正相关(P<0.05)。结论:1)Pin1过表达与宫颈癌细胞增殖有关,参与宫颈癌发生发展;2)Pin1过表达可作为宫颈癌诊断的辅助指标。

益智健脑颗粒对快速老化小鼠SAMP8海马Pin1和HMGB1 mRNA表达的影响

目的:研究益智健脑颗粒对快速老化小鼠SAMP8海马肽基脯氨酰顺反异构酶(peptidylprolyl-cis-trans isomerase A,Pin1)和高迁移率族蛋白B1(high mobility group box1,HMGB1)mRNA表达的影响。方法:6月龄快速老化小鼠SAMP8随机分为中药治疗组和模型组,6月龄正常老化小鼠SAMR1为正常对照组。中药组以益智健脑颗粒浓缩液灌胃;正常对照组和模型组以双蒸水灌胃。8周后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测海马组织中Pin1和HMGB1 mRNA的表达。结果:与模型组比较,中药治疗组Pin1 mRNA相对表达量上调(P<0.05);HMGB1mRNA相对表达量下调(P<0.05)。结论:益智健脑颗粒可能通过上调Pin1 mRNA表达,下调HMGB1 mRNA表达,来达到防治阿尔茨海默病的作用。

Pin1蛋白与上皮间质转化相关蛋白在宫颈鳞癌中的表达及意义

目的探讨肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)蛋白在宫颈鳞癌(CSCC)组织中的表达及与上皮间质转化相关蛋白E-钙粘素(E-cadherin)、N-钙粘素(N-cadherin)、β-连接蛋白(β-catenin)和波形蛋白(Vimentin)表达关系及意义。方法采用免疫组织化学SP法检测89例宫颈鳞癌组织及相应癌旁组织中Pin1、E-cadherin、Ncadherin、β-catenin和Vimentin蛋白表达。结果宫颈鳞癌组织中Pin1蛋白的阳性表达率(73.0%)明显高于正常宫颈组织(27.0%),且随着宫颈病变的进展,Pin1的表达逐渐增加,尤其在低分化鳞癌及伴有淋巴结转移的宫颈鳞癌中Pin1上调更加明显,差异有统计学意义(P<0.05);β-catenin、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白在宫颈鳞癌中阳性表达率分别为37.1%、20.2%、66.3%和75.3%,随着宫颈病变的进展,上皮表面标志物E-cadherin和β-catenin表达明显下调(P<0.05),而间质细胞表型N-cadherin和Vimentin蛋白表达明显上调(P<0.05)。在宫颈鳞癌中Pin1与E-cadherin和β-catenin蛋白的表达呈负相关(r=-0.450,P<0.001;r=-0.367,P=0.003),而与N-cadherin和Vimentin蛋白的表达呈正相关(r=0.491,P=0.001;r=0.299,P=0.017)。结论宫颈鳞癌组织中Pin1蛋白表达上调可能是影响肿瘤细胞上皮间质转化相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、β-catenin和Vimentin在细胞表达的重要原因之一,其可能反映宫颈鳞癌的发病机制。

肿瘤发生的催化分子——肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1

Pin1是一独特的肽基脯氨酰顺反异构酶,它专一性催化已磷酸化的丝／苏-脯氨酰顺／反异构,导致功能改变。这种构型转变是新发现的蛋白磷酸化后调节机制,主要关系到细胞增殖和转化。研究表明,Pinl在人类多种肿瘤中过表达,可加强和催化多种致癌信号,被称为肿瘤发生发展的催化分子。

Pin1:肿瘤形成的催化分子和潜在的治疗靶点

肽基脯氨酰异构酶1(peptidyl-prolyl isomerase1,Pin1)能特异性地催化磷酸化的丝/苏-脯氨酸基序发生异构,改变底物蛋白的构象,调节底物蛋白的功能。Pin1含有两个结构功能域:一个是N端的色氨酸-色氨酸中心区WW,另一个是C端的肽基脯氨酰异构酶PPlase活性区。Pin1在非肿瘤组织中呈低表达或无表达,但在多种肿瘤组织中呈过表达,并受到以E2F(腺病毒E2启动子相关细胞转录因子)为主的转录水平的调节。Pin1作用于多种底物如p53、c-Jun、cyclinD1等,通过催化异构改变底物的结构和功能,促进细胞增殖和肿瘤形成,阻断它的表达可以抑制肿瘤细胞的增殖,促进调亡。

沉默Pin1基因对子宫颈癌SiHa细胞生物学性能的影响

目的探讨肽基脯氨酰同分异构酶(peptidyl-prolylcis/trans isomerase,Pin1)基因对子宫颈癌SiHa细胞生物学性能的影响。方法实验设立4组:空白对照组(正常培养的SiHa细胞)、阴性对照组(SiHa细胞转染随机序列)和Pin1siRNA1组、Pin1siRNA2组(转染siRNA序列1、2),采用基因RNA干扰技术下调子宫颈癌SiHa细胞中Pin1的表达;qRT-PCR和Western blot法检测Pin1 mRNA和Pin1蛋白水平的变化。Transwell小室体外实验检测Pin1基因对SiHa细胞侵袭、迁移能力的影响;应用流式细胞术分析其对SiHa细胞周期及凋亡的影响。结果 SiHa细胞转染基因Pin1siRNA干扰SiHa细胞后Pin1mRNA和Pin1蛋白表达水平明显降低;Transwell小室体外实验表明,Pin1siRNA1、Pin1siRNA2组蛋白表达下调后细胞侵袭、迁移能力降低;流式细胞术结果提示,与空白对照组、阴性对照组相比,Pin1基因被干扰后细胞阻滞在G0/G期,细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。结论降低Pin1表达能明显抑制宫颈癌细胞的侵袭、迁移能力。Pin1参与了SiHa细胞的凋亡过程,并且随Pin1表达量的高低来调控肿瘤细胞的周期和凋亡程度。

Pin1在乳房外Paget病的表达及意义

目的:分析Pin1染色后乳房外Paget病组和对照组切片中Pin 1的表达及意义。方法:采用免疫组化染色的方法,对27例乳房外Paget病和10例正常皮肤标本进行Pin1免疫组化染色,并将乳房外Paget病组按照浸润深度分成三组分别观察。结果:乳房外Paget病组阳性率74.07%,其中51.85%为高表达,对照组阳性率30%,均为低表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。乳房外Paget病标本按照浸润深度分成三组进行比较,差异来自对照组与乳房外Paget病各组之间,在乳房外Paget病组内部进行两两比较无统计学意义。结论:Pin1在正常皮肤组织中不表达或极低表达,在乳房外Paget病患者皮损中的表达增高。

Pin1基因真核表达载体的构建及在宫颈癌HeLa细胞中的表达

目的构建一种含人肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1的质粒,以绿色荧光蛋白作为报告基因,观察其在宫颈癌HeLa细胞中的表达。方法从人宫颈癌HeLa细胞中,以RT-PCR方法扩增出人Pin1基因全长cDNA序列(CDS),插入增强绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1,脂质体法转染HeLa细胞,荧光显微镜下观测绿色荧光蛋白的表达,免疫印迹法检测GFP-Pin1蛋白的表达。结果RT-PCR扩增出人Pin1基因;构建pEGFP-C1-Pin1重组质粒,体外成功转染入宫颈癌HeLa细胞,在荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白的表达,免疫印迹法证实存在GFP-Pin1蛋白高表达;经G418筛选获得单细胞克隆。结论重组质粒pEGFP-Pin1体外转染HeLa细胞后,目的基因能够在细胞内有效表达,检测方法简便可靠,为利用转染该目的基因的细胞进行下一步研究提供了实验基础。

肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1与心血管疾病的研究进展

Pinl是肽基脯氨酰顺反异构酶（peptidyl．prolylcis．transisomerase，PPlase）微小菌素蛋白家族成员之一，由哈佛大学医学院的卢坤平教授于1996年首次发现并命名，是目前发现的人体内唯一能够识别磷酸化的丝氨酸／苏氨酸．脯氨酸（pSer／Thr-Pro）基序的顺反异构酶。Pinl蛋白编码基因定位于19p13，由163个氨基酸组成，相对分子质量为18000，含WW和PPlase两个结构域，WW结构域特异结合底物蛋白的pSer／Thr-Pro基序，PPIase结构域催化其肽键发生顺反异构，从而改变靶蛋白的构象，调节靶蛋白的活性、稳定性、磷酸化水平、亚细胞定位及与其他蛋白质之间的相互作用，参与调控细胞周期、基因转录和信号转导等生命活动过程。