泰山赤灵芝肽多糖的化学研究

从泰山赤灵芝中分离得到７个肽多糖，对主要成分化学研究证明ＴＧＬＰ２分子量２０９×１０４，为β（１→３）（１→４）连接的甘露葡聚糖肽，ＴＧＬＰ３分子量４５×１０４，为β（１→３）（１→４）（１→６）甙键连接的葡聚糖肽，并有α甙键存在，ＴＧＬＰ６分子量３２×１０４，为β（１→３）（１→４）甙键相连的葡聚糖肽，ＴＧＬＰ７分子量１０×１０４，为β（１→３）（１→４）（１→６）糖甙键的半乳聚糖肽。

灵芝肽多糖生物活性初探

从人工培养的灵芝菌丝体中分离纯化得到灵芝肽多糖(简称GPP)。经测定,GPP分子量为140000,单糖组成为木糖、葡萄糖、半乳糖及半乳糖醛酸。GPP分子中含蛋氨酸、赖氨酸等13种氨基酸。动物实验表明,GPP能显著提高小鼠腹腔吞噬细胞的吞噬能力,增强体液免疫和红细胞免疫功能,并能提高红细胞中超氧化物岐化酶(SOD)的活性。

菌草灵芝多糖肽对闽西南黑兔生长性能、血液生化指标及免疫机能的影响

【目的】研究日粮中添加菌草灵芝多糖肽(JCGLPP)对闽西南黑兔生长性能、血液生化指标及免疫功能的影响,为JCGLPP在肉兔中的应用提供依据。【方法】选取(33±2)d、初始体质量(655.65±25.90)g、健康状况良好的断奶闽西南黑兔公兔100只,随机分为4组,对照组饲喂基础饲粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别饲喂在基础饲粮中添加50,100和150 mg/kg JCGLPP的日粮,56 d后统计腹泻率和死亡率,测算平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)以及料重比(F/G);屠宰后取背腰最长肌,测定pH值、滴水损失率和剪切力;采集血清,测定总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)质量浓度,尿素氮(UN)、丙二醛(MDA)浓度,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及IgG、IgA、IgM和IL-6质量浓度;计算心脏、肝脏、肾脏、圆小囊、脾脏、胸腺和蚓突器官指数;测定十二指肠、空肠、回肠黏膜炎性因子IL-1α、IL-2和分泌型免疫球蛋白(sIgA)质量浓度及肠道淀粉酶、纤维素酶和胰蛋白酶活性。【结果】①各组间兔的终末体质量、平均日增重、平均采食量和料重比均无显著差异(P>0.05);对照组兔的腹泻率和死亡率最高,Ⅱ组兔的腹泻率显著低于对照(P<0.05)。②试验组兔肌肉的pH、滴水损失和剪切力均与对照无显著差异(P>0.05)。③Ⅱ组兔血液中的TP、ALB质量浓度及SOD、GSH-Px活性显著高于对照(P<0.05),而UN和MDA浓度显著低于对照(P<0.05)。④Ⅱ组兔血液中的IgG、IgA、IgM质量浓度均显著高于对照(P<0.05),而IL-6质量浓度各组差异不显著(P>0.05)。⑤各组兔免疫器官指数差异均不显著(P>0.05);试验组兔十二指肠、空肠、回肠IL-1α、IL-2和sIgA质量浓度大多显著高于对照(P<0.05),肠道淀粉酶活性均显著低于对照(P<0.05),Ⅰ组兔的肠道纤维素酶和胰蛋白酶活性、Ⅱ组兔的肠道胰蛋白酶活性显著高于对照(P<0.05)。【结论】JCGLPP对闽西南黑兔的促生长作用不明显,但能提高机体的抗氧化和免疫能力,降低腹泻率和死亡率,添加量以100 mg/kg为宜。

菌草灵芝多糖肽对Caco-2细胞MDR1、MRP2基因表达水平的影响

使用CCK-8比色法研究菌草灵芝多糖肽(JCGLPP)对人结肠腺癌上皮细胞(Caco-2)存活率的影响;采用PCR检测JCGLPP作用不同时间后对Caco-2细胞中P-糖蛋白的编码基因MDR1和多药耐药相关蛋白-2的编码基因MRP2表达水平的影响.结果显示:0.1~500μg·mL^(-1)JCGLPP对Caco-2细胞无毒性;10μg·mL^(-1)JCGLPP作用1~48 h能抑制MDR1基因的表达,对MRP2基因的表达呈先抑后扬的趋势.表明JCGLPP可抑制MDR1基因的表达,对MRP2基因表达的影响与其作用时间有关.

从浓缩枣汁超滤截留液中提取金丝小枣多肽和多糖

本实验主要是从浓缩枣汁超滤截留液中提取金丝小枣多肽和多糖,具体包括浓缩枣汁超滤截留液经复合蛋白酶酶解,形成枣多肽;纳滤膜分离:控制枣多肽分子质量在1000Da以下,对酶解不到位的枣蛋白截留,同时进一步纯化枣多肽;纳滤透过液为枣多肽,纳滤截留液为枣多糖。采用截留分子量为150Da的纳滤膜对多肽液进行脱盐处理,真空浓缩、冷冻干燥,得到枣肽粉。枣多糖经脱色、除蛋白、浓缩、喷雾干燥、粉碎、包装后即为成品枣多糖。

黄精多糖肽的单糖组成和抗氧化活性

利用水提醇沉法提取黄精多糖肽,三氯乙酸法、透析法和阴离子交换柱层析法分离纯化黄精多糖肽;GC-MS分析了黄精多糖肽的单糖组成;Fenton法、邻苯三酚自氧化法和磷钼络合物法分别研究了黄精多糖肽对羟基自由基、超氧阴离子清除和总抗氧化能力。结果表明:黄精中多糖肽的含量为0.34%,多糖肽中多糖和蛋白质的比率为5.4∶1;黄精多糖肽的单糖组成主要是鼠李糖、阿拉伯糖、D-木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖等,其相对百分含量分别为:2.12%、1.81%、2.51%、65.4%、14.3%、13.8%。黄精多糖肽在一定范围内随着浓度的增高对羟基自由基的清除率、对超氧阴离子的清除率逐渐增高,总抗氧化活性也随黄精多糖肽浓度的增高而增高;其对羟基自由基和超氧阴离子的清除率高于Vc,但总抗氧化活性远低于VC的总抗氧化活性。

西洋参多糖肽对糖尿病小鼠降血糖血脂及抗氧化作用研究

为探讨西洋参多糖肽对糖尿病小鼠降血糖、血脂及抗氧化的作用功效。采用四氧嘧啶诱导糖尿病模型小鼠,以不同剂量(100、200、400mg/(kg·d))的西洋参多糖肽对小鼠进行灌胃,观察各试验小鼠体质量、空腹血糖浓度、糖耐量的变化、血脂水平以及血清抗氧化能力情况。结果表明,西洋参多糖肽可减缓糖尿病模型小鼠体质量的负增长,中、高剂量组体质量极显著高于模型对照组(P<0.01);降低糖尿病模型小鼠的血糖,且与处理浓度和时间呈正相关性,高剂量组血糖浓度极显著低于模型对照组(P<0.01);抑制葡萄糖引起的血糖升高,在缓解糖尿病小鼠糖耐量降低方面作用显著,低剂量组显著低于模型对照组(P<0.05),中、高剂量组极显著低于模型对照组(P<0.01);有效降低糖尿病小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量及提高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量,高剂量组TC、TG含量极显著低于模型对照组(P<0.01),HDL-C含量极显著高于模型对照组(P<0.01);降低血清中丙二醛(MDA)含量,提高超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,各剂量组与模型对照组比较差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)。可见,西洋参多糖肽具有降低血糖、调节脂代谢和抗脂质过氧化作用。

灵芝多糖肽对小鼠巨噬细胞自由基的清除作用

目的 :研究灵芝多糖肽对小鼠腹腔巨噬细胞自由基的清除作用。方法 :用四氧嘧啶、叔丁基氢过氧化物 (tBOOH)为氧化剂 ,分别在小鼠体内、体外损伤小鼠腹腔巨噬细胞 ,以DCHF DA为荧光指示剂 ,用共聚焦显微镜观察巨噬细胞的荧光变化 ,并用共聚焦显微镜作时间系列扫描 ,观察巨噬细胞荧光的动态变化。结果 :四氧嘧啶 (75mg·kg-1,iv)、叔丁基氢过氧化物 (7.76× 10 -5mol·L-1)可造成巨噬细胞的氧化损伤 ,使荧光密度增加 ,灵芝多糖肽可减轻其损伤 ,使荧光密度减少。时间系列扫描显示 :随时间改变 ,灵芝多糖肽可减少静息状态下小鼠腹腔巨噬细胞荧光密度 ,也可减少由PMA(5 0nmol·L-1)诱导的呼吸爆发状态下小鼠腹腔巨噬细胞荧光密度。结论 :灵芝多糖肽具有抗氧化作用 。

灵芝多糖肽的抗氧化作用

目的 研究灵芝多糖肽 (GLPP)的抗氧化作用及其机制。方法 Cu2 + 诱导人血清低密度脂蛋白 (LDL)氧化及iv四氧嘧啶 ( 75mg·kg- 1 )引发小鼠氧自由基损伤。结果 GLPP使LDL氧化修饰减少 ,氧化产物REM降低。GLPP5 0 ,10 0 ,2 0 0和 40 0mg·kg- 1 ip 2 0d ,使血清和心肌匀浆的丙二醛 (MDA)水平下降 ,谷胱甘肽过氧化物酶 (GSHpx)升高 ,超氧化物歧化酶 (SOD)减少 ,过氧化氢酶 (CAT)不变。结论 GLPP具有体内外抗氧化作用 。

灵芝多糖肽对Alzheimer样大鼠海马超微结构和抗氧化能力的影响

目的观察灵芝多糖肽(GLPP)对Alzheimer样大鼠海马超微结构、海马组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量以及空间学习记忆能力的影响。方法雄性Wistar大鼠60只,随机分为对照组、模型组、NS组、GLPP组,每组15只。除对照组(正常昼夜节律)外,其余各组每天连续光照(光照度400Lux)24h,共30d。其间GLPP组每天1次灌胃GLPP(250mg/kg);NS组灌胃相同体积的生理盐水。光照30d后Morris水迷宫法测试各组大鼠空间学习记忆能力,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性,硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量,透射电镜观察海马线粒体和突触结构的改变。结果寻台潜伏期模型组大鼠较对照组明显延长(P<0.05),GLPP组较模型组明显缩短(P<0.05);NS组与模型组比较无显著差异。模型组较对照组海马SOD活性降低、MDA含量升高(P<0.05);GLPP组较模型组SOD活性升高、MDA含量降低(P<0.05);NS组SOD活性降低、MDA含量升高,与模型组比较无显著差异。透射电镜结果显示:对照组、GLPP组大鼠海马线粒体神经轴突和神经突触基本正常;模型组和NS组大鼠海马线粒体膜结构破坏,线粒体肿胀,线粒体嵴模糊、消失,结构紊乱,神经髓鞘内神经细丝稀少,神经突触缺失、减少,突触密度降低,突触间隙不清,突触小泡减少。结论GLPP可防止持续光照对大鼠海马超微结构的破坏和减轻Alzheimer样大鼠的空间记忆障碍。

珍珠贝多糖肽对合浦珠母贝非特异性免疫的影响

以不同浓度的珍珠贝多糖肽投喂合浦珠母贝15～75d后 ,实验合浦珠母贝 (Pinctadamartensii)的血细胞的总量及各种血细胞的数量、吞噬细胞的吞噬能力、血清对细菌的凝集、抑菌和杀菌活力等都有不同程度的增加 ,表明该珍珠贝多糖肽可以增强合浦珠母贝非特异性免疫能力。

灵芝多糖肽对ECV304细胞氧化损伤的保护作用

目的研究灵芝多糖肽对ECV304氧化损伤的保护作用。方法培养ECV304细胞,以叔丁基氢过氧化物(tBOOH)为氧化剂损伤细胞,造成氧化损伤模型,培养液中加入不同浓度灵芝多糖(12.5、25、50、100mg.L-1),以MTT法测细胞存活率;以光镜、电镜检测细胞形态学改变及线粒体损伤;用AnnexinV/PI双标记细胞,流式细胞检测细胞凋亡的百分率。结果灵芝多糖(12.5、25、50、100mg.L-1)可减少叔丁基氢过氧化物对ECV304的氧化损伤,MTT检测灵芝多糖给药组,ECV304细胞存活率增加。光镜下可见细胞损伤减少,电镜可见灵芝多糖(50mg.L-1,温育24h)减轻细胞器如线粒体氧化损伤,减少细胞凋亡。细胞流式检测表明:对照组、给药组、损伤组总凋亡百分率分别2.24%±0.43%、24%±6.4%(P<0.01)、82.1%±7.9%。结论灵芝多糖肽(GLPP)对ECV304细胞氧化损伤具有保护作用。

灵芝多糖肽对自由基所致的腹腔巨噬细胞早期损伤的影响

目的 以膜电位方法进一步研究灵芝多糖肽(GLPP)对自由基损伤的巨噬细胞线粒体的影响。方法 以叔丁基氢过氧化物(tBOOH)为氧化剂,建立小鼠巨噬细胞体外氧化损伤模型,以罗丹明1 2 3(Rh1 2 3 )为荧光染色剂,以激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位改变。结果 tBOOH氧化剂可损伤线粒体膜,使线粒体膜电位降低,GLPP体内( 1 0 0mg·kg- 1 ig 5d)及体外给药(GLPP 1 0mg·L- 1)均可对抗tBOOH自由基损伤,可使因自由基损伤而降低的巨噬细胞线粒体膜电位恢复。结论 GLPP体内体外给药可减轻自由基损伤。

灵芝多糖肽对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的研究灵芝多糖肽对人脐静脉内皮细胞(HU-VECs)氧化损伤的保护作用。方法原代培养人脐静脉内皮细胞,CD31免疫荧光法鉴定细胞。以叔丁基氢过氧化物(tBOOH)为氧化剂损伤细胞,造成氧化损伤模型,培养液中加入不同浓度灵芝多糖(6.125、12.5、25、50、100mg·mL-1),以CCK-8法检测细胞存活率;Hoechst333258检测细胞氧化损伤引起的凋亡;比色法检测Caspase-3活性变化;电镜检测细胞及细胞器形态学改变。结果灵芝多糖(6.125、12.5、25、50、100mg·mL-1)可减轻叔丁基氢过氧化物对HUVECs的氧化损伤,CCK-8检测灵芝多糖给药组,HUVEC细胞存活率增加。Hoechst33258检测给药组细胞凋亡数量较损伤组减少。比色法检测损伤组Caspase-3活性明显增高,给药组较损伤组减少。电镜可见灵芝多糖给药组减轻细胞器的氧化损伤,减少细胞凋亡。结论灵芝多糖肽(GLPP)对人脐静脉内皮细胞氧化损伤具有保护作用。

灵芝多糖肽对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮产生的影响

目的 研究灵芝多糖肽 (GLPP)对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮产生的影响并探讨其作用机制。方法 以Griess法 ,观察GLPP对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(NO)产生的影响 ;以免疫组化法检测诱导型一氧化氮合成酶 (iNOS)的表达 ,观察GLPP对iNOS的影响。结果 GLPP(2 5～ 2 0 0mg·kg-1)灌胃给药 5d或体外给药 (3 12 5～ 2 0 0mg·L-1)均可促进巨噬细胞NO释放 ,但对LPS刺激NO的释放影响不大 ;GLPP(10 0mg·kg-1)灌胃给药 5d或体外给药 (10mg·L-1)均可使巨噬细胞iNOS含量增加。结论 GLPP可增加小鼠腹腔巨噬细胞NO产生 ,其机制可能与其促进巨噬细胞iNOS合成有关。

杂质残留量对不同栽培方式下灵芝多糖肽定值的影响

目的依据国家标准样品定值要求,为提高标准样品纯度,降低杂质残留量,选择最佳栽培方式的灵芝子实体用于灵芝多糖肽(Ganoderma lucidum polysaccharide peptide,GL-PPSQ_(2))标准样品的研制。方法基于高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC),采用面积归一法对GL-PPSQ_(2)主成分进行定量分析,卡尔费休库伦法(K-F)测定水分,热重分析法(thermogravimetricanalysis,TG)测定灰分,微波消解-电感耦合等离子体质谱法(inductively coupled plasma-mass spectrometry,ICP-MS)测定14种微量元素,顶空-气相色谱法(headspace-gas chromatography,HS-GC)测量溶剂残留;质量平衡法对菌草层架(A)、菌草覆土(B)、苡仁壳层架(C)、短段木覆土(D)4组不同栽培方式所得GL-PPSQ_(2)进行定值。结果GL-PPSQ_(2)定值依次为:C(97.38%)>A(96.58%)>D(96.02%)>B(95.15%);得率分别为:B(0.29%)>D(0.18%)>A(0.15%)>C(0.07%);杂质残留量为:C(1.81%)<A(2.63%)<D(3.20%)<B(4.05%)。结论宜选择短段木覆土或菌草层架栽培灵芝子实体作为GL-PPSQ2标准样品制备原料。

住院患者多糖肽类抗生素临床应用分析与评价

目的探讨多糖肽类抗生素在住院患者中的临床应用情况,评价其用药合理性,为临床合理用药提供参考依据。方法采用回顾性调查方法调查某院2014年1—12月使用多糖肽类抗生素的住院患者,记录其相关临床资料。结果共纳入病例727例,其中感染患者471例(占64.79%)。社区感染与医院感染均以呼吸道为主(分别占39.17%、45.98%)。多糖肽类抗生素用药天数平均6.06 d(4 403/727)。重症监护病房(ICU)、肿瘤科及神经外科患者使用例数最多,分别为148例(20.36%)、88例(12.10%)、81例(11.14%)。单用糖肽类患者338例(46.49%),联用种类平均达4.43种,三联及以上达99例(13.62%),联用频率最高的为第二代头孢菌素类(20.48%)。多糖肽类抗生素中使用万古霉素450例(61.90%),使用替考拉宁260例(35.76%),万古霉素与替考拉宁同用17例(2.34%)。共分离病原体847株,主要为鲍曼不动杆菌(111株,13.10%)、肺炎克雷伯菌(80株,9.45%)、铜绿假单胞菌(68株,8.03%)及金黄色葡萄球菌(54株,6.37%),其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌50株。经多糖肽类抗生素治疗后有效490例,有效率为67.40%。727例患者中,用药合理86例(11.83%),基本合理315例(43.33%),不合理326例(44.84%)。结论该院多糖肽类抗生素使用情况基本合理,但对适应证的把握有待加强。

灵芝多糖肽拮抗吗啡的免疫抑制作用的体外试验

目的··:研究灵芝多糖肽(GPP)对吗啡所致免疫抑制的拮抗效应。方法··:采用中性红法检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能;采用[3H]TdR参入法测定淋巴细胞增殖反应;分别采用胸腺细胞增殖法和依赖IL-2和HT-2细胞株测定IL-1和IL-2生成。结果··:体外GPP50-800μg·ml-1可以不同程度地翻转高浓度吗啡所致的巨噬细胞吞噬功能降低,IL-1/IL-2产生减少及淋巴细胞增殖功能减退,使之恢复正常。结论··:提示GPP直接地使遭受抑制的免疫细胞的功能得以恢复,产生功能性拮抗作用。

玉米肽-香菇多糖螯合物对小鼠免疫功能的影响

研究玉米肽-香菇多糖螯合物(CPG)对小鼠免疫功能的影响。实验采用玉米肽为原料通过螯合香菇多糖制备具有免疫功能的玉米肽香菇多糖螯合物(CPG),研究玉米肽(CP)、香菇多糖(G)进行对比;玉米肽低、中、高剂量组(CP-L、CP-M、CP-H);玉米肽-香菇多糖低、中、高剂量组(CPG-L、CPG-M、CPG-H);香菇多糖低、中、高剂量组(G-L、G-M、G-H),对小鼠生长性能、体液免疫能力、细胞免疫能力等方面的功能活性。结果表明:CP、CPG、G均能提高小鼠的体重,CP-M、CP-H,CPG-L、CPG-M、CPG-H,G-H剂量组均能显著(P<0.05)提高免疫器官指数,且CPG组较CP组的效果更加明显;CPG对小鼠巨噬细胞增殖能力和吞噬能力的提高效果优于CP,CP-H和CPG-L、CPG-M、CPG-H剂量组能显著(P<0.05)提高机体免疫球蛋白IgA水平,CP-M、CP-H和CPG-L、CPG-M、CPG-H、G-H均能显著(P<0.05)提高机体免疫球蛋白IgG;CPG较CP和G更能促进细胞从G1期向S期转化,有利于提高小鼠脾淋巴细胞增殖分化能力。这表明较玉米肽和香菇多糖而言,玉米肽-香菇多糖螯合物(CPG)可以通过促进小鼠机体生长性能、体液免疫能力水平、细胞免疫能力水平更好地发挥其免疫生物学活性,是一种潜在的免疫增强剂。

脂多糖结合蛋白抑制肽抑制脂多糖与人单核巨噬细胞株的结合

目的:研究脂多糖结合蛋白(LBP)抑制肽对脂多糖(LPS)与人单核巨噬细胞株U937细胞结合的抑制作用,从而探讨LBP抑制肽阻断内毒素信号转导通路的机制。方法:夹心ELISA检测LBP抑制肽与LPS的相对亲和力;流式细胞检测分析(FACS)异硫氰酸荧光素标记的LPS(FITC-LPS)与U937细胞的结合;ELISA检测U937细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。结果:在相同的浓度下,LBP抑制肽与LPS的亲合力比LBP高,约为LBP的1.15倍。LPS组平均荧光强度(MFI)明显高于对照组,LBP显著增强了LPS与U937细胞的结合,促进了LPS的内在化;LBP抑制肽组MFI显著低于LBP组(P<0.01),即P12减弱了FITC-LPS与U937细胞的结合。而且P12抑制了LPS诱导的U937细胞TNF-α的生成。结论:LBP抑制肽与LPS有一定的亲和力,LBP抑制肽与LBP的致炎位点竞争结合FITC-LPS,从而抑制LPS与单核巨噬细胞的结合,阻止了LPS的内在化,并显著降低了LPS诱导的TNF-α释放。