肽核酸荧光原位杂交技术快速检测食品中的李斯特菌属及单增李斯特菌

目的建立利用肽核酸荧光原位杂交技术(PNA-FISH)快速检测食品中李斯特菌属及单增李斯特菌的方法。方法针对李斯特菌属、单增李斯特菌分别设计合成2份PNA探针lis-16S-1、lm-16S-2,并建立荧光原位杂交技术,优化杂交条件,对选取的13株李斯特菌和其他9株非李斯特菌进行检测,验证探针的特异性和灵敏度,并对118份食品样品用LB肉汤2次增菌培养后进行PNA-FISH检测。结果探针灵敏度和特异性均为100%,从118份食品中检出14株李斯特菌和8株单增李斯特菌,结果与API方法和VITEK方法鉴定结果一致。结论 PNA-FISH方法可靠易行,对从食品中检测致病性单增李斯特菌有较高的实用性。

肽核酸-荧光原位杂交快速鉴定化妆品中的铜绿假单胞菌

目的建立一种化妆品中铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的快速检测方法。方法基于铜绿假单胞菌的16S r RNA序列设计铜绿假单胞菌特异性肽核酸(peptide nucleic acid,PNA)探针PA-16S-1,并对其探针进行灵敏度和特异性验证,建立并优化固相肽核酸荧光原位杂交(peptide nucleic acid-fluorescence in situ hybridization,PNA-FISH)检测方法。结果采用PNA-FISH法对300份化妆品样本进行检测,检测到2株铜绿假单胞菌和1株金黄色葡萄球菌阳性样品,与传统生化方法结果完全一致。结论 PNA-FISH方法是一种快速、敏感、特异的致病菌检测技术,对控制和提高化妆品的卫生质量具有重要意义。

乳腺癌HER-2免疫组化与FISH技术检验分析

对乳腺癌人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)中荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)、免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)技术检验效果进行分析。方法 筛选2021年到2023年30至80岁乳腺癌患者手术病理切片,对患者行使IHC、FISH检测,对这两种检测结果对比分析。结果 以FISH作为金标准,IHC检测-、+、++、+++符合率分别为100.00%、24.73%、25.93%、87.50%;在30至50岁患者,其中IHC检测-、+、++、+++符合率分别为100%、28.86%,、31.25%、87.50%;而在>50岁患者中,依次是100.00%、28.95%、30.00%、80.00%。结论 IHC与FISH均可检测乳腺癌HER-2基因状况,但在+、++中需要利用FISH再次检测,进一步确定HER-2基因表达。

肽核酸荧光原位杂交技术在临床微生物快速鉴定中的应用进展

肽核酸（peptid enucleic acid，PNA）探针荧光原位杂交技术是一种诊断新技术，既具有PNA探针杂交的高度专一性，又具备传统染色技术的简便性，可为传染性疾病提供准确的诊断信息。它适用于临床微生物实验室的常规检验，能在短时间内为临床医生提供抗生素使用依据，具有传统微生物检验技术无法比拟的优势。笔者就其在临床微生物快速鉴定领域应用作简要综述。

FISH及免疫组化技术检测乳腺癌Her-2基因与蛋白的临床应用价值

目的分析免疫组化技术(IHC)检测石蜡标本乳腺癌组织中原癌基因-2(Her-2)蛋白表达与荧光原位杂交技术(FISH)检测Her-2基因扩增状态的临床应用价值。方法 IHC和FISH技术分别检测98例乳腺癌癌组织中的Her-2蛋白表达和Her-2基因扩增。结果 98例石蜡包埋乳腺癌组织中1例Her-2表达蛋白为阴性的患者中,Her-2基因扩增亦为阴性,符合率100%(1/1);15例Her-2蛋白表达为(+)的患者中,Her-2基因扩增为阴性的12例,符合率为80.0%(12/15);49例Her-2蛋白表达为(++)的患者中,Her-2基因扩增为阳性的25例,符合率51%(25/49);33例Her-2蛋白表达为(+++)的患者中,Her-2基因扩增为阳性的27例,符合率81.8%(17/21)。IHC法初筛为阴性(-～+)和强阳性(+++)检测结果与FISH检测结果一致性较高(Kappa=0.602>0.40,P<0.01),且两法检测差异无统计学意义(χ2=0.508,P>0.05)。结论 IHC方法检测乳腺癌组织中Her-2蛋白表达阴性和强阳性与FISH检测结果一致性较高。

鹰嘴豆α-低聚半乳糖的肠道益生功能

以鹰嘴豆为材料,通过提取与活性炭-硅藻土柱层析分离纯化,制备鹰嘴豆粗提物和不同纯化程度的鹰嘴豆α-低聚半乳糖(α-GOS)样品。采用体外厌氧粪样混合培养与荧光原位杂交技术,评价鹰嘴豆α-GOS的益生功能。结果表明:鹰嘴豆α-GOS对肠道有益菌(双歧杆菌、乳酸菌)有较好的增殖作用,而对有害菌(拟杆菌、梭状菌)的生长有一定的抑制作用;鹰嘴豆α-GOS只是改变了肠道内菌体的组成,而对总体菌群的数量基本没有影响;α-GOS含量高于90%的鹰嘴豆α-GOS样品的益生指数(PI)最高(2.00),α-GOS含量为70%～80%、80%～90%的鹰嘴豆α-GOS样品及鹰嘴豆粗提物的PI值依次为1.39、1.73和0.89,而对照组(不加任何碳源的处理)为负值(-0.29)。总之,鹰嘴豆α-GOS具有很好的肠道益生功能。

普通小麦-簇毛麦6V代换系45S rDNA和5S rDNA位点的FISH分析

采用顺序基因组原位杂交和双色荧光原位杂交技术,对普通小麦-簇毛麦6V代换系K0736的45S rDNA和5S rDNA基因位点进行了分析。结果表明,该代换系2n=42,有1对簇毛麦6V染色体,为6V/6A代换系,45S rDNA位点有8对,位于7对染色体上。5S rDNA位点有6对,分别位于6对染色体上。在1AS、1BS、5DS的端部同时存在45S rDNA和5S rDNA位点,并在物理位置上紧密相邻。同时讨论了rDNA位点的数目和分布位置存在变异的可能因素。

15q11.2-13.2微重复四倍体综合征1例并文献复习

目的采用分子遗传学技术分析1例常规染色体核型拟诊为21/22三体的发育迟缓伴孤独症患儿,明确遗传学诊断。方法收集患儿及其父母的外周血标本,常规提取基因组DNA,应用高分辨染色体核型分析(400-550带)检测患儿及其父母的染色体数目及结构,微阵列比较基因组杂交技术(array-CGH)筛查患儿的全基因组拷贝数变异,以荧光原位杂交技术(FISH)对异常的基因拷贝进行染色体精确定位和定量。结果女,2岁,发育迟缓伴孤独症样表现。外侧眼角下垂、内眦赘皮。常规染色体核型检查(320带)分别为47,XX,+22和47,XX,+21。高分辨染色体核型分析显示,该患儿携带额外标记染色体(SMC),核型为47,XX,+mar dn,尚不能确定是否为21/22三体携带者,患儿父亲高分辨率核型染色体分析提示为46,XY,母亲为46,XX,提示患儿携带SMC为新生突变。array-CGH检测显示15q11.2-13.2区域微重复(chr15:22684529-30730543,8.0 Mb,hg19)。FISH验证该SMC来源于15号染色体,由15q11.2-13.2区域二倍体及双着丝粒组成。患儿最终诊断为15q11.2-13.2微重复四倍体综合征。复习文献报道的15q11.2-13.2拷贝数增加病例的临床表型,微重复四倍体综合征的主要表型有智力低下/发育迟缓(100%)、肌张力低下(92.9%)、孤独症/孤独症样表现(71.4%)和癫(61.5%)等。结论 15q11.2-13.2微重复四倍体综合征是患儿发生精神发育迟滞伴孤独症的遗传学基础,array-CGH能够快速、准确地检测基因组的微小失衡。

FISH法在土壤-植物污水处理系统中应用的可行性

应用FISH法对土壤-植物污水处理系统中未经过培养的土壤氨氧化菌进行了研究.同时介绍了样品前处理、FISH法检测过程以及基因探针的选择等实际操作方法与过程.研究结果表明,对于土壤-植物污水处理系统土壤的微生物解析可用FISH技术.该方法的使用为系统基质的研究提供便捷之路.

FISH与IHC在乳腺癌HER-2基因扩增检测中的应用价值

目的:分析荧光原位杂交技术(FISH)与免疫组织化学法(IHC)在乳腺癌人表皮生长因子受体-2(HER-2)基因扩增检测中的应用价值。方法:选取惠州市第一人民医院2018年1月至2020年12月收治的首发乳腺癌患者103例作为研究对象,收集患者组织穿刺标本以及手术切除组织标本,分别应用IHC以及FISH对患者HER-2进行检测,对两种方法的检测结果进行统计和分析。结果:103例乳腺癌组织标本检测结果显示:HER-2蛋白(-)或(+)者9例,(++)者42例,(+++)者52例;基因扩增情况为:阳性(扩增)72例,阴性(未扩增)31例。两种方法的检查结果一致性较高(Kappa=0.779,P<0.05)。结论:IHC以及FISH均可作为对乳腺癌患者HER-2基因状态评估的检测方法,且两种检测结果具有较高的一致性,临床可根据患者实际情况选择合适的方法对其进行基因检测。

国产荧光原位杂交探针检测自然流产绒毛染色体的临床应用研究

目的:应用国产荧光原位杂交(FISH)探针,对自然流产绒毛组织进行遗传学分析。方法:收集自然妊娠后自然流产绒毛80例,经体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗后自然流产绒毛20例,行荧光免疫杂交(fluorescence in situ hy-bridization,FISH)技术分析流产绒毛13、16、18、21、22、X和Y这5对常染色体和1对性染色体的非整倍体状况,并与细胞培养核型分析技术相对比。结果:FISH技术共检测出30例染色体异常,细胞培养核型分析共检测出38例染色体异常;自然流产组与IVF-ET流产组的染色体异常率分别为38.75%(31/80)、35.00%(7/20),差异无统计学意义(P>0.05);在80例自然妊娠后自然流产病例中,既往0、1、2、3次及以上自然流产史的染色体异常率分别为28.30%(15/53)、30.00%(3/10)、30.00%(3/10)、33.33%(1/3),各组间比较无统计学差异;80例自然妊娠自然流产病例中,年龄在35岁及以下和大于35岁者染色体异常率分别为38.23%(26/68)、41.67%(5/12),IVF-ET组分别为21.43%(3/14)、66.67%(4/6),差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:自然妊娠后自然流产与IVF-ET术后自然流产的发生均与染色体异常密切相关,其染色体异常率无明显差异。

MBR系统内丝状菌污泥膨胀的分子生态学解析

膜 生物反应器 (MembraneBioreactor ,MBR)工艺是目前污水处理技术的研究的热点之一 .以前大部分研究集中于宏观工程参数控制和活性污泥特性对系统运行的作用过程 ,针对系统内活性污泥的分子生态学研究尚少 .本文在长期试验运行基础上 ,发现丝状菌在MBR运行过程中容易大量增殖形成污泥膨胀 ,对系统的处理效率及膜污染造成一定影响 .为了对其膨胀发生过程及变化进行深入的机理解析 ,本研究利用荧光原位杂交 (FluorescentinSituHybridization ,FISH)分子生物学分析技术 ,对MBR系统内丝状菌污泥膨胀的发生过程进行了跟踪研究 .发现引起膨胀的丝状菌主要是 0 2 1NⅡ型丝状细菌 ,G2M探针杂交后的丝状菌相对量的变化逐渐升高 .

快速鉴定白念珠菌的临床应用研究

目的探究肽核酸-荧光原位杂交(PNA-FISH)、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)快速鉴定白念珠菌的临床应用价值。方法采用经VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定仪YST卡鉴定白念珠菌100株,模拟血培养阳性标本。对报阳的标本直接进行PNA-FISH鉴定,再转种培养出单个新鲜菌落,完成MALDI-TOF MS鉴定。记录两种方法鉴定白念珠菌结果和鉴定所需时间,计算其与VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定方法的符合率。结果100株白念珠菌模拟血培养样本,PNA-FISH鉴定结果与VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定方法的符合率为98%,平均鉴定时间为(2.5±0.5)h。采用MALDI-TOF MS鉴定报阳后单个新鲜菌落,与VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定方法的符合率达100%,从血培养报阳开始计算,平均鉴定时间为(22.0±0.6)h。结论PNA-FISH方法鉴定白念珠菌,设备简单,鉴定结果可靠,相较于传统鉴定方法和MALDI-TOF MS方法,鉴定时间显著缩短,有较好的临床应用前景。

FISH应用于植入前遗传学诊断的研究

目的运用荧光原位杂交技术(fluorescent in situ hybridization,FISH)对废弃胚胎固定好的单卵裂球进行检测,了解染色体数目异常,即非整倍体(anenploidy)改变在体外受精(in vitro-fertilization,IVF)中的发生情况。方法应用橘红色LSI-21探针对IVF患者正常受精D3的废弃胚胎活检后单个卵裂球进行FISH检测,统计并分析其信号结果。结果活检胚胎33个,2个胚胎未出现信号,获31个胚胎,共64个卵裂球杂交信号。包括年龄≥35岁患者胚胎7个,<35岁患者胚胎24个。其中2倍体信号胚胎20个,单倍体信号胚胎3个,3倍体信号胚胎8个,21号染色体异常的胚胎为11个,其中35岁以上患者占3个,35岁以下患者占8个。结论人IVF废弃胚胎21号染色体异常几率多。患者年龄≥35岁者尤甚。

FISH应用于植入前遗传学诊断对高风险胚胎检测的研究

目的 对固定好的单卵裂球进行FISH检测 ,在最短的时间内获得清晰可靠的信号 ,进行临床分析。方法 选取发育不良的高风险胚胎分别进行分开变性和共变性后杂交的单细胞FISH ,统计并分析其信号结果。结果 共变性法信号获得率较分开变性法为高 ,并且信号获得率与变性方法相关 (P =0 .0 4 86 ) ;共有 9枚胚胎 ,4 2个卵裂球固定良好 ,其中二倍体信号 36个 ,单倍体信号 2个 ,2 1号染色体异常的胚胎为 4 9。结论 初探分析人IVF废弃胚胎 2 1号染色体异常几率较高。

实验方法与改进

060354PCR-RFLP法检测葡萄糖激酶基因启动子-30位点变异的实验条件研究；060355不同环境存放的待检样品蒸发浓缩对结果的影响；060356同步多色荧光原位杂交技术的建立及临床应用；060357绝对计数系统的临床应用评估。

银条α-低聚半乳糖体外肠道益生功能研究

以银条为原料,通过乙醇浸提和D101大孔吸附树脂初步纯化,制备得银条α-GOS含量为76.39%,其中水苏糖占86.03%。采用体外厌氧粪样混合培养、荧光原位杂交技术和高效液相色谱法分析银条α-GOS对肠道菌群以及短链脂肪酸(SCFA)生成的影响。结果表明:银条α-GOS能促进双歧杆菌和乳酸菌的增殖,而对拟杆菌和梭状菌的增殖却有一定的抑制作用;银条α-GOS只是改变了肠道内菌群的组成,而对总体菌群的数量基本没有影响;银条α-GOS能显著刺激肠道微生物生成甲酸、乳酸、乙酸、丙酸和丁酸,提高肠道总SCFA的量,尤其是乳酸和乙酸的生成量。综上所述,银条α-GOS具有较好的肠道益生功能。