磷酸化肽段分离富集方法的研究进展

目的:通过综述O-磷酸化肽段和N-磷酸化肽段的富集方法研究进展,为磷酸化蛋白质分析前处理提供解决方案。方法:结合文献和数据库搜索,总结O-磷酸化肽段和N-磷酸化肽段的富集方法基本原理与应用,系统介绍O-磷酸化肽段和N-磷酸化肽段的富集方法研究进展。结果:磷酸化肽段分离富集方法已被广泛应用于磷酸化蛋白质组学研究中。结论:目前已开发了多种针对不同磷酸化肽段的富集方法,不同的方法具有不同的特异性和选择性,因此,根据研究目的选择富集方法尤为重要。

澳洲坚果抗菌肽分离纯化及其肽段鉴定与分析

以液压压榨澳洲坚果粕为原料,采用碱性蛋白酶水解制备澳洲坚果多肽(macadamia nut peptide⁃0,MNP⁃0),以对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌的抑菌活性为跟踪指标,通过超滤、DA201⁃C型大孔吸附树脂、交联葡聚糖凝胶Sephadex G⁃25对其进行逐级分离纯化,获得抑菌活性较强的抗菌肽,并运用液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC⁃MS/MS)技术对其进行肽段组成与氨基酸序列分析。结果表明:超滤分离的不同分子量澳洲坚果多肽在所有多肽中所占质量分数不同,抑菌活性也有所差异。其中,澳洲坚果多肽组分MNP⁃4占比最高,为29.55%;抑菌活性也最强,对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌的抑菌圈直径分别为10.01 mm与9.41 mm。大孔吸附树脂纯化多肽组分MNP⁃4的技术条件为75%乙醇溶液为解吸剂,静态吸附3 h,动态洗脱体积60 mL。经大孔吸附树脂与交联葡聚糖凝胶Sephadex G⁃25分离纯化,获得3个澳洲坚果纯化多肽(macadamia nut purified peptide,MPP)组分,其中组分MPP⁃2的抑菌活性最强,对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌的抑菌圈直径分别为18.67 mm与16.83 mm,优于多肽MNP⁃0与超滤分离多肽组分。分离纯化的澳洲坚果抗菌活性多肽MPP⁃2含有DDLTDPAPA、VLL、WDY、VPV、WDL、LLW、LWL、FDW 8个肽段,经预测分析,属于抗菌肽的肽段为WDL与FDW,其概率得分a(1.00≥a≥0.50)均为1.00,疏水率均为66.67%,均带有1个负电荷,等电点分别为0.69与0.67,并具有较好的溶解性。研究结果表明澳洲坚果可通过酶法制备具有抗菌活性的肽类成分。

澳洲坚果抗氧化肽的分离纯化及肽段鉴定

为研究澳洲坚果抗氧化肽的抗氧化活性和氨基酸组成,以复配蛋白酶水解澳洲坚果粕制备粗多肽,利用超滤、大孔树脂纯化技术制备了抗氧化活性最佳的分子量小于1000 Da的多肽,采用Sephadex G-15凝胶对其分离并评价各组分对DPPH、羟基、ABTS+自由基的清除能力与还原能力,筛选出抗氧化活性最强组分,利用液相色谱-串联质谱技术(liquid chromatography and tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)进行鉴定并分析。结果表明,葡聚糖凝胶柱层析分离出G1、G2、G3组分,其中G3具有最佳的抗氧化活性,其羟基自由基清除能力半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))6.18 mg/mL与还原能力IC_(50)2.19 mg/mL优于谷胱甘肽,DPPH自由基清除能力IC_(50)0.50 mg/mL,ABTS+自由基清除能力IC_(50)0.02 mg/mL;通过液相色谱-串联质谱鉴定G3含有46个肽段,肽段长度均小于10个氨基酸,匹配得分大于200分的9条肽段分子量为631~920 Da,均无毒性;筛选获得高抗氧化活性肽HLLPK、KEFFP、KEFFPA,其分子量分别为606.84、666.83、737.92 Da。本研究初步揭示了澳洲坚果抗氧化肽组成,深化了澳洲坚果抗氧化肽的研究,为澳洲坚果抗氧化肽的开发利用提供了理论参考。

小麦水解蛋白肽段组成及结构序列分析

对小麦水解蛋白的基础理化成分、相对分子质量分布和氨基酸组成进行分析,并利用LC-MS/MS法鉴定小麦水解蛋白肽段组成及其序列。结果显示,小麦水解蛋白的总蛋白质质量分数为(80.53±8.06)%,相对分子质量主要集中在小于2000的范围,必需氨基酸的质量分数为52.4%。根据Q3扫描、PIS扫描以及MRM定量共鉴定出8条肽段:亮氨酰谷氨酰胺二肽(leucylglutamine,LQ)、缬氨酰谷氨酰胺二肽(valanyl-glutamine,VQ)、异亮氨酰异亮氨酸二肽(isoleucylisoleucine,Ⅱ)、亮氨酰亮氨酸二肽(leucyl-leucine,LL)、丙氨酰异亮氨酸二肽(alanyl-isoleucine,AI)、缬氨酰亮氨酸二肽(valanyl-leucine,VL)、亮氨酰甲硫氨酸二肽(leucyl-methionine,LM)和异亮氨酰甲硫氨酸二肽(isoleucyl-methionine,IM),质量分数分别为385.0、32.5、30.0、122.8、8.9、5.9、134.9、147.0μg/g。它们可能在体内发挥功能活性,成为小麦水解蛋白应用于营养保健食品的物质基础。

基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法测定α/β-二羰基类化合物与标准瓜氨酸化肽段之间的衍生化反应活性

蛋白质瓜氨酸化是一种由生物酶调控的不可逆翻译后修饰,其与免疫相关疾病、癌症、神经系统性疾病和老年痴呆症等重大疾病的发生和发展密切相关。蛋白质的瓜氨酸化修饰丰度低、缺乏亲和标签、m/z变化小且易受同位素及脱酰胺化作用干扰,因此对蛋白质的瓜氨酸化修饰进行质谱分析面临着巨大挑战。通过对瓜氨酸侧链脲基进行化学衍生反应,可以提高瓜氨酸化肽段的m/z差值,引入亲和富集标签,可有效提高瓜氨酸化分析的灵敏度和精准度。本研究以标准瓜氨酸化肽段为研究对象,以基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)为检测手段,对一系列二羰基类化合物与瓜氨酸化肽段之间的化学反应活性进行测定。在对α-二羰基类化合物的考察中发现,苯乙二醛、丙酮醛、1,2-环己二酮和1,10-邻二氮杂菲-5,6-二酮对瓜氨酸化肽段的衍生化效率很高,并且能够生成单一的衍生化产物;2,3-丁二酮、乙二醛与瓜氨酸化肽段之间的反应效率也很高,但会生成一系列副反应产物。在对β-二羰基类化合物的考察中发现,1,3-环己二酮、2,4-戊二酮在与瓜氨酸化肽段进行反应后,均可以产生单一的衍生化产物,但反应效率很低,不适用于瓜氨酸化肽段的化学衍生反应。实验结果表明,α-二羰基结构是实现高效、特异性瓜氨酸化肽段化学衍生反应的基础,α-二羰基类化合物中不同的侧链结构又决定了衍生化产物的结构、衍生化效率及副产物的生成。通过进一步合成含有亲和标签的α-二羰基类化合物,可以实现瓜氨酸化肽段的特异性富集和精准鉴定,有助于瓜氨酸化蛋白质及其位点鉴定的新方法开发。

质谱MRM方法开发--ABC外排蛋白指纹肽段的Insilico筛选研究

目的基于质谱MRM方法开发,建立相关ABC外排蛋白P-gp、MRP1、BCRP指纹肽段的In silico筛选方法。方法运用生物信息学方法,使用Uniprot软件获取目标氨基酸序列,根据肽段选择规则进行筛选;使用Skyline软件预测肽段离子及MRM相关母离子和子离子的信息,并排除特定不确定或不稳定的氨基酸;最后采用Blast软件对候选指纹肽段进行独特性确认,最终需结合质谱检测的方法进行验证。结果成功运用生物信息学方法,选定代表各自目标蛋白的指纹肽段,结果为P-gp蛋白肽段,IATEAIENFR;MRP1蛋白肽段,EDAQVDLFR;BCRP蛋白肽段,SSLLDVLAAR。结论In silico联合质谱的MRM方法成功选定了ABC相关外排蛋白的指纹肽段,为具有肽段组成的各类蛋白类、多肽类物质检测奠定了基础。

黄鸡低聚肽对小鼠巨噬细胞免疫调节及其潜在功能肽段结构序列研究

以黄鸡鸡壳制备黄鸡低聚肽(YCOP),并通过体外培养巨噬细胞RAW264.7探究YCOP的免疫调节作用。结果显示:YCOP的氨基酸含量为80.43%,分子质量小于1000 Da水解物的比例为91.55%。YCOP能有效提升巨噬细胞RAW264.7的吞噬能力,增加一氧化氮(NO)的释放量,并促进肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)及白介素-1β(IL-1β)等细胞因子的释放,具有潜在增强免疫力的功效。基于三重四极杆液相色谱串联质谱(LC-MS)共鉴定出4条肽段:Ile-Leu-Gln(ILQ)、Ile-Ile-Gln(IIQ)、Ile-Ile-Lys(IIK)、Arg-Leu-Leu(RLL),含量分别为42、15、8、6mg/100g。

基于生物质谱的蛋白质组学分析大西洋鲑中生物标志性肽段及过敏原特异性肽段

基于蛋白质组学自下而上研究策略,采用纳升液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用法(Nano-UHPLC-Q/Exactive-HRMS)和超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)筛选、鉴定大西洋鲑中生物标志性肽段和过敏原β-小清蛋白特异性肽段,并提出了UHPLC-MS/MS测定其含量的方法。称取5 g处理好的样品,加入10 mL正己烷除脂,离心,于沉淀中加入5 mL磷酸盐缓冲溶液(提取剂),涡旋,于60℃水浴加热30 min,再用20 mL冷丙酮富集、纯化,得到的蛋白提取液经胰蛋白酶酶解后,采用Nano-UHPLC-Q/Exactive-HRMS初步筛选大西洋鲑生物标志性肽段与过敏原β-小清蛋白特异性肽段,用UHPLC-MS/MS对初筛的肽段进行多反应监测(MRM)模式验证。在酶解后的溶液中加入内标,采用UHPLC-MS/MS测定,内标法定量。结果显示:筛选出3条可用于定量的大西洋鲑生物标志性肽段VAVNVEETK、VAPLSEDFK、LTEIQSLER和1条过敏原β-小清蛋白特异性肽段TFFHTIGFASK;VAVNVEETK、VAPLSEDFK、LTEIQSLER标准曲线的线性范围在5.00μmol·L^(-1)以内,TFFHTIGFASK标准曲线的线性范围在10.00μmol·L^(-1)以内,检出限(3S/N)为0.32~1.55μg·g^(-1);空白样品中4条肽段的加标回收率为90.2%~105%,测定值的相对标准偏差(n=6)为1.5%~4.6%;方法用于测定大西洋鲑贮存过程中VAVNVEETK、VAPLSEDFK、LTEIQSLER、TFFHTIGFASK的含量,LTEIQSLER和TFFHTIGFASK含量没有发生明显变化,而VAVNVEETK和VAPLSEDFK含量随着贮存天数的延长逐渐降低,其中VAPLSEDFK适用于大西洋鲑新鲜度评价。

小麦低聚肽营养成分和特征功能肽段研究

以谷阮粉为原料,利用复合蛋白酶酶解、分离、纯化、浓缩、喷雾干燥获得小麦低聚肽,并研究了小麦低聚肽的理化指标、氨基酸组成、分子质量分布以及具有功能活性特征肽段成分。结果表明,小麦低聚肽的总蛋白含量(干基)为93.27%,肽含量(干基)为79.77%,分子质量主要分布在1000 u以下,占比92.60%;小麦低聚肽的氨基酸总量为91.56%,尤其是谷氨酸含量占比最高,为37.13%;通过超快速液相色谱串联三重四极杆质谱从小麦低聚肽中鉴定出5条具有功能活性的特征肽段成分,分别为焦谷氨酰谷氨酰胺酰脯氨酸三肽(pyroglutamyl glutamyl proline tripeptide,pEQP)、缬氨酰谷氨酰胺酰谷氨酰胺三肽(valyl glutamyl glutamine tripeptide,VQQ)、丙氨酰谷氨酰胺二肽(alanyl glutamine dipeptide,AQ)、丝氨酰谷氨酰胺二肽(sericyl glutamine dipeptide,SQ)、异亮氨酰谷氨酰胺二肽(isoleucyl glutamine dipeptide,IQ),其含量分别为0.464%、0.046%、0.191%、0.446%和0.145%,小麦低聚肽批次间含量稳定。研究结果为小麦低聚肽在营养保健食品中的应用奠定了基础。

乌鸡肽中潜在功能活性肽段的研究

研究考察了乌鸡肽的总蛋白、肽含量、氨基酸组成、分子质量分布以及潜在的功能活性肽段。结果表明,乌鸡肽的总蛋白含量(干基)为94.88%,肽含量(干基)为78.93%,氨基酸组成丰富,分子质量主要分布在1000 Da以下,占比91.04%,此外,基于超快速液相色谱串联三重四极杆质谱方法,从乌鸡肽中鉴定出5条潜在功能活性的特征肽段序列,分别为谷氨酰精氨酸二肽、异亮氨酰精氨酸二肽、天冬酰胺酰精氨酸二肽、脯氨酰天冬氨酰精氨酸三肽、丙氨酰丙氨酰精氨酸三肽,其含量为0.14~4.28 mg/g,研究结果为乌鸡肽应用于营养保健食品奠定了物质基础。

高效液相色谱-串联质谱法结合稳定同位素标记肽段同时测定稻米及其制品中3种过敏蛋白质

基于稳定同位素标记特征肽段和液相色谱-质谱联用仪建立稻米及制品中3种过敏蛋白质的同时定量方法。稻米及制品样品经盐溶液提取,赖氨酰基内切酶(Lys-C)和胰蛋白酶依次水解,C18-SD柱净化后,采用纳升高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱(NanoLC-LTQ-Orbitrap)采集和Protein Discovery软件鉴定,NCBI和Uniprot数据库的基本局部搜索比对工具(BLAST)筛选验证,最终获得表征稻米及制品中α-淀粉酶/胰蛋白酶抑制剂类蛋白质(seed allergenic protein RAG2,RAG2)、乙二醛酶Ⅰ活性蛋白(glyoxalaseⅠ)和α-球蛋白(19 kDa globulin)3种过敏蛋白质的特异性肽段。3个特异性肽段经液相色谱梯度洗脱,在Poroshell色谱柱上实现完全分离,由三重四极杆质谱仪分析。实验通过优化多反应监测(MRM)质谱参数,比较不同溶剂体系、水解酶种类和酶量等酶解条件,结合内标法定量,实现对稻米及制品中3种蛋白质的绝对定量。实验结果表明,当酶解溶剂中含1 g/L十二烷基硫酸钠,采用Lys-C和胰蛋白酶组合消化策略,可有效提高3种蛋白质的酶切效率至65.7%~97.3%。该方法在1~200 nmol/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.9972,3种蛋白质的检出限和定量限分别为3 mg/kg和10 mg/kg。3种蛋白质在空白稻米制品基质中3个水平下的加标回收率为80.6%~103.7%,日间和日内精密度均小于11.5%。该方法稳定性好,检测灵敏度高,操作简便,在分析各类稻米及制品中3种过敏蛋白质含量具有广泛的应用前景。

基于液相色谱-串联质谱法的肉类特征肽段鉴别及掺假测定

建立了液相色谱-串联质谱技术鉴别肉类特征肽段及定量检测羊肉中常见外源肉掺假的方法。样品经蛋白质提取、胰蛋白酶水解和固相萃取小柱净化后,利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q/Exactive-HRMS)和Proteinpilot软件,实现蛋白质和多肽的鉴定;再通过基本局部比对搜索工具(BLAST)与Uniprot数据库对比分析,筛选出羊肉、鸭肉、猪肉和鸡肉的20个物种特征性多肽标志物;最后利用高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-QqQ-MS)系统对羊肉、鸭肉、猪肉和鸡肉的特征性多肽进行了验证和多反应监测(MRM)定量研究。将鸭肉、猪肉和鸡肉分别按照质量分数为1%、5%、10%、20%、50%的比例掺加到羊肉中,得到鸭肉最低掺假检出限为0. 25%、猪肉最低掺假检出限为0. 17%、鸡肉最低掺假检出限为0. 10%。

基于特征肽段的阿胶中异源性物种鉴别

为鉴别阿胶中动物源性掺假物,结合鸟枪蛋白组学技术对不同物种的热稳定特征肽进行检测和鉴定。首先找到3种胶类药材(阿胶、新阿胶、黄明胶)的特征肽段,并发现3个物种中不含羟脯氨酸的热稳定特异性肽段在I型胶原蛋白α1序列中的相似位置。通过对胶原蛋白源物种特异肽段的序列特征的研究,推测了制胶过程中胶原蛋白的裂解规律。其次,获得了2条马皮特征肽,分别来源于马源角蛋白和未命名的马源蛋白,可用于鉴定阿胶中马皮胶。本研究不仅能够实现阿胶和异源性动物皮胶的鉴别,同时还可以为阿胶的真伪鉴别及其他物种胶原蛋白源特异肽段的发现提供技术支持。

乙酰胆碱受体α亚基125-147肽段制作实验性重症肌无力动物模型的研究

目的研究用乙酰胆碱受体α亚基125-147(Tα125-147)肽段制作实验性重症肌无力(EAMG)的动物模型。方法给实验组Lewis鼠(12只)皮下注射人工合成电鳗乙酰胆碱受体Tα125-147肽段,观察接种后鼠的肌力变化,应用低频重复电刺激检测电衰减反应及酶联免疫法检测血清乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)滴度;并与对照组鼠(8只)比较。结果在第2次接种后1周实验组6只鼠逐渐出现肌无力症状,11只鼠低频重复电刺激电衰减反应(+)及血清AChR-Ab(+);对照组鼠均无肌无力症状,低频重复电刺激电衰减反应(-),血清AChR-Ab7只鼠(-),1只(±),两组比较差异有显著性(均P<0.01)。结论用人工合成乙酰胆碱受体Tα125-147肽段免疫Lewis鼠可以成功制作EAMG动物模型。

基于特征肽段的液相色谱-质谱技术鉴定胶原蛋白的物种来源

建立了一种基于特征肽段的液相色谱-质谱技术鉴定胶原蛋白物种来源的方法。样品经蛋白提取,还原,烷基化,胰蛋白酶消化后,采用Eksigent C18色谱柱(75μm×150 mm,3μm)分离,用流动相0. 1%甲酸水-乙腈溶液(98∶2)和0. 1%甲酸乙腈-水溶液(98∶2)梯度洗脱,在正离子模式下,通过纳升电喷雾四极杆飞行时间质谱进行检测,数据经Protein PilotTM软件及blast分析,筛选出潜在的特征肽段。消化后的样品再采用Eclipse Plus C18色谱柱(2. 1 mm×100 mm,1. 8μm)分离,用流动相乙腈和1%甲酸水溶液梯度洗脱,在正离子模式下,通过电喷雾四极杆/线性离子阱串联质谱的多反应监测触发增强子离子扫描模式进行检测,进一步确认肽段的特异性。最终筛选并确证了3种猪源性胶原蛋白特征肽段,4种牛源性胶原蛋白特征肽段,1种羊源性胶原蛋白特征肽段。所筛选的特征肽段具有良好的耐热性,可为动物源性胶原蛋白鉴定提供一种特异性强、准确可靠的检测方法。

蛋白质组学质谱平台肽段可检测性预测研究进展

生物质谱是蛋白质组研究中的核心技术之一,可以实现大规模、高通量的蛋白质定性和定量分析。由于样品和实验过程自身的复杂性,质谱实验的重复性还存在一些问题,肽段鉴定和定量结果有很大的随机性,肽段的质谱检测概率问题在蛋白质组研究中,特别是定量蛋白质组研究中备受关注。本文总结了影响肽段可检测性的重要因素,分析了已经提出的计算预测方法,并对其在实验研究中的应用进行了综述。

肾上腺髓质素前体不同肽段的心血管效应

本工作在整体大鼠、离体大鼠心脏与血管和培养大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）上观察和比较了肾上腺髓质素前体（ｐｒｏＡｄｍ）四个不同肽段的心血管效应。肾上腺髓质素（Ａｄｍ）ｐｒｏＡｄｍＮ端２０肽（ＰＡＭＰ）和ｐｒｏＡｄｍ４５－９２肽均可以舒张大鼠主动脉环、降低血压，而肾上腺升压肽（Ａｄｔ）则收缩大鼠主动脉环。ｐｒｏＡｄｍ的四个肽段对大鼠心脏均无明显变时性和变力性作用。Ａｄｔ可以刺激大鼠ＶＳＭＣ的增殖，Ａｄｍ和ＰＡＭＰ则拮抗Ａｄｔ的促ＶＳＭＣ增殖效应。

草鱼鱼皮不同分子量肽段体外抗氧化性能的研究

采用碱性蛋白酶对草鱼皮进行水解,并将水解产物通过截留分子量为10、5和3 k Da的超滤膜,得到>10、5~10、3~5和<3 k Da四种不同分子量肽段组分。主要研究了粗蛋白水解产物经截留后不同分子量肽段的体外抗氧化活性及其功能,结果表明相同浓度下3~5和<3 k Da肽段组分在清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2'-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基方面比蛋白水解产物或其它肽段组分的效果显著(p<0.05),而>10 k Da肽段组分与Fe2+螯合能力最强。然而,与还原型的L-谷胱甘肽相比,>10、5~10、3~5 k Da肽段组分具有较弱的清除超氧阴离子自由基能力,肽的氨基酸序列在其抗氧化活性中起到关键作用。结果表明,<3 k Da肽段组分可作为功能性天然抗氧化剂添加到保健食品中。

合成水蛭素羧端肽段及其类似物的抗凝活性

水蛭素Ｃ端肽段为抗凝的活性部位〔１〕．为了进行构效关系的研究，构建Ｃ端肽段类似物的化学库，首先利用同步多中心合成技术合成了７种水蛭素Ｃ端类似物．经ＨＰＬＣ制备纯化，纯度在９６％以上．电喷雾质谱确认了合成肽的分子量．用新鲜人血浆，进行了凝血酶原激酶时间（ＡＰＴＴ）、凝血酶时间（ＴＴ）及凝血酶原时间（ＰＴ）测定．显示水蛭素羧端２０个氨基酸残基肽片是抗凝活性必需的基本骨架．其中应当包含封闭凝血酶催化位点和阴离子结合位点的特异结合序列以及保持两者间多功能性的连接桥．

结核分枝杆菌抗原优势肽段融合抗原38kD-ESAT6-CFP10的构建与抗原性初步检测

目的为了提高结核病诊断试剂的特异性和敏感性,构建了结核分枝杆菌抗原优势肽段融合抗原38 kD-ESAT6-CFP10,并且采用双抗原夹心ELISA方法初步分析了该融合抗原的抗原性。方法运用生物学软件分析抗原优势肽段并模拟其串联后的三维结构,以确保串联后仍保持良好的抗原性。通过PCR方法分别扩增38 kD、ESAT-6和CFP10抗原优势肽段基因并将其进行连接,然后将融合基因分别连接入pBVIL1和pGEX-4T-2表达载体,在大肠杆菌菌株DH5α中进行表达。将两种不同载体表达的38 kD-ESAT6-CFP10融合抗原分别作为包被抗原和标记抗原,以双抗原夹心ELISA方法初步评价其抗原性。结果获得了38 kD、ESAT-6和CFP10的抗原优势肽段融合抗原38 kD-ESAT6-CFP10,并在大肠杆菌中进行了高效表达,初步验证所获得的抗原具有良好的抗原性。结论该种抗原优势肽段融合抗原有望成为结核病血清学诊断的重要候选抗原,并且双抗原夹心ELISA方法有助于提高检测的特异性和敏感性。