Wilm′s tumor gene1肽疫苗Galinpepimut-S在肿瘤免疫治疗中的应用

目的为Wilm′s tumor gene1(WT1)肽疫苗Galinpepimut-S(GPS)用于肿瘤免疫治疗的后续研究提供参考。方法采用计算机检索中国知网、PubMed等数据库自建库起至2022年12月的肿瘤免疫治疗相关文献,总结GPS在肿瘤免疫治疗中的应用现状。结果GPS能激发自身免疫系统,对WT1抗原产生强烈免疫反应而发挥抗肿瘤作用,在卵巢癌、恶性胸膜间皮瘤、急性髓系白血病、多发性骨髓瘤的治疗中均显示出较好的疗效。结论以GPS为代表的肿瘤疫苗是未来肿瘤治疗的重要方向,需进一步进行临床研究,以获取更多数据。

个体化肿瘤新生抗原肽疫苗中残留有机溶剂的顶空GC法测定

目的建立个体化肿瘤新生抗原肽疫苗组中8种有机溶剂残留量的测定方法。方法采用顶空气相色谱(顶空GC)法,FID检测器,检测器温度250℃;色谱柱为Agilent DB-1毛细管色谱柱(30 m×0.53 mm,3μm),程序升温:起始柱温70℃(保持11 min),以50℃/min升温至130℃(保持9 min),再以50℃/min升温至200℃(保持2 m in);载气为氮气,柱流速1.0 mL·min^(-1);进样口温度200℃。有机溶剂检测项目为甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙腈、乙醚、三乙胺、哌啶和N,N-二甲基甲酰胺(DMF)。结果8种溶剂的专属性、定量限与检测限、线性与范围、准确度、精密度均达到了ICH指导原则中对残留溶剂测定的验证要求。结论建立的方法能有效控制个体化肿瘤新生抗原肽疫苗组中甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙腈、乙醚、三乙胺、哌啶和DMF的残留量。

猪口蹄疫二价合成肽疫苗抗体免疫评估检测

猪口蹄疫作为一种高度传染性疾病,严重威胁了猪、牛、羊和其他偶蹄类动物的健康和畜牧业发展。该病毒的传播迅速,引起的猪口蹄疫症状包括口腔和蹄部的溃疡,严重影响动物的生产性能和福利,导致经济损失和农业灾害。为控制猪口蹄疫的传播,疫苗是最有效的手段之一。近年来,二价合成肽疫苗作为一种新型疫苗备受瞩目。

猪圆环病毒2型合成肽疫苗佐剂筛选与免疫保护性研究

【目的】筛选更安全高效的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)合成肽疫苗佐剂。【方法】将IMS 251C VG、GEL 02 PR、ISA 15A VG、ISA 206 VG、ISA 61 VG、台湾细菌鞭毛、卡波姆、多糖共8种佐剂与适量PCV2多肽抗原按照特定方法配制成不同疫苗,并验证其物理性状,采用小鼠试验初步检验疫苗安全性及免疫效果,筛选出较优的佐剂进行仔猪免疫攻毒保护试验,进一步评估各疫苗的免疫保护效果。【结果】物理性状显示,所有疫苗稳定性均较好,4℃保存期均超过12个月。ISA 61 VG油佐剂黏度较高且乳滴粒径较大,ISA 15A VG、ISA 206 VG双相佐剂次之,其余水佐剂均较低较小。小鼠试验结果显示,除台湾细菌鞭毛佐剂外其他佐剂安全性均良好;小鼠ELISA抗体水平检测结果显示,ISA 61 VG、GEL 02 PR、ISA 206 VG组免疫效果明显高于其余疫苗组;综合评定安全性和免疫效果,筛选ISA 61 VG、GEL 02 PR、卡波姆、多糖、ISA 206 VG共5个佐剂组进行仔猪免疫攻毒保护试验。仔猪免疫攻毒保护试验结果显示,免疫后,ISA 61 VG和GEL 02 PR组保护效果明显优于其他佐剂,其制备的疫苗产生的ELISA抗体和中和抗体水平均明显高于其他组,同时还可刺激产生更高水平的细胞因子γ-干扰素(IFN-γ);攻毒后,ISA 61 VG、GEL 02 PR、ISA 206 VG组疫苗的仔猪相对日增重显著高于其他佐剂组(P<0.05),且实时荧光定量PCR和免疫组化结果显示,上述疫苗组可显著降低仔猪体内病毒载量(P<0.05)。临床症状观察显示,ISA 61 VG和GEL 02 PR疫苗组无体温升高或被毛粗乱等现象,病理切片表明这2个疫苗组组织病变较轻。【结论】油佐剂ISA 61 VG佐剂和水佐剂GEL 02 PR制备的PCV2合成肽疫苗对预防PCV2感染具有较好的免疫保护作用,试验结果为PCV2合成肽疫苗的研究提供了数据基础。

细胞程序性死亡配体1表位肽疫苗的设计及抗肿瘤活性

目前已有多款细胞程序性死亡受体1(PD-1)和其配体(PD-L1)免疫检查点阻断抗体用于临床治疗,但只有部分患者表现出临床反应,因此需要一种替代的肿瘤免疫治疗策略。以PD-L1为靶点的治疗性肿瘤疫苗是一种有意义的尝试。本研究设计了以PD-L1为靶点的表位肽疫苗,然后基于人源化免疫系统(HIS)小鼠模型筛选,具有免疫原性的PD-L1表位肽,进一步研究其抗肿瘤活性。结果显示,设计并筛选得到的PD-L1-B1表位肽疫苗不仅成功诱导了PD-L1特异性的体液免疫和细胞免疫,还表现出抗肿瘤活性。此外,免疫治疗还增加了肿瘤的T淋巴细胞浸润,重塑了肿瘤免疫抑制微环境。综上所述,PD-L1-B1表位肽疫苗表现出强效的抗肿瘤活性,对PD-1/PD-L1阻断不敏感的患者可能是一种有效的替代免疫治疗策略。

血吸虫多抗原肽疫苗的合成及生物活性

目的：合成由寡聚赖氨酸和曼氏血吸虫２８ＫｕＧＳＴ抗原肽段２６４３（Ｐ２６）、１４１１５３（Ｐ１４１），日本血吸虫２６ＫｕＧＳＴ抗原肽段１８７２０２（Ｊ１８７）组成的血吸虫多抗原肽疫苗，通过活性试验考察其抗原性及对实验动物的保护性免疫效果。方法：用固相逐步接肽法合成多抗原肽疫苗，产物经斑点酶联免疫吸附试验测定抗原性，并在无免疫佐剂存在下接种小鼠，以日本血吸虫尾蚴攻击感染，６周后剖杀小鼠进行体内成虫和肝内虫卵计数。结果：合成多抗原肽均能与感染日本血吸虫的病人或病兔血清结合，接种（Ｐ１４１）４ＭＡＰ、（Ｊ１８７）４ＭＡＰ的昆明小鼠和接种（Ｐ２６）８ＭＡＰ的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，与对照组相比成虫检获数分别减少６４６％，４１３％和２８１％；每克肝脏虫卵数分别减少５４９％，４５６％和４０６％。结论：合成血吸虫多抗原肽疫苗能诱导小鼠产生抵抗日本血吸虫感染的保护性免疫力。

肽疫苗的研究进展

肽疫苗可分为3大类,即抗病毒相关肽疫苗、抗肿瘤相关肽疫苗、抗细菌及寄生虫感染的肽疫苗。肽疫苗具有安全、廉价、特异性强、易于保存和应用等特点。本文主要介绍有关肽疫苗的设计、提高免疫原性及体内的稳定性、复合肽疫苗、临床评价等方面的研究和应用进展。

猪O型口蹄疫合成肽疫苗及猪O型口蹄疫高效灭活疫苗免疫效果对比试验

使用猪O型口蹄疫合成肽疫苗与猪O型口蹄疫高效灭活疫苗免疫30-40日龄商品猪,免疫采用正向间接血凝试验、液相阻断ELISA及VP1结构蛋白抗体ELISA检测免疫前和首次免疫后14d、28d、35d、42d、56d及二次免疫后7d、14d、28d抗体水平。同时,对接种疫苗的实验猪进行免疫应激观察。结果显示:注射合成肽疫苗试验猪未出现不良免疫副反应;采用正向间接血凝试验检测,两种疫苗免疫抗体合格率差异不显著;运用液相阻断ELISA及VP1结构蛋白抗体ELISA进行检测,注射合成肽疫苗试验猪二免7d后抗体水平快速上升,抗体检测合格率达到73%-100%。与注射高效灭活苗组比较表明:合成肽疫苗临床使用的安全性较高,免疫抗体合格率明显优于猪O型口蹄疫高效灭活苗。

利用纳米材料制作多肽疫苗佐剂的思考

纳米粒子与生物体有着密切的关系 ,DNA/蛋白质复合体就在 15～ 2 0nm之间 ,多种病毒颗粒也是纳米级的超微粒子 .多肽抗原需要与适当载体形成复合物才能诱导有效的免疫应答 ,但载体效应难以避免 .纳米佐剂可以避免载体效应的发生 ,而且还是巨噬细胞 (Mφ)、树突状细胞 (DC)的首选吞噬目标 .纳米化的有机药物可提高其生物利用度、制剂的均匀性、分散性和吸收性 ;脂质体可使药物更快地到达靶向部位 ,而且特异性更强 .目前主要用理化的方法制作纳米材料 ,几乎所有的生化药品 ,特别是DNA药物的研究开发都可引入纳米材料 。

经MHCⅡ通路的屋尘螨1类变应原T细胞表位融合肽疫苗载体的构建与表达

目的构建经MHCⅡ通路的屋尘螨1类变应原Der p 1的T细胞表位肽疫苗重组载体。方法分别合成TAT、Ih C和含编码Der p 1的3段T细胞表位的融合核苷酸序列,用特异性引物PCR扩增相应的基因片段,分别用相应的双酶切后,用T4 DNA连接酶连接形成TAT-Ih C-Der p 1-3T融合基因,并插入至原核表达载体p ET-28a(+)中,构建重组原核表达载体p ET-28a(+)-TATIh C-Der p 1-3T,Bam HⅠ和XhoⅠ进行双酶切和测序鉴定。重组载体转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)菌株,IPTG诱导后,经SDS-PAGE电泳分析和Western blot验证,纯化TAT-Ih C-Der p 1-3T蛋白后进行Ig E结合试验。结果双酶切和测序结果表明,成功构建了p ET-28a-TAT-Ih C-Der p 1-3T重组原核表达载体;SDS-PAGE电泳分析显示TAT-Ih C-Der p 1-3T可诱导表达;Western blot检测表明该融合蛋白纯化成功;Ig E结合试验表明TAT-Ih C-Der p 1-3T结合屋尘螨过敏病人血清Ig E的能力强于Der p 1变应原(P<0.001)。结论成功构建了可表达经MHC通路的编码Der p 1的3段T细胞表位的重组p ET-28a-TAT-Ih C-Der p 1-3T载体,纯化的TAT-Ih C-Der p 1-3T具有较强的Ig E结合能力,从而为后续经MHC通路的特异性免疫治疗奠定基础。

猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗体水平检测

为了解猪口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫效果,选用了两个厂家生产的猪口蹄疫O型合成肽疫苗,对80头试验仔猪进行了免疫注射,并在6、7、8、9、11、13、20周龄采血,通过ELISA检测抗体水平的变化。结果显示,猪口蹄疫O型合成肽疫苗能快速诱导产生高水平的抗体;疫苗的免疫副作用小;使用VP1ELISA和LPB-ELISA检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫抗体试验相关性较好。

MAGE-3/CEA(HLA-A2/A24_+)肽疫苗冲击树突状细胞诱导消化道肿瘤患者CTL的研究

目的：树突状细胞（DC）是一种重要的抗原递呈细胞，在T细胞参与的HLA限制性免疫应答中起重要作用。已证实在动物模型中DC递呈抗原可以诱导出T细胞介导的免疫反应。我们在体外扩增获得肿瘤患者DC，观察其特点，并以MAGE－3／CEA（HLA－A2／A24＋）肽疫苗冲击DC诱导特异性CTL，研究其杀伤活性。方法：选择MAGE－3－HLA－A2／A24＋或CEA－HLA－A24＋肿瘤患者，收集PBMNC中的贴壁细胞，在含有rhGM－CSF、rhIL－4的1640中培养诱导DC细胞，第7天加入HLA－A2－MAGE－3、HLA－A24－MAGE－3、HLA－A24－CEA肽冲击。以肽冲击后的DC与未经纯化的T细胞混合培养（T－DC－P）诱导的CTL作为效应细胞，Mel526，803，Raji，K562作为靶细胞，以LDH法检测特异性CTL的杀伤力。结果：体外扩增可获得高纯度的DC，高表达DC特异性表面标志CD40（74．18％±15．76％）、CD86（94．6％±3．80％）、HLA－DR（88．6％±10．94％）。不同肿瘤患者DC得率表现出较大差异（7．07％±3．24％），反映出免疫功能的不同。T－IL－2细胞与T－DC－P细胞对Mel526和803细胞株的杀伤活性有显著性差异（P＜0．01），可以将特异性杀伤力提高25％～35％，而对Raji和K562细胞株的杀伤活性无显著性差异（P＞0．01）。结论：rhGM－CSF、rhIL－4体外联?

含两种不同肽段的血吸虫多抗原肽疫苗的合成与生物活性

目的：合成由曼氏血吸虫２８ Ｋｕ ＧＳＴ抗原肽段２６４３（Ｐ２６）、１４１１５３（Ｐ１４１）和日本血吸虫２６ Ｋｕ ＧＳＴ 抗原肽段１８７２０２（Ｊ１８７）中的两种不同肽段组成的血吸虫多抗原肽疫苗，通过活性试验考察其抗原性、免疫原性及对实验动物的保护性免疫效果。方法：用Ｂｏｃ 化学和Ｆｍｏｃ 化学相结合的策略合成含两种不同抗原肽的多抗原肽疫苗，产物经斑点酶联免疫吸附试验测定抗原性，在无免疫佐剂存在下接种小鼠，ＥＬＩＳＡ 试验检测血清抗体，并用日本血吸虫尾蚴攻击感染，６ 周后剖杀小鼠进行体内成虫和肝内虫卵计数。结果：合成多抗原肽能不同程度地与感染日本血吸虫的病人或病兔血清结合，并能诱导昆明小鼠产生对日本血吸虫天然抗原特异的抗体应答。接种（Ｐ２６）２（Ｊ１８７）２ＭＡＰ、（Ｐ２６）２（Ｐ１４１）２ＭＡＰ和（Ｐ２６）４（Ｐ１４１）４ＭＡＰ的昆明小鼠，与对照组比较成虫检获数分别减少４０－１ ％ ，６１－１ ％ 和３４－４％ ； 每克肝脏虫卵数分别减少４８－４％ ，６７－１ ％ 和４７－４％ 。结论：含两种不同抗原肽的合成血吸虫多抗原肽疫苗能够诱导昆明小鼠产生显著的抗日本血吸虫感染的保护性免疫力。

人乳头瘤病毒16E7限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的穿膜肽疫苗设计及体外免疫学研究

目的:利用穿膜肽人免疫缺陷病毒(HIV)-Tat49-57的穿膜能力,设计穿膜肽人乳头瘤病毒(HPV)16E7限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位(第49～57位氨基酸)的融合肽疫苗,并在体外研究其诱导特异性CTL的应答能力。方法:应用多肽固相合成技术,分别合成含HIVTat49-57和人类白细胞抗原(HLA)-A2.1限制性CTL优势表位HPV16E749-57的18肽,和该CTL表位的9肽,并用一无关肽作对照,在体外用乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性试验分别检测了上述18肽和9肽在HLA-A2阳性健康者外周血单个核细胞(PBMC)中诱导的表位E749-57的特异性CTL活性。结果:经质谱分析,上述多肽成功合成,纯度均在95%以上。与9肽相比,18肽能在体外诱导出明显增强的特异性CTL活性(P<0.05)。结论:在HPV16E7HLA-A2.1限制性CTL表位(49～57)的N-末端加上HIV-Tat49-57序列,不会影响表位的提呈效率,而且在体外能有效激发针对E749-57特异性的CTL应答,为新型抗肿瘤及细胞内感染的多肽疫苗设计提供了新思路。

肿瘤抗原细胞毒性T淋巴细胞表位鉴定和多肽疫苗的研究进展

恶性肿瘤是当前威胁人类生命健康的主要疾病之一,尽管手术治疗联合化疗/放疗能够延长患者的生存期,但是这些治疗手段也会损伤正常细胞,产生很多不良反应,再加上很多恶性肿瘤具有侵袭转移和复发等特征,因此,急需发展新的方法来治疗肿瘤患者[1]。

穿膜肽HIV-Tat_(49-57)和CTL表位融合多肽疫苗的初步免疫学效应研究

目的 探讨穿膜肽HIV Tat4 9- 57将CTL表位带入活细胞胞质并将其投入MHC Ⅰ类抗原提呈途径的可能性。方法 应用多肽固相合成技术 ,分别合成含HIVTat4 9- 57和HLA A2 1限制性CTL优势表位MART 12 7- 35的 18肽和该CTL表位 9肽。采用间接免疫荧光与激光共聚焦显微镜技术 ,分别对上述 18肽和 9肽的穿膜能力进行了动态观察。进一步用标准51 Gr释放试验分别检测了上述 18肽和 9肽在HLA A2 1阳性健康者外周血单个核细胞 (PBMC)中诱导的表位MART 12 7- 35特异性CTL活性。结果 18肽能够穿过活哺乳动物细胞质膜进入胞质 ,并呈现出时间、剂量依赖关系 ;而 9肽则无此效应。与 9肽相比 ,18肽在体外诱导出了明显增强的特异性CTL活性 (P <0 0 5 )。结论 穿膜肽HIVTat4 9- 57可有效携带CTL表位穿过细胞膜进入胞质 ,并有效激发出针对该表位的特异性CTL应答 。

胃癌免疫治疗新趋势:个体化肽疫苗

胃癌是恶性肿瘤中的常见病种,其肿瘤相关的病死率占全世界第三位,经传统手术及放化疗治疗后胃癌的生存率仍然很低。生物免疫治疗中肿瘤疫苗的研究在近几年取得了重大进步,根据肿瘤患者的个体遗传基因结构或蛋白表达的不同,选择个体化的肿瘤疫苗可以进一步提高治疗效果。个体化肿瘤抗原高表达肽疫苗、负载的树突状细胞疫苗以及个体化多肽疫苗等已在胃癌免疫治疗的临床转化研究中取得了很多成果,个体化肽疫苗与放化疗、分子靶向治疗等其他治疗联合应用可以有效提高临床疗效。本文介绍个体化肽疫苗在胃癌领域的临床转化研究进展、其与化疗、放疗等多学科结合的综合治疗模式及其相关疗效评价等免疫治疗临床转化的新思路和新方法。