鳕鱼皮明胶肽硒复合物的制备及结构表征

以新西兰鳕鱼皮为原料,提取鳕鱼皮明胶并酶解获得鳕鱼皮明胶肽,以亚硒酸钠为硒源,制备并筛选出硒结合量较高的肽硒复合物,对其进行结构表征。结果显示,鳕鱼皮明胶胃蛋白酶酶解物的硒结合含量最高(13.61μg/mg),因此将其用于制备鳕鱼皮明胶肽硒复合物;鳕鱼皮明胶肽与硒结合后,紫外光谱吸收峰强度增大且红移,荧光光谱吸收峰由波长311 nm迁移到355 nm且荧光强度减弱,表明鳕鱼皮明胶肽与硒结合产生新的物质;基于粒径分布、原子力显微镜、扫描电子显微镜、X射线衍射分析,鳕鱼皮明胶肽硒复合物呈现为纳米晶体结构,主要是由于鳕鱼皮明胶肽上的羧基和氨基与硒发生了结合反应,使得β-折叠结构转变为α-螺旋结构和β-转角结构,从而使得结构更加紧凑有序。本研究制备了一种新型的肽硒复合物,为实现鱼皮高值化利用提供了新途径。

豌豆低聚肽硒螯合物的稳定性研究

以豌豆低聚肽和亚硒酸钠为原料制备豌豆低聚肽硒螯合物,对其水分、酸溶蛋白、总氮、分子质量分布的基础理化性质进行研究,然后以分子质量分布和硒含量为指标对螯合物的热稳定性、酸碱稳定性、消化稳定性进行考察。结果表明,豌豆低聚肽硒螯合物水分含量为(14. 17±1. 12)%(质量分数),酸溶蛋白含量为(23. 22±0. 12)%(质量分数),总氮含量为(23. 87±0. 30)%,分子质量分布在1 000 Da以下的占比超过76%。在温度25～100℃时,分子质量分布在1 000 Da以下的部分比例变化均小于2%,硒含量变化不显著。在pH=3～11,分子质量分布在1 000 Da以下的部分比例变化均小于3%,硒含量虽有一定变化,但含量仍在78%以上。经过胃蛋白酶、胰蛋白酶和2种酶共同消化后,分子质量在1 000 Da以下的部分比例均都在90%以上,而硒含量变化不显著。这说明豌豆低聚肽硒螯合物具有一定的热稳定性、酸碱稳定性和消化稳定性。

响应面法优化大鲵肽-硒螯合物制备工艺及其性质研究

为探究大鲵肽与硒的螯合能力,通过单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验以及Box-Behnken试验优化了大鲵肽-硒螯合物的制备工艺,在此基础上对大鲵肽-硒螯合物结构特征和体外抗氧化活性进行评价。结果表明,大鲵肽质量分数7%、螯合时间60 min、体积比46∶100、p H 8.46、螯合温度65℃时,大鲵肽-硒螯合物得率最高为36.18%,与模型预测值34.54%无显著差异(P>0.05)。大鲵肽与Na_(2)Se O_(3)螯合后紫外光谱吸收峰强度增大且红移;傅里叶变换红外光谱上表征—COOH和酰胺官能团的振动谱峰发生了强度上和位置上的改变;α-螺旋和β-折叠含量显著上升(P<0.05),β-转角和无规则卷曲的含量显著减少(P<0.05)。大鲵肽-硒螯合物具有较强的羟自由基、超氧阴离子自由基清除能力及还原能力。该研究为大鲵肽高附加值产品开发提供一定参考。

共封装硒肽和VE微胶囊制备及其理化特性

通过乳化-冷冻干燥联合技术构建微胶囊体系,以实现对具有不同极性的物质(亲水性硒肽和亲脂性VE)的稳态化共封装。以包埋率作为参考,通过单因素试验考察壁材浓度、硒肽和VE含量等工艺参数对包埋效果的影响。傅里叶变换红外光谱和扫描电子显微镜图像表明微胶囊能够有效封装硒肽和VE,并且具有较好的水分散性,复溶后仍保持双重乳液结构。热稳定性分析和2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基清除实验结果证实,相比于硒肽粉末,微胶囊具有更高的热稳定性和抗氧化活性。电子鼻分析结果进一步证实微胶囊体系对硒肽自身异味具有较好的遮掩效果。体外模拟消化实验表明,微胶囊封装提高了硒肽在模拟胃液中的稳定性,并且硒肽在模拟肠液具有更低的保留率,能够被有效释放。相关研究结论将为富硒功能性食品营养补充剂的开发提供理论依据。

植物富硒肽的来源及生物活性的研究进展

硒(Se)是人体必需的微量营养素,在生命活动中发挥着重要的生理功能。与无机硒相比,有机硒生物利用度高且毒性低,是补充硒的优质来源。生物活性硒肽是有机硒的重要形式,主要来源于富硒植物提取和人工合成途径,由于具有多种有益健康的生物活性,生物活性硒肽已经成为近年来备受关注的研究热点。本文综合了国内外近几年的相关研究,概述了植物源生物活性硒肽的分离提取和人工螯合制备、常见的植物源生物活性硒肽及其在机体中的抗氧化、肝脏保护、免疫调节、抗癌、降血压等多种生物活性,以期为植物源生物活性硒肽在功能性食品和医药方面的开发利用提供理论参考。

体外模拟消化对鲟鱼头硒螯合肽结构及抗氧化活性的影响

为了明确鲟鱼头蛋白肽和鲟鱼头硒螯合肽的抗氧化活性差异,体外模拟了口腔及胃肠道消化处理过程中鲟鱼头蛋白肽和鲟鱼头硒螯合肽的结构及抗氧化活性变化。结果表明:鲟鱼头硒螯合肽的紫外光谱吸收峰在体外口腔胃肠模拟消化过程中比鲟鱼头蛋白肽更加稳定。体外模拟消化导致鲟鱼头蛋白肽和鲟鱼头硒螯合肽的圆二色谱吸收峰强度显著降低。粒径分布结果也表明:鲟鱼头硒螯合肽在消化过程中具有更好的溶解性。ABTS、DPPH以及OH自由基清除活性结果显示,在体外模拟消化后,鲟鱼头蛋白肽和鲟鱼头硒螯合肽的自由基清除活性进一步增强,且鲟鱼头硒螯合肽的自由基清除能力最强。

富硒牡蛎肽的制备及其抗氧化和血管紧张素转化酶抑制活性研究

为开发兼具抗氧化和血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制活性的富硒牡蛎肽,该研究以富硒牡蛎蛋白为原料优化制备富硒牡蛎肽,并对其硒含量、氨基酸组成、抗氧化活性和ACE抑制活性进行评价。结果表明,富硒牡蛎肽的最佳酶解条件为时间4 h、温度37℃、酶底比0.5%、pH 1.0、底物质量浓度7 g/100mL。该条件下制备的富硒牡蛎肽富含与抗氧化和ACE抑制活性相关的疏水性氨基酸和酸性氨基酸,其清除DPPH自由基和ABTS阳离子自由基的EC_(50)值分别为1.365、1.074 mg/mL,并呈现出良好的细胞抗氧化活性(EC50:1.114μg/mL),对HepG2细胞的氧化损伤具有显著的保护作用,且呈量效关系。此外,富硒牡蛎肽的ACE抑制活性较强,这可能与其良好的抗氧化活性具有内在关联性。富硒牡蛎肽具有良好的抗氧化和降血压活性,该研究结果为牡蛎源富硒肽研究奠定了前期基础,为天然富硒营养健康食品的开发提供了理论依据。

堇叶碎米荠富硒多肽对乙醇诱导THLE-2肝细胞损伤的保护作用

采用堇叶碎米荠富硒多肽(selenium-enriched peptide of Cardamine violifolia,SPE)处理人源肝细胞,研究SPE能否干预由乙醇引起的肝细胞损伤。利用酒精诱导损伤THLE-2肝细胞构建氧化应激模型,通过不同浓度有机硒的SPE处理后,测定细胞损伤和氧化应激相关指标,评价其细胞保护和抗氧化能力。结果显示,乙醇浓度为1000 mmol/L,乙醇作用时间为12 h时,可对THLE-2细胞造成明显损伤(P<0.05)。SPE处理可明显提高细胞存活率(P<0.05),在12μmol/L硒浓度作用下可达78.02%。与损伤组相比较,SPE处理组上清液的谷草转氨酶、谷丙转氨酶和乳酸脱氢酶含量显著减少(P<0.05),并且,SPE处理后,THLE-2细胞内活性氧含量减少,超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽水平显著上升(P<0.05),最高分别为34.68 U/mg、974.75 nmol/g、1.76 U/mg和55.58μmol/g,其中,谷胱甘肽过氧化物酶高度表达,约为损伤组的5.6倍,可能因为SPE为谷胱甘肽过氧化物酶合成提供硒离子。另外,SPE处理组的细胞凋亡率降低,线粒体膜电位升高。综上所述,堇叶碎米荠富硒多肽可以通过调控氧化应激相关指标来达到缓解酒精性肝损伤的目的。

大鲵肽-硒螯合物对D-半乳糖致小鼠氧化应激损伤保护作用

为探究大鲵肽-硒螯合物的体内抗氧化活性,采用腹腔注射D-半乳糖建立氧化应激损伤小鼠模型,评价了不同剂量大鲵肽[100 mg/(kg·bw)和400 mg/(kg·bw)]及其肽-硒螯合物[10μg/(kg·bw)和30μg/(kg·bw)]对小鼠氧化应激损伤的保护效应。结果显示,大鲵肽和大鲵肽-硒螯合物均具有较好的拮抗小鼠肝脏、脾脏和胸腺萎缩的作用。经不同剂量大鲵肽和大鲵肽-硒螯合物干预后,可使D-半乳糖诱导氧化应激损伤小鼠的血清、肝脏、心脏和脑组织中的总抗氧化能力、超氧化物歧化酶活力、谷胱甘肽含量、谷胱甘肽过氧化物酶活力显著增加(P<0.05),同时降低丙二醛和蛋白质羰基含量(P<0.05)。与大鲵肽相比,大鲵肽-硒螯合物对D-半乳糖致小鼠氧化应激损伤具有更好的保护作用,显示出更强的抗氧化活性。该研究为大鲵肽高附加值产品开发提供了一定的参考。

生物活性硒肽制备及功能的研究进展

生物活性硒肽是一类具有多种生物活性、高效且低毒的优质硒补充剂。随着人们对硒营养学研究不断深入,硒肽的促健康作用被国内外学者广泛报道。然而,当前硒肽的制备主要依靠传统的酶解法,其分离纯化过程往往费时耗能,不利于硒肽的高效获取,因而也制约着有关硒肽活性的深入研究。因此,综述了生物信息技术及计算机辅助工具在活性肽领域的应用和进展,并基于当前硒肽的制备技术和生物学功能作一定展望,以期望为突破传统硒肽制备方法提供新的研究视角。

四季豆叶富硒肽的酶法制备工艺及抗氧化活性研究

采用四季豆叶富硒蛋白(SPK)为材料,利用碱性蛋白酶对其进行酶解。通过单因素和响应面试验,确定最优酶解条件,利用超滤截流不同分子质量(10、5、1 kDa)的酶解液得到多肽,并对其进行体外抗氧化活性分析。结果表明:在底物添加量3%(以超纯水质量计)、酶解时间120 min、酶解温度50℃、加酶量3%(以SPK质量计)、pH 9.5的条件下,水解度为12.74%±1.12%。当四季豆叶富硒多肽质量浓度为0.5~3.0 mg/mL时,低分子质量(<1 kDa)组分多肽的抗氧化能力总体上优于其他3组组分多肽(>10、5~10、1~5 kDa)。

富硒蛹虫草子实体多肽对SH-SY5Y细胞及脑缺血/再灌注损伤大鼠保护作用的机制研究

目的:探讨富硒蛹虫草子实体多肽(SECM)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y和脑缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠的保护作用机制。方法:以SECM含药血清为样品,通过噻唑蓝(MTT)法检测含药血清对SH-SY5Y细胞在半数抑制浓度(IC50)冈田酸和过氧化氢作用下对细胞增殖的影响,以观察SECM对SH-SY5Y细胞的保护修复作用;使用改进的推注线技术制备大鼠I/R损伤模型,24 h后进行神经功能评分,检测各组大鼠脑组织丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性,谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)活性,核转录因子(NF)-κB、血管内皮生长因子(VEGF)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)表达水平。结果:过氧化氢和冈田酸对SH-SY5Y细胞的IC50分别为420、35 nmol·L^(-1),而SECM在IC50过氧化氢和冈田酸作用下对SH-SY5Y细胞具有很好的保护和修复作用;与假手术组比较,模型组大鼠神经功能损伤严重,脑组织中MDA含量和NF-κB、VEGF、PAI-1、ICAM-1表达水平均升高,GSH-Px及SOD活性均下降。与模型组比较,SECM高、中剂量组大鼠神经功能评分有所改善;SECM高、中、低剂量组大鼠脑组织中GSH-Px和SOD活性均上升,MDA含量和NF-κB、VEGF、PAI-1、ICAM-1表达水平均降低。结论:SECM对预先暴露于损伤因子过氧化氢及冈田酸的SH-SY5Y细胞均具有很好的保护和修复作用,同时对I/R损伤大鼠具有脑保护作用。

富硒玉米醒酒肽的制备及活性研究

为了利用硒和玉米肽的双重活性,制备出活性优于普通玉米的醒酒肽,从而提高富硒玉米的附加值,以富硒玉米为原料,从中提取蛋白质,进而制备富硒玉米肽,以其对·OH抑制率、硒回收率和肽回收率等为指标,通过单因素实验以及正交实验对酶解条件进行了优化;通过动物实验比较了两种玉米肽的醒酒活性。结果显示最优酶解条件为:料液比1∶35(w/v),温度60℃,加酶量0.6%,此时硒回收率为81.78%,肽回收率为73.32%,水解度为10.50%,酶解物对·OH的半抑制率浓度(IC50)为3.57mg/mL;200mg/kg剂量的富硒玉米肽降低小鼠血清中乙醇浓度(blood alcohol concentration,BAC)的能力极显著优于同剂量的普通玉米肽(p<0.01),400mg/kg剂量的富硒玉米肽的血醇清除率可达50.99%。富硒玉米肽的醒酒活性显著优于普通玉米肽。

硒肽Se-ZnCu-65P增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能并抑制一氧化氮和过氧化氢的分泌

目的研究硒肽Se-Zn Cu-65P对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力与NO和H2O2分泌水平的影响。方法以不同剂量的具有超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)双抗氧化酶活性的硒肽Se-Zn Cu-65P作用于脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞,培养24 h,采用MTT法检测巨噬细胞的相对活力,中性红摄入法检测巨噬细胞的吞噬能力,硝酸还原酶法测定NO分泌水平,钼酸铵比色法测定H2O2分泌水平。结果 Se-Zn Cu-65P单独作用于巨噬细胞时,可增强细胞的相对活力,却不影响细胞的吞噬能力;能降低巨噬细胞分泌H2O2的水平,而不能抑制NO的分泌。而LPS诱导的巨噬细胞吞噬能力增强,同时NO和H2O2的水平也显著上升。当Se-Zn Cu-65P作用于LPS诱导的巨噬细胞时,细胞的吞噬能力进一步增强,细胞NO和H2O2的水平却显著降低。结论 Se-Zn Cu-65P能有效提高LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞的相对活力,增强细胞的吞噬能力,降低NO和H2O2的分泌水平。

富硒玉米肽对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用

研究富硒玉米肽对四氯化碳(Carbon tetrachloride,CCl4)诱导的小鼠肝损伤的保护作用。将健康的雄性昆明小鼠70只,随机分成7组:正常对照组、CCl4模型组、富硒玉米肽低、中、高剂量组(100、200、400mg/kg·bw)、普通玉米肽组(200 mg/kg·bw)、水飞蓟素阳性对照组(50 mg/kg·bw),每组10只。测定比较血清中谷丙转氨酶(ALT)活力、谷胱甘肽(GSH)、三酰甘油(TG)含量,同时测定肝组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,肝脏指数,并观察肝组织病理学变化。结果显示富硒玉米肽低、中、高剂量组均能极显著抑制CCl4致肝损伤小鼠血清ALT活性和TG含量的升高、GSH含量的降低(P<0.01);均能极显著提高肝组织中GSH含量和SOD、GSH-Px活力,并降低肝组织中MDA的含量(P<0.01),极显著降低由于肝损伤引起的肝脏肿大(P<0.01),改善肝组织损伤程度,并存在剂量效应关系。富硒玉米肽高剂量组的护肝效果与50 mg/kg·bw的水飞蓟素相当,相同剂量的富硒玉米肽的保肝作用极显著优于普通玉米肽(P<0.01)。结果表明富硒玉米肽对CCl4所致小鼠急性肝损伤有显著的保护作用,且与普通玉米肽相比,富硒玉米肽的有效保肝剂量显著降低。

富硒玉米蛋白水解物中硒肽及含硒氨基酸的结构鉴定

为了明确硒在玉米蛋白中的赋存形式,采用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS/MS),结合质谱数据库比对以及高效液相色谱-等离子体质谱法(HPLC-ICP/MS),对富硒玉米蛋白水解物中硒肽及含硒氨基酸的结构进行鉴定。结果确定了5个小肽,其氨基酸序列分别为:SeMet-MeSeCys-Glu、Met-MeSeCys-Glu、MeSeCys-Glu-Asp、Ile-MeSeCys-Glu、γ-Glu-MeSeCys;确定了4种含硒氨基酸,分别为硒代蛋氨酸(SeMet)、硒代乙硫氨酸(SeEt)、L-硒-甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)、硒代胱氨酸(SeCys2)。借助于标样对含硒氨基酸和二肽进行定量,5个硒肽均含MeSeCys,其中只有一个肽段含SeCys2;但在含硒氨基酸中则是以SeMet含量最高为(586.3±49.5)ng/g,最低的是SeCys2为(102.6±9.0)ng/g。

具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力的含硒四肽(SecRGD)

以精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列为基础,在N-端引入硒代半胱氨酸(Sec)设计了SecRGD序列模拟谷胱甘肽过氧化物酶(GPx),利用Fmoc固相合成法合成了SecRGD.采用ESI-MS质谱和氢化物原子荧光光谱法对硒肽进行表征,采用酶偶联法进行GPx活力测定和酶动力学分析,用噻唑蓝(MTT)比色法评价了硒肽的抗氧化效果.结果表明,该硒肽的存在形式为SecRGD的二聚体.该硒肽具有GPx活力,其催化谷胱甘肽(GSH)还原H2O2的GPx活力为5.54 U/μmol,高于经典的GPx模拟物Ebselen.稳态动力学分析结果表明,该硒肽的催化机制为乒乓机制.该硒肽具有分子量小、易溶于水、毒性低及可有效保护Vero细胞免受氧化损伤的优点,具有作为抗氧化药物的应用前景.

富硒大豆多肽对高脂致大鼠脂肪肝和抗氧化功能的影响

目的:探讨富硒大豆多肽改善高脂所致脂肪肝大鼠肝抗氧化功能的影响及机制。方法:将40只Wistar大鼠分成4组(n=10),分别饲喂标准饲料+水(NC)、标准饲料+富硒大豆多肽液(SeN)、高脂饲料+水(HC)、高脂饲料+富硒大豆多肽液(SeH),10周后处死,用苏丹Ⅲ染色肝脏组织切片观察脂肪变性程度,免疫组织化学方法测定肝组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达情况,并分析其肝功能、血脂及血清和肝匀浆中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的变化情况。结果:HC组在血清TC、TG水平、肝脏脂肪化程度、GRP78表达情况都明显高于NC、SeN、SeH组(P<0.01)。SeH组血清和肝组织中MDA含量较HC组降低(P<0.01),GSH-Px、SOD活性升高。NC和SeN两组各项指标之间无明显差异。结论:富硒大豆多肽能有效提高脂肪肝大鼠肝内抗氧化酶活性,抑制脂质过氧化反应,降低肝组织内GRP78表达。

富硒(Se)大豆肽胶囊的制备及其溶出度测定的研究

旨在通过富硒大豆肽胶囊的研制解决国内大部分地区缺硒的现状,根据富硒大豆肽吸湿性和流动性的特点,选择添加辅料改善其特性,然后通过制粒、整粒等工序装入胶囊,最后对富硒大豆肽胶囊的溶出特性进行研究。通过对4种辅料的选择,确定CMC为添加辅料,其适宜添加比例为1:4。溶出试验30min时其溶出速度较快,溶出度已达90%左右,溶出参数T50=14.72min和Td=18.93min。

血浆、红细胞和组织中硒谷胱甘肽过氧酶的测定方法及健康成人的测定值

在Paglia法的基础上建立了血浆和组织中硒谷胱甘肽过氧酶的测定方法。对测定红细胞中硒谷胱甘肽过氧酶加以改进,制备红细胞压积液。以Hicn法测定Hb的含量,方法简单,重复性好。同时观察了不同的温度和时间对酶活性的影响。本文还测定了健康成人血浆和红细胞硒谷胱甘肽过氧酶值。