四种剧毒鹅膏菌肽类毒素的HPLC分离与鉴定

利用反相高效液相色谱（ＨＰＬＣ）、紫外吸收光谱、质谱分析了灰花纹鹅膏Ａｍａｎｉｔａｆｕｌｉｇｉｎｅａ，白毒鹅膏Ａ．ｖｅｒｎａ，鳞柄白毒鹅膏Ａ．ｖｉｒｏｓａ，豹斑鹅膏Ａ．ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ等四种剧毒鹅膏菌的肽类毒素，结果表明：Ａ．ｆｕｌｉｇｉｎｅａ、Ａ．ｖｅｒｎａ含有九种标样毒素中的七种。Ａ．ｖｉｒｏｓａ含有标样中的五种；Ａ．ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ含有标样中的四种毒素。Ａ．ｆｕｌｉｇｉｎｅａ的毒素含量最高，其中最重要的ａ－ａｍａｎｉｔｉｎ含量高达６７８８．２(ｇ／ｇ干子实体，是Ａ．ｖｅｒｎａ的４倍，β－ａｍａｎｉｔｉｎ含量（２６３３．８μｇ／ｇ干子实体）是Ａｖｅｒｎａ的６倍。

海洋生物中蛋白质、肽类毒素的研究新进展

报道了海洋生物中蛋白质、肽类毒素，主要是芋螺毒素和海葵毒素的近三年最新研究进展；对它们的结构、药理和构效关系进行概述。

长白山鹅膏菌肽类毒素的HPLC分析

采用HPLC法对长白山地区分布的10种鹅膏菌中的-鹅膏毒肽(-amanitin)、鹅膏毒肽(-amanitin)和鬼笔毒肽(phalloidin)3种毒素的含量进行了测定。结果表明:白鹅膏(A.verna)和鳞柄白鹅膏(A.virsa)中含有-amanitin和-amanitin两种毒素,二者-amanitin的含量分别为 1861.85g/g和2477.02g/g,均高于欧洲产毒鹅膏(A.phalloides)中的含量(1607g/g)而接近灰花纹鹅膏Amanita fuliginea中的量(2633.80g/g)。毒鹅膏A.phalloides中含有3种毒素,并且菌蕾中的含量高于成熟子实体,尤其菌蕾中Phalloidin的含量(1113.35g/g)是灰花纹鹅膏成熟子实体中(432.5g/g)的3倍。

TurboFlow在线净化-液相色谱-串联质谱法快速检测人尿中鹅膏肽类毒素

鹅膏肽类毒素是一类环状多肽类蘑菇毒素,中毒后会造成急性肝损伤,病死率非常高。我国因误食野生毒蘑菇导致的中毒事件常有发生,测定人尿中鹅膏肽类毒素的浓度,可为临床早期诊断和救治提供有价值的信息。该研究建立了TurboFlow(TF)在线净化-液相色谱-三重四极杆质谱快速定量检测尿液中5种鹅膏肽类毒素(α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、羧基二羟鬼笔毒肽和二羟鬼笔毒肽)的新方法。尿液样品经高速离心后,直接注入TurboFlow在线净化-液相色谱-串联质谱进行分析。对影响TF在线净化的参数如TF净化柱、上样溶剂、洗脱溶剂、转移流速、转移时间等进行了优化。在优化后的实验条件下,以TurboFlow TM Cyclone柱(50 mm×0.5 mm)为净化柱,Hypersil GOLD C 18柱(100 mm×2.1 mm)为分析柱,甲醇和4 mmol/L乙酸铵为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正离子选择反应监测(SRM)模式下进行检测,基质匹配外标法定量。结果表明,鹅膏肽类毒素在1.0~50.0μg/L范围内呈现良好的线性关系,相关系数均可达到0.997以上。方法的检出限为0.15~0.3μg/L,定量限为0.5~1.0μg/L。在2.0、5.0和10.0μg/L的加标水平下,5种鹅膏肽类毒素的日内和日间回收率分别为87.0%~108.6%和86.8%~112.7%,日内、日间相对标准偏差(RSD)均小于14.5%。该检测方法准确、快速、灵敏度高、易操作,适用于公共卫生应急检测或临床中毒病因识别检测。

重组海葵肽类毒素hk2a对慢性充血性心力衰竭新西兰兔左心功能的影响

目的观察重组海葵肽类毒素hk2a对慢性充血性心力衰竭(CCHF)新西兰白兔左心功能的影响。方法采用腹主动脉缩窄术建立新西兰兔CCHF模型,利用超声心动图评价静脉注射hk2a前后不同时段兔左心功能的变化情况,并设立对照组进行比较。结果hk2a能够在给药后即刻明显增加实验兔的左室射血分数(P<0.05),作用时间持续60 min以上(P<0.05)。与西地兰治疗相比具有起效快、作用强等特点。结论新型海葵肽类毒素hk2a能够明显改善CCHF新西兰兔的左心功能。

毒鹅膏菌和鹅膏肽类毒素研究进展

在我国,经常有因为误食剧毒鹅膏菌而导致中毒的报道。本章概述了鹅膏肽类毒素的化学结构与性质、中毒的症状和机理、我国产鹅膏肽类毒素的主要蘑菇种类等,为预防鹅膏菌中毒和其应用研究提供一定的科学依据。

三种鹅膏菌培养条件及所产肽类毒素的比较研究

以外生菌根菌鹅膏菌属三个种Amanita muscaria,A.pseudoporphyria和A.fritillaria为研究材料,以生长速率为评价指标,对其最适生长温度、pH值、光照、培养基、C及N源的利用等基本培养条件及所产肽类毒素进行了比较研究。研究结果表明,三种菌株最适生长温度有差异,A.pseudoporphyria和A.fritillaria的最适温度为28℃,A.muscaria的最适温度为22℃;A.muscaria菌丝体生长的pH值范围为5-7,另外两个菌株的pH值范围为3-6;24h光照、12h光暗交替和24h黑暗对鹅膏菌的生长速率影响不大;SPDM培养基和MMN培养基都适合三种菌株的生长,但对于A.muscaria来说PDM培养基更适合其生长。鹅膏菌能够利用比较广泛的C、N源,但三个种在利用的C、N源种类上有一定的差别。通过抑芽法实验和HPLC分析分别表明三种鹅膏菌所含肽类毒素在种类和含量上有所不同,但都对绿豆发芽有一定的抑制作用。A.pseudoporphyria和A.fritillaria菌丝体中α-amanitin的含量分别为35.56μg/gDCW(drycellweight细胞干重)和26.02μg/gDCW,不含有phalloidin和β-amanitin;A.muscaria菌丝体中没有检测到α-amanitin、β-amanitin和phalloidin。结果表明供试的三种鹅膏菌在基本培养条件及所产肽类毒素方面存在种水平上的差异。

鹅膏菌肽类毒素的研究进展

鹅膏菌是一类真菌的总称,其含有的肽类毒素,常引起人和动物中毒与死亡。概述了鹅膏菌肽类毒素种类、毒素作用机理、毒性及中毒症状等方面的研究进展,并阐述了其在新药物开发、生物防治及其它等方面的应用前景。

12种剧毒鹅膏菌的肽类毒素成分鉴定及其相对含量差异比较研究

采用高效液相色谱-高分辨质谱联用技术对12种剧毒鹅膏菌的肽类毒素成分及其相对含量进行了比较研究。样品经含0.5%甲酸-50%甲醇溶液提取,采用Agilent 300Extend-C_(18)色谱柱,含0.05%TFA的20 mmol/L NH4Ac溶液-甲醇为流动相,梯度洗脱分离。12种鹅膏菌的高效液相色谱-质谱联用分析结果表明,各鹅膏菌所含毒素种类及相对含量差异较大,呈现显著的色谱指纹特征信息,12种鹅膏菌中共检测出19种化合物,13种属于已知鹅膏肽类毒素,5种为未知鹅膏肽类毒素,1种为未知小分子化合物组分。本研究为准确识别鹅膏菌的种类、鹅膏肽类毒素的鉴定、预防和鉴别鹅膏毒肽中毒,提供了科学依据。

超高效液相色谱-串联质谱法测定野生蘑菇中2类肽类毒素的含量

目的测定汉中市13批野生蘑菇中鹅膏毒肽和鬼笔毒肽类毒素的含量,判定其是否有毒。方法采用Acquity UPLCHSS T 3色谱柱(100mm×2.1mm,1.8μm);流动相A:2mmol·L-1乙酸铵溶液,流动相B:2mmol·L-1乙酸铵甲醇溶液,梯度洗脱;柱温:40℃。三重四级杆质谱检测器,在多反应检测模式(MRM)下分别选择质荷比(m/z)为19.8/86.1,903.7/86.1,847.7/157和789.6/157.0,对α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟基鬼笔毒肽和羧基二羟基鬼笔毒肽进行检测。结果 10种野生蘑菇(绒紫红菇、象牙黄斑红菇、黄盖鹅膏菌、绿菇、红黄红菇、粉柄黄红菇、绒白乳菇、红菇、松乳菇、鸡油菌)未检出毒素。结论该方法能快速、准确地检测野生蘑菇中肽类毒素。

肽类毒素(蜘蛛、蝎、芋螺)的三维结构

多肽类毒素研究是目前毒素研究的一个重点,对多肽类毒素的三维结构的研究是了解其结构与功能关系的重要基础.对蜘蛛、蝎以及芋螺这3类代表性的有毒动物的多肽类毒素在结构研究方面的进展及其三维结构的特点进行了介绍.其中,蜘蛛毒素多肽分子的结构主要发现有ICK模体(Inhibitor Cystine Knot motif)和D DH模体(disulfided-irectedh-airpin)两类,蝎毒素中长链肽类毒素分子和短链肽类毒素分子的结构明显不同,前者以CSα/β结构模体(Cyss-tabilizedα/βfold m otif)为主,后者则以α/β脚手架结构模体(α/βscaffoldm otif)为主.相对于蜘蛛和蝎而言,芋螺肽类毒素分子的三维结构则表现得更为复杂多样.

蜘蛛多肽类毒素异源表达的研究进展

蜘蛛毒液是一个巨大的天然多肽和蛋白质分子组合库,具有多种生物学功能.但仅靠从天然的蜘蛛中提取出研究所需的蜘蛛多肽类毒素远不能满足对其的全面研究和开发利用.相比化学的固相合成法合成的低产量和较高成本,利用基因工程的方法异源表达蜘蛛毒素有较大的优势.综述了近年来利用大肠杆菌表达系统、酵母表达系统、昆虫表达系统和植物表达系统异源表达蜘蛛毒素的研究进展.

QuEChERS-液相色谱-四极杆飞行时间质谱法测定毒蘑菇中5种鹅膏肽类毒素

建立了5种鹅膏肽类毒素的液相色谱-四极杆飞行时间质谱快速分析方法。样品用乙腈提取,经C;和无水硫酸钠净化,用水稀释后,四极杆飞行时间质谱电喷雾正离子模式检测。结果表明,5种鹅膏肽类毒素在10~200 ng/mL的范围内均呈良好的线性关系,相关系数均>0.99,方法检出限为0.03~0.36 mg/kg,平均回收率为90.1%~105.4%,相对标准偏差为0.1%~4.1%。该方法快速简便、回收率高,适用于毒蘑菇中5种鹅膏肽类毒素的定性定量分析。

超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法快速测定野生蘑菇中6种鹅膏肽类毒素

建立了超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱快速测定野生蘑菇中6种鹅膏肽类毒素的分析方法。样品采用甲醇-水(V/V=50/50)提取和水稀释后,采用ACQUITY UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7μm)进行分离,以0.1%乙酸-乙腈和水为流动相进行梯度洗脱,四极杆飞行时间质谱电喷雾正离子模式检测。6种鹅膏肽类毒素在5~100 ng·mL^(-1)均呈现良好的线性关系,相关系数均大于0.995,方法检出限为0.4 mg·kg^(-1),定量限为1 mg·kg^(-1)。在3个加标水平下平均回收率为74.1%~119.9%,相对标准偏差为0.1%~6.7%(n=6)。本方法快速准确,适合于野生蘑菇中6种鹅膏肽类毒素的快速检测。

含鹅膏肽类毒素蘑菇中毒药物治疗研究进展

90%以上的蘑菇中毒死亡事件是由含鹅膏肽类毒素蘑菇所致,目前该类蘑菇中毒尚无特效解毒药物。本文根据不同作用机制,将治疗药物分为胃肠道吸收抑制剂、肝细胞摄取抑制剂、抗氧化剂、RNAPⅡ结合抑制剂及中药5类,并对其作用机制、临床适应证、给药剂量进行综述,以期为临床治疗提供指导。

混合阳离子固相萃取净化结合UPLC-MS/MS测定蘑菇及生物样本中鹅膏肽类毒素

建立了一种混合阳离子固相萃取净化结合超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定蘑菇、尿液及血浆中α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽和羧基二羟鬼笔毒肽的方法。对于蘑菇样本,烘干粉碎后纯水超声提取,经混合阳离子柱(MCX)净化;对于尿液和血浆样本,乙腈提取后,经PRi ME MCX柱净化。净化的样本以甲醇和5 mmol/L甲酸铵水溶液为流动相,在ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱上进行分离,电喷雾正离子多反应监测(MRM)模式检测,基质匹配外标法定量。结果表明,5种鹅膏肽类毒素在0.5~1000μg/L范围内均呈良好的线性关系,相关系数R^(2)>0.999。方法检出限为0.1~0.5μg/kg(μg/L),定量限为0.5~1.0μg/kg(μg/L);3个加标浓度下的平均回收率为79.1%~103.5%,相对标准偏差(RSD)为0.2%~9.6%。该方法适用于含鹅膏毒肽蘑菇中毒的确证与临床诊断。

毒蘑菇中鹅膏肽类毒素的超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱同时测定法

目的建立超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-mass spectrometer detector quadrupole time of flight,UPLC-Q-TOF)定性定量检测毒蘑菇中鹅膏肽类毒素的分析方法。方法样品加入甲醇后均质,超声离心提取,待测液采用ACQUITY UPLC?HSS T_(3)1.8μm色谱柱(2.1×50 mm)进行分离,以0.1%氨水溶液-甲醇为流动相进行梯度洗脱0 min,2%B;0~0.5 min,2%B;0.5~6.0 min,95%B;6.0~7.0 min,95%B;7.0~8.0 min,2%B,流速0.3 mL/min,柱温40℃,进样量2.0μL。采用超高效液相色谱四级杆飞行时间质谱仪对毒蘑菇进行分离、鉴定鹅膏菌中的毒素成分。结果毒蘑菇样品中1、2、3、5、6、7、8号样品均未检出鹅膏肽类毒素;4号样品共检出6种组分,经鉴定为已知的鹅膏肽类毒素,分别是α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽、羧基二羟鬼笔毒肽和二羟鹅膏毒肽酰胺。进一步建立鹅膏肽类毒素快速定量方法,5种鹅膏肽类毒素在25~1000μg/L范围内呈现良好的线性关系,相关系数为0.9912~0.9989,平均加标回收率为89.5%~110.5%,相对标准偏差为3.80%~7.80%。其中α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽、羧基二羟鬼笔毒肽的含量分别是(19.701±0.175)、(0.098±0.014)、(1.548±0.001)、(0.331±0.002)及(0.108±0.060)mg/kg,二羟鹅膏毒肽酰胺与羧基二羟鬼笔毒肽相对含量为0.754 mg/kg。结论该方法用于测定毒蘑菇中多种鹅膏肽类毒素,方法简单、快速、可靠,为进食毒蘑菇突发中毒患者的快速临床诊断和及时治疗提供了有效的科学依据。

鹅膏肽类毒素的研究进展

本文在阅读国内外鹅膏肽类毒素相关文献的基础上，从鹅膏肽类毒素的种类、来源、毒性及毒作用机制、中毒表现及治疗方面做出归纳整理，以期为今后鹅膏肽类毒素的进一步研究提供一定帮助。

玫瑰红鹅膏主要肽类毒素的HPLC测定及其对白色念珠菌的抑制活性

【目的】检测玫瑰红鹅膏中所含肽类毒素及其含量,并对其肽类毒素的抑制白色念珠菌活性进行研究。【方法】采用HPLC和ESI-MS法从玫瑰红鹅膏中分离并鉴定出所含肽类毒素,并采用HPLC法测定其子实体、菌盖及菌柄和菌托混合部分中肽类毒素的含量。同时,采用纸片法研究了玫瑰红鹅膏粗毒液和分离到的单品肽类毒素对白色念珠菌JLC31680和JLC31681的抑菌作用。【结果】分离并鉴定出α-鹅膏毒肽(α-AMA)、β-鹅膏毒肽(β-AMA)和二羟鬼笔毒肽(PHD)等3种肽类毒素。玫瑰红鹅膏子实体中α-AMA、β-AMA、PHD的含量分别为30.3168、6.9932和9.9459 mg/g;菌盖中含量分别为44.9573、11.0798和11.3025 mg/g;菌柄和菌托混合部分中:α-AMA 11.6904 mg/g和PHD 7.9775 mg/g,β-AMA未检出。粗毒液、α-AMA、β-AMA和PHD对白色念珠菌JLC31680均具有很好的抑制作用,抑制率分别达到11.96%、32.52%、23.29%(p<0.01)和15.46%(p<0.05);粗毒液和β-AMA对白色念珠菌JLC31681的最高抑制率分别为10.16%和11.10%(p<0.01),α-AMA对白色念珠菌JLC31681最高抑菌率为6.89%(p<0.05)。【结论】玫瑰红鹅膏中的三种肽类毒素的含量较高,是制备肽类毒素的新资源;其具有抑制白色念珠菌的活性,可开发利用。

鹅膏肽类毒素质谱检测方法的研究进展

概述了鹅膏肽类毒素质谱检测方法的研究进展。重点介绍了适用于鹅膏肽类毒素的各种质谱检测方法,主要包括液相色谱质谱、毛细管电泳质谱和超高效液相色谱质谱等方法。