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嗜肺军团菌PAL、HSP60抗原基因在真核细胞中表达的实验研究
被引量:
1
1
作者
田玉
陈建平
+2 位作者
张建国
杨春蕾
刘明杰
《航天医学与医学工程》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第3期188-192,共5页
目的研究嗜肺军团菌PAL、HSP60抗原基因在真核细胞中的表达,为嗜肺军团菌DNA疫苗的研制提供实验依据。方法将本室已构建的重组质粒pcDNA3.1-PAL和重组质粒pcDNA3.1-HSP60分别及混合转染NIH3T3细胞,通过免疫荧光和RT-PCR检测其瞬时表达...
目的研究嗜肺军团菌PAL、HSP60抗原基因在真核细胞中的表达,为嗜肺军团菌DNA疫苗的研制提供实验依据。方法将本室已构建的重组质粒pcDNA3.1-PAL和重组质粒pcDNA3.1-HSP60分别及混合转染NIH3T3细胞,通过免疫荧光和RT-PCR检测其瞬时表达和稳定表达产物。结果重组质粒pcDNA3.1-PAL、pcDNA3.1-HSP60以及混合pcDNA3.1-PAL和pcDNA3.1-HSP60转染NIH3T3细胞后均获得了有效表达。结论本研究结果为嗜肺军团菌核酸疫苗的进一步研究奠定了基础。
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关键词
嗜肺军团菌
肽聚糖关联脂蛋白
热休克
蛋白
60
真核表达
下载PDF
职称材料
嗜肺军团菌快速检测胶体金试纸的研制
被引量:
5
2
作者
张秋
李杰
+3 位作者
王猛
王毅
杨波
胡征
《检验医学》
CAS
2020年第7期726-733,共8页
目的研制特异性检测嗜肺军团菌(Lp)的胶体金免疫层析试纸条。方法通过基因工程制备Lp-肽聚糖关联脂蛋白(PAL)重组蛋白并进行纯化,筛选分泌抗Lp-PAL重组蛋白单克隆抗体(简称单抗)的杂交瘤细胞株,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫...
目的研制特异性检测嗜肺军团菌(Lp)的胶体金免疫层析试纸条。方法通过基因工程制备Lp-肽聚糖关联脂蛋白(PAL)重组蛋白并进行纯化,筛选分泌抗Lp-PAL重组蛋白单克隆抗体(简称单抗)的杂交瘤细胞株,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹法鉴定筛选到的Lp-1和Lp-2单抗的特异性,采用生物膜层干涉(BLI)技术鉴定抗原抗体反应的特异性。依据双抗体夹心原理制备胶体金免疫层析试纸条,并初步评价其检测性能(特异性、灵敏度及稳定性)。结果筛选到2株高效分泌抗Lp-PAL蛋白抗体的杂交瘤细胞株Lp-1和Lp-2,纯化得到2种单抗Lp-1和Lp-2。间接ELISA检测结果表明,Lp-1及Lp-2单抗只与Lp发生阳性反应,与其他10种呼吸道常见病原菌(肺炎链球菌、卡他莫拉菌、流感嗜血杆菌、肺炎支原体、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、奇异变形杆菌)无交叉反应。免疫印迹法结果显示,Lp-1和Lp-2单抗与Lp-PAL天然蛋白和重组蛋白有强反应,与肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌无目的反应条带。BLI技术的验证结果显示,抗原抗体的相互作用力均较强,解离速率慢,Lp-1和Lp-2单抗识别的是同一抗原的不同抗原表位,且只与Lp有强反应,与其他10种细菌均无特异性结合反应。制备的胶体金免疫层析试纸条最低检出限为1×107 CFU/mL,与Lp常见4种血清型(Lp14、Lp12、Lp9和Lp6)均有特异性反应,与肺炎链球菌、卡他莫拉菌等10种常见呼吸道病原菌均无交叉反应,可在25℃环境下稳定6个月。结论 PAL蛋白具有高度的表面暴露性和较强的抗原性,可作为Lp的检测标志物,以此为基础制备的胶体金免疫层析试纸条具有快速、简便、灵敏的特点,适用于Lp感染的快速检测。
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关键词
嗜肺军团菌
单克隆抗体
肽聚糖关联脂蛋白
生物膜层干涉技术
胶体金免疫层析法
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职称材料
题名
嗜肺军团菌PAL、HSP60抗原基因在真核细胞中表达的实验研究
被引量:
1
1
作者
田玉
陈建平
张建国
杨春蕾
刘明杰
机构
四川大学华西基础医学与法医学院寄生虫学教研室
四川大学华西基础医学与法医学院形态学实验室
四川大学生命科学院医学细胞生物学教研室
出处
《航天医学与医学工程》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第3期188-192,共5页
基金
高等学校博士学科点专项科研基金(No20060610092)
四川省学术技术带头人培养基金(No4200316)资助
文摘
目的研究嗜肺军团菌PAL、HSP60抗原基因在真核细胞中的表达,为嗜肺军团菌DNA疫苗的研制提供实验依据。方法将本室已构建的重组质粒pcDNA3.1-PAL和重组质粒pcDNA3.1-HSP60分别及混合转染NIH3T3细胞,通过免疫荧光和RT-PCR检测其瞬时表达和稳定表达产物。结果重组质粒pcDNA3.1-PAL、pcDNA3.1-HSP60以及混合pcDNA3.1-PAL和pcDNA3.1-HSP60转染NIH3T3细胞后均获得了有效表达。结论本研究结果为嗜肺军团菌核酸疫苗的进一步研究奠定了基础。
关键词
嗜肺军团菌
肽聚糖关联脂蛋白
热休克
蛋白
60
真核表达
Keywords
Legion, ella pneumophila
peptidoglycan-associated lipoprotein
heat shock protein 60
eukaryotic express
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
嗜肺军团菌快速检测胶体金试纸的研制
被引量:
5
2
作者
张秋
李杰
王猛
王毅
杨波
胡征
机构
湖北工业大学生物工程与食品学院
湖北工业大学发酵工程教育部重点实验室
工业发酵湖北省协同创新中心
出处
《检验医学》
CAS
2020年第7期726-733,共8页
文摘
目的研制特异性检测嗜肺军团菌(Lp)的胶体金免疫层析试纸条。方法通过基因工程制备Lp-肽聚糖关联脂蛋白(PAL)重组蛋白并进行纯化,筛选分泌抗Lp-PAL重组蛋白单克隆抗体(简称单抗)的杂交瘤细胞株,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹法鉴定筛选到的Lp-1和Lp-2单抗的特异性,采用生物膜层干涉(BLI)技术鉴定抗原抗体反应的特异性。依据双抗体夹心原理制备胶体金免疫层析试纸条,并初步评价其检测性能(特异性、灵敏度及稳定性)。结果筛选到2株高效分泌抗Lp-PAL蛋白抗体的杂交瘤细胞株Lp-1和Lp-2,纯化得到2种单抗Lp-1和Lp-2。间接ELISA检测结果表明,Lp-1及Lp-2单抗只与Lp发生阳性反应,与其他10种呼吸道常见病原菌(肺炎链球菌、卡他莫拉菌、流感嗜血杆菌、肺炎支原体、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、奇异变形杆菌)无交叉反应。免疫印迹法结果显示,Lp-1和Lp-2单抗与Lp-PAL天然蛋白和重组蛋白有强反应,与肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌无目的反应条带。BLI技术的验证结果显示,抗原抗体的相互作用力均较强,解离速率慢,Lp-1和Lp-2单抗识别的是同一抗原的不同抗原表位,且只与Lp有强反应,与其他10种细菌均无特异性结合反应。制备的胶体金免疫层析试纸条最低检出限为1×107 CFU/mL,与Lp常见4种血清型(Lp14、Lp12、Lp9和Lp6)均有特异性反应,与肺炎链球菌、卡他莫拉菌等10种常见呼吸道病原菌均无交叉反应,可在25℃环境下稳定6个月。结论 PAL蛋白具有高度的表面暴露性和较强的抗原性,可作为Lp的检测标志物,以此为基础制备的胶体金免疫层析试纸条具有快速、简便、灵敏的特点,适用于Lp感染的快速检测。
关键词
嗜肺军团菌
单克隆抗体
肽聚糖关联脂蛋白
生物膜层干涉技术
胶体金免疫层析法
Keywords
Legionella pneumophila
Monoclonal antibody
Peptidoglycan-associated lipoprotein
Bio-layer interferometry technology
Colloidal gold immunochromatography assay
分类号
R446.1 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
嗜肺军团菌PAL、HSP60抗原基因在真核细胞中表达的实验研究
田玉
陈建平
张建国
杨春蕾
刘明杰
《航天医学与医学工程》
CAS
CSCD
北大核心
2007
1
下载PDF
职称材料
2
嗜肺军团菌快速检测胶体金试纸的研制
张秋
李杰
王猛
王毅
杨波
胡征
《检验医学》
CAS
2020
5
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职称材料
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