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肽聚糖脱乙酰酶Rv1096对分枝杆菌与宿主细胞相互作用的影响
被引量:
1
1
作者
贾丽秋
王静
+5 位作者
刘洋
杨淑凤
黄玉昆
张飞
万延民
马郁芳
《微生物学免疫学进展》
2020年第2期8-15,共8页
目的探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)肽聚糖脱乙酰酶Rv1096对分枝杆菌与宿主细胞相互作用的影响。方法利用过表达Rv1096基因的重组耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis, MS)Rv1096,通过差速离心及胰蛋白酶消化试验...
目的探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)肽聚糖脱乙酰酶Rv1096对分枝杆菌与宿主细胞相互作用的影响。方法利用过表达Rv1096基因的重组耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis, MS)Rv1096,通过差速离心及胰蛋白酶消化试验,确定Rv1096蛋白的亚细胞定位;通过氨基酸定点突变联合伴刀豆凝集素A(Concanavalin A, ConA)免疫印迹确定Rv1096的O-甘露糖基化位点;运用刃天青显色法检测MSRv1096对溶菌酶的抵抗力;通过巨噬细胞感染试验,分析了Rv1096对耻垢分枝杆菌细胞内存活能力和宿主细胞炎症应答的影响。结果确定了Rv1096在重组耻垢分枝杆菌MSRv1096中的亚细胞定位在细胞壁;发现Rv1096蛋白含有三个O-甘露糖基修饰位点(265Thr,266Ser,267Ser);细胞外测试结果表明,Rv1096能增强耻垢分枝杆菌对溶菌酶的抵抗能力,最低抑菌质量浓度从1.5 mg/mL升至2.5 mg/mL,而细胞感染显示其并不能显著增强耻垢分枝杆菌在人单核细胞白血病细胞(THP-1细胞)内的存活能力;定量PCR检测结果显示,过表达Rv1096的耻垢分枝杆菌刺激THP-1细胞分泌炎症因子(TNF-α,IL-6和IL-1β)的能力显著下降。通过平行对比证明若删除O-甘露糖基化位点(265Thr,266Ser,267Ser),对Rv1096基因功能无显著影响。结论 Rv1096是一个细胞壁相关蛋白,具有三个O-甘露糖基化位点。过表达Rv1096对耻垢杆菌在宿主细胞内的存活能力无显著影响,但能够降低宿主细胞对耻垢分枝杆菌的炎症因子应答,且上述功能不受O-甘露糖基化修饰影响。
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关键词
结核分枝杆菌
肽聚糖脱乙酰酶
O-甘露糖基化蛋白
溶菌
酶
抵抗
巨噬细胞
原文传递
题名
肽聚糖脱乙酰酶Rv1096对分枝杆菌与宿主细胞相互作用的影响
被引量:
1
1
作者
贾丽秋
王静
刘洋
杨淑凤
黄玉昆
张飞
万延民
马郁芳
机构
大连医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室
复旦大学附属华山医院感染科
大连医科大学基础医学院微生物学教研室
佳木斯大学基础医学院免疫学教研室
出处
《微生物学免疫学进展》
2020年第2期8-15,共8页
基金
国家自然科学基金(81671636)
文摘
目的探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)肽聚糖脱乙酰酶Rv1096对分枝杆菌与宿主细胞相互作用的影响。方法利用过表达Rv1096基因的重组耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis, MS)Rv1096,通过差速离心及胰蛋白酶消化试验,确定Rv1096蛋白的亚细胞定位;通过氨基酸定点突变联合伴刀豆凝集素A(Concanavalin A, ConA)免疫印迹确定Rv1096的O-甘露糖基化位点;运用刃天青显色法检测MSRv1096对溶菌酶的抵抗力;通过巨噬细胞感染试验,分析了Rv1096对耻垢分枝杆菌细胞内存活能力和宿主细胞炎症应答的影响。结果确定了Rv1096在重组耻垢分枝杆菌MSRv1096中的亚细胞定位在细胞壁;发现Rv1096蛋白含有三个O-甘露糖基修饰位点(265Thr,266Ser,267Ser);细胞外测试结果表明,Rv1096能增强耻垢分枝杆菌对溶菌酶的抵抗能力,最低抑菌质量浓度从1.5 mg/mL升至2.5 mg/mL,而细胞感染显示其并不能显著增强耻垢分枝杆菌在人单核细胞白血病细胞(THP-1细胞)内的存活能力;定量PCR检测结果显示,过表达Rv1096的耻垢分枝杆菌刺激THP-1细胞分泌炎症因子(TNF-α,IL-6和IL-1β)的能力显著下降。通过平行对比证明若删除O-甘露糖基化位点(265Thr,266Ser,267Ser),对Rv1096基因功能无显著影响。结论 Rv1096是一个细胞壁相关蛋白,具有三个O-甘露糖基化位点。过表达Rv1096对耻垢杆菌在宿主细胞内的存活能力无显著影响,但能够降低宿主细胞对耻垢分枝杆菌的炎症因子应答,且上述功能不受O-甘露糖基化修饰影响。
关键词
结核分枝杆菌
肽聚糖脱乙酰酶
O-甘露糖基化蛋白
溶菌
酶
抵抗
巨噬细胞
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
Peptidoglycan deacetylase
O-mannosylated protein
Lysozyme resistance
Macrophage
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
肽聚糖脱乙酰酶Rv1096对分枝杆菌与宿主细胞相互作用的影响
贾丽秋
王静
刘洋
杨淑凤
黄玉昆
张飞
万延民
马郁芳
《微生物学免疫学进展》
2020
1
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