携蜂毒素基因重组腺病毒对HepG2细胞甲胎蛋白和基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的观察以甲胎蛋白转录调控序列(transcription regulatory element of-αfetoprotein,rAFP)驱动蜂毒素基因转录的重组腺病毒对肝癌细胞生物学性状的影响。方法将蜂毒素基因置于rAFP之后,用细菌内高效同源重组法将目的基因重组入腺病毒质粒中,重组质粒在293细胞中进行腺病毒的包装。携有蜂毒素基因的腺病毒感染肝癌细胞后,逆转录多聚酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)观察蜂毒素基因的转录;甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定蜂毒素基因转染对肝癌细胞增殖的影响;酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)双抗体夹心法定量检测甲胎蛋白(-αfetoprotein,AFP);流式细胞术检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotein-ase-2,MMP-2)分子表达情况。结果重组腺病毒载体构建成功,体外转染HepG2肝癌细胞后,蜂毒素基因在rAFP的控制下,可以抑制AFP阳性肝癌细胞的增殖,明显降低其AFP的生成量,但MMP-2分子的表达却是升高的。结论蜂毒素基因转染肝癌细胞后,可改变肿瘤细胞的部分生物学行为,使其表达谱发生改变。

蛋白酶在EDTA溶解颗粒型胆色素中的作用研究

利用化学分析方法考查了有无蛋白酶存在时EDTA溶解颗粒型胆色素石的溶石效果。发现蛋白酶的加入可使EDTA螯合钙的能力提高 6 .8倍 ,EDTA吸收钙的量占总钙的 93 .7%。

CPP32(Caspase-3)在大肠腺瘤和腺癌中的表达及其与预后的关系

目的 探讨大肠腺瘤和大肠癌中 CPP32 (Caspase- 3)的表达及其与预后的关系。方法 应用 S- P免疫组化技术对 15例正常大肠黏膜、39例大肠腺瘤和 88例大肠腺癌进行检测。结果 15例正常大肠黏膜、39例大肠腺瘤和 88例大肠腺癌中 ,CPP32阳性表达率分别为 88.7%、5 6 .4%和 43.8% ,三者比较差异有极显著性 (x2 =10 .2 4,P<0 .0 1)。 CPP32表达与组织学分级呈正相关。 88例大肠癌中 ,CPP32阳性表达的术后 5年生存率为73.7% ,明显高于阴性表达组的 34% (x2 =13.6 1,P<0 .0 1)。结论 CPP32表达的检测有助于大肠癌的诊断及预后的判断。

血管性血友病因子裂解蛋白酶在肾脏疾病中的意义

血管性血友病因子裂解蛋白酶 (vWF -CP)可将大分子量的血管性血友病因子 (vWF)多聚体水解成为生理状态下的小分子肽段。vWF -CP活性的改变或vWF对该酶敏感性的改变均可影响vWF多聚体的降解 ,改变vWF与血小板和内皮下胶原的结合能力。而肾脏疾病如溶血性尿毒症综合征、狼疮性肾炎、肾移植术后等亦有凝血功能的异常。本文就血浆vWF -CP的活性水平在肾脏疾病中的意义作一综述。

8-氯腺苷对HL-60细胞中蛋白酶体活性的抑制作用

背景与目的:蛋白酶体是真核细胞中具有多相催化活性的蛋白酶复合体,国外报道,蛋白酶体可作为新靶点来筛选抗肿瘤药物。8-氯腺苷(8-chloroadenosine,8-CA)由本室合成,研究已证实8-CA对肉瘤细胞株S180、肝癌细胞株H22及人胃癌异种移植瘤生长有抑制作用。但8-CA抑制肿瘤生长与蛋白酶体的关系还不清楚。本研究拟探讨8-CA对人早幼粒细胞性白血病细胞HL-60中20S蛋白酶体的三种酶活性(包括糜蛋白酶样活性、胰蛋白酶样活性、多肽-谷氨酰-多肽水解酶活性)的影响。方法:不同浓度的8-CA作用于HL-60细胞24、48、72h后,提取细胞总蛋白,分别检测总蛋白提取液中20S蛋白酶体的三种酶活性,并采用免疫沉淀法测定纯化蛋白酶体的糜蛋白酶样活性,酶活性均以特异底物被蛋白酶体水解后产生的荧光吸光度表示。结果:0.1μmol/L8-CA作用于HL-60细胞48h,对总蛋白提取液中20S蛋白酶体的三种酶活性均有显著抑制作用,并且随着8-CA浓度的增加,其抑制作用逐渐增强。5μmol/L8-CA作用48h,对糜蛋白酶样活性、胰蛋白酶样活性、多肽-谷氨酰-多肽水解酶活性抑制率分别为44.96%、54.52%和48.36%;作用72h,对三种酶活性的抑制率分别为67.53%、70.48%和64.08%。1μmol/L和5μmol/L8-CA作用48h,对HL-60中蛋白酶体的糜蛋白酶样活性抑制率分别为68.