肽脂质(N^+C_5 Gly2C_(16))的合成改进

针对肽脂质(N+C5G ly2C16)的合成中分离纯化过程复杂,产率太低的问题,对它的合成过程尤其是产物纯化方法进行了改进。对每一步反应都进行了使产率明显提高的改进,尤其是叔丁氧甲酰甘氨酰双十六烷基胺油状物不经纯化即进行分解生成甘氨酰双十六烷基胺三氟乙酸盐。完全用重结晶取代了层析方法进行各步产物的纯化,使合成过程简捷、高效,肽脂质合成规模可以不受纯化方式的限制,合成总产率由2%提高到了23%。

一种含有拟冠醚结构双子型肽脂质的合成改进

针对以2,5,8,11-四氧十二烷二酰基(TEO)连接的含有组氨酸残基的双子型肽脂质化合物N2,N2′-2,5,8,11-四氧十二烷二酰-双(N,N-双十六烷基-L-组氨酰胺)合成收率低的问题进行了改进。首先去掉双十六烷基-L-组氨酰胺上伯胺基和咪唑基团上叔丁氧羰基(Boc)或对甲苯磺酰基(Tos)的保护,然后与TEO再进行反应,反应后的产物分离纯化容易,收率可达58%。

肽脂质在毛细管胶束电动色谱中的应用

以自主合成的肽脂质(N+C5Gly2C16)作为表面活性剂进行毛细管胶束电动色谱(MEKC)研究。测定了不同pH值条件下的迁移时间窗口,并且与十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)为准固定相的MEKC模式对比,考察了硫脲的保留行为。结果表明,肽脂质可以在较低的浓度下形成胶束,具有背景较低的特征。在优化条件下,采用此系统成功分离了石芽茶提取物,说明以肽脂质作为表面活性剂的MEKC系统具有特殊的分离选择性。

碳纳米管-肽脂质递送系统体外酶降解研究

目的探究光热与基因联合治疗递送系统后续的酶降解过程。方法用肽脂质包覆碳纳米管构建光热/基因联合治疗递送载体单壁碳纳米管-肽脂质复合载体(CDO/SCNT)和多壁碳纳米管-肽脂质复合载体(CDO/MCNT)。采用热重分析考察递送载体的结合程度。使用辣根过氧化物酶(HRP)体外模拟酶环境,通过拉曼光谱和透射电子显微镜观察递送载体的酶降解性能。结果CDO/SCNT中SCNT占38.5%,CDO/MCNT中MCNT占34.2%,肽脂质成功包覆在碳纳米管表面。载体在酶环境下7 d就发生降解,28 d时,拉曼光谱可见CDO/SCNT载体D带的结晶结构紊乱程度与G带的E2g振动信号峰强度比值达到0.48,而未包覆肽脂质层的SCNT达到0.31;透射电镜观察到2种递送载体中碳纳米管破碎;CDO/SCNT的酶降解程度要高于CDO/MCNT。结论HRP酶可催化H2O_(2)氧化石墨结构生成CO_(2),肽脂质层有助于碳纳米管(CNTs)的酶降解,CDO/SCNT载体具有良好的酶降解性能。

合成脂质对包封VB_(12)脂质体性能的改进

以反相蒸发法制备VB12脂质体,通过加入合成脂质化合物,包括单脂酰甘油、二脂酰甘油、肽脂质(N+C5Gly2C16),改进卵磷脂(胆固醇)脂质体对VB12的包封作用。实验结果表明,单脂酰甘油及肽脂质(N+C5Gly2C16)对提高包封率和减少泄漏率有明显的促进作用,包封率分别由70.4%提高到77.09%和79.84%,泄漏率分别由9.5%下降到6.01%和5.41%。

富含支化精氨酸的两亲性阳离子脂质肽体内外mRNA基因递送能力及安全性评价

mRNA基因治疗因其可扩展、修饰,不需要进入细胞核及不整合宿主遗传基因等优势而备受关注。在基因治疗中,将mRNA安全有效地递送到细胞内对于基因治疗的成功至关重要。本研究基于前期设计合成的富含支化精氨酸的两亲性阳离子脂质肽(dendritic arginine&disulfide bond-containing cationic lipopeptide,RLS)基因载体在斑马鱼体内成功实现比商品化试剂Lipofectamine 2000高1.5倍的mRNA转染效果,并通过体外细胞毒性和斑马鱼体内生物安全性研究证实其具有良好的生物安全性。首先,通过核磁共振氢谱(1H NMR)及飞行时间质谱(MALDI-TOF)对阳离子脂质肽的化学成分进行表征。通过动态光散射粒度分析仪(DLS)测试的粒径和电位结果显示,在氮磷(N/P)比为20时,RLS与mRNA复合组装体形成平均粒径约220 nm、表面ζ电位约+21 mV的均匀纳米粒子。体外基因转染中,RLS在人胚肾293细胞(HEK293)和大鼠间充质干细胞(MSC)中的转染效率较Lipofectamine 2000分别提高1.2和3倍。此外,将RLS显微注射至斑马鱼胚胎后,通过评价生存率、孵化率和致畸率等指标,进一步证实了其在体内良好的安全性。综上所述,该富含支化精氨酸的两亲性阳离子脂质肽RLS具有优良的mRNA递送性能和安全性。

阳离子脂质肽用于单纯型大疱性表皮松解症基因治疗的初步评价

目的合成两亲性阳离子脂质肽(RLS),通过报告绿色荧光蛋白基因(pEGFP)及治疗基因野生型角蛋白14(KRT14)的表达水平检测,考察其在小鼠成纤维细胞L929、小鼠胚胎成纤维细胞NIH-3T3和人永生化角质形成细胞HACAT中的基因递送效率。方法利用1HNMR和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱表征RLS的化学结构。采用溶剂注入法制备RLS自组装体,检测其与基因复合前后的粒径、电位。将RLS自组装体与pEGFP静电吸附形成的基因复合物转染至L929、NIH-3T3、HACAT,利用EGFP表达平均荧光强度(MFI)半定量法评估复合物的转染效率,并在转染48 h后,采用CCK-8试剂法考察复合物对以上3种细胞的毒性。实时荧光定量PCR(q-PCR)检测KRT14 mRNA的表达水平。结果成功制备了粒径为142.8±0.9 nm,Zeta电位为28.7±0.4 mV的RLS自组装体。将其与DNA复合后,粒径增至167.1±2.3 nm,Zeta电位降至20.2±0.5 mV。RLS基因复合物在3种细胞中均未显示明显毒性。在转染L929、NIH-3T3和HACAT细胞后,RLS组的pEGFP的平均荧光强度分别为96、46、33。q-PCR结果显示:在L929、NIH-3T3、HACAT细胞中,RLS组KRT 14 mRNA的表达水平分别约是Lipo2000的130、100和5倍,是PEI的1.7×10^(5)、120、5倍,证明了阳离子脂质肽具有高的基因递送效率。结论RLS作为一种高效、安全的基因递送载体。在由KRT14基因突变引起的单纯型大疱性表皮松解症遗传性皮肤疾病中,具有一定的应用潜力。

受体的分子结构对超分子体系人工信号转导过程的影响

利用仅存在甲基差异的两种人工受体研究受体的分子结构对超分子体系的人工信号转导过程的影响。分别合成了用于组建人工信号转导系统的阳离子型肽脂质(N+C5Ala2C16)和两种在活性氨基的邻位上存在甲基差异的人工受体:N,N-二-十六烷基-甘氨酰胺(Gly2C16)和N,N-二-十六烷基-丙氨酰胺(Ala2C16)。分别以两种受体构建了表达信号转导机能的超分子体系,利用紫外-可见光谱检测了两种受体与信号分子吡哆醛磷酸(PLP)的作用特点及通过第二信使(Cu2+)启动乳酸脱氢酶(LDH)报告系统的特点。结果表明:甲基使人工受体与信号分子的表观结合常数下降(甘氨酰类脂受体为246000,丙氨酰类脂受体为120000)、使人工受体-信号分子复合物的紫外吸收发生红移、使人工受体-信号分子-第二信使分子复合物的紫外吸收发生红移、并降低信号分子对LDH报告系统的激活活性(甘氨酰类脂受体可恢复到至92.8%,丙氨酰类脂只恢复到83%)。证明了人工受体中的甲基抑制了类脂受体与信号分子的结合,并影响超分子体系的人工信号转导活性。

慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者氧化应激与肺功能的相关性研究

目的观察慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者血清过氧化脂质(LPO)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢(CAT)水平,探讨其氧化应激水平与肺功能的相关性,为慢阻肺患者的多方面治疗提供指导思路。方法选择2014年6月至2016年6月符合标准的慢阻肺急性加重期患者60例(慢阻肺组)和健康体检者60例(对照组),检测血清LPO、GSH-Px、CAT水平,同时测定肺功能,比较健康体检者和慢阻肺急性加重期患者的氧化应激水平和不同分级肺功能的慢阻肺患者的氧化应激水平,分析其与肺功能的相关性。结果慢阻肺组患者血清LPO水平明显高于对照组,而GSH-Px、CAT水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。慢阻肺患者血清LPO水平随着肺功能受损程度的加重而数值逐渐升高,其与肺功能呈正相关(P<0.05),GSH-Px、CAT水平随着肺功能受损程度的加重而数值逐渐降低,其与肺功能呈负相关(P<0.05)。结论氧化/应激是慢阻肺功能受损的原因之一,临床上可根据以上资料对患者病情及预后进行初步判断并进行相关治疗,以最大程度减轻患者痛苦及降低经济负担,从而为临床服务。