枯草杆菌蛋白酶水解对大豆蛋白肽谱变化规律的影响

该研究针对芽孢菌来源的枯草杆菌蛋白酶对大豆蛋白的水解过程,探究过程中形成肽谱的变化规律。使用高效液相色谱-电喷雾四极杆飞行时间串联质谱检测不同时间点的水解多肽,基于非特异性酶切肽谱鉴定方法,解析多肽序列和组成,展示肽谱的动态变化特征和氨基酸位点种类选择的倾向性。结果发现,枯草杆菌蛋白酶更倾向于酶切大豆蛋白中组氨酸C端、天冬酰胺C端、丙氨酸N端和苏氨酸N端的肽键。

系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎患者ANA、ENA多肽谱及抗ds-DNA抗体联合检测的意义

系统性红斑狼疮(SLE)患者81例,类风湿性关节炎(RA)患者46例,健康体检者30例,抽取血液,分离血清,分别用间接免疫荧光法检测ANA、免疫印迹法检测ENA多肽谱、金标免疫斑点法检测抗ds-DNA抗体。发现SLE患者中,ANA阳性率为90.1%,ENA阳性率为85.2%,抗ds-DNA抗体阳性率为61.7%,三种抗体联合检测阳性率达97.5%;RA患者阳性率分别为34.8%、19.6%、15.2%、52.2%。提示自身免疫性疾病患者体内存在多种自身抗体,联合检测ANA、ENA、抗ds-DNA三项指标有助于疾病的诊断和鉴别诊断。

应用RP-HPLC分析基因工程人表皮生长因子肽谱

用DTT还原rhEGF中的二硫键，并用碘乙酰胺封闭巯基，用TPCK处理的胰蛋白酶消化rhEGF，经RP－HPLC分析，发现不同工程菌生产的rhEGF存在结构的细微差别。该法具有灵敏度高、重现性好等优点，适用于基因工程产品肽谱的常规检定。

液相色谱—质谱法(LC-MS)分析细胞色素C酶解肽谱及一级结构

本文采用液相色谱—质谱联用法（LC／MS），对一种蛋白质—细胞色素C（Cyt．C）的胰蛋白酶酶解产物进行了质量肽谱分析，确定了各肽段在蛋白质中的位置。并用串联质谱（MS／MS）分析了大部分肽段的序列，均获得满意的结果。

微柱高效液相色谱分析基因工程药物rhG-CSF肽谱的应用研究

用二硫代苏糖醇还原基因工程药物产品中的二硫键，并用碘乙酰胺封闭巯基，再用胰蛋白酶裂解，经微柱高效液相色谱分离分析rhG－CSF产品的肽谱，3个批号批间结果完全一致。该方法具有系统操作误差小，用样品量少，较常现高效液相色谱检测灵敏度高，重视性好的优点。是适用于基因工程药物产品肽谱分析，衡量产品生产纯化工艺稳定性比较优秀的方法之一。

类风湿性关节炎患者抗核抗体及其多肽谱的检测

目的分析类风湿性关节炎(RA)患者抗核抗体(ANA)和ANA谱检测结果 ,探讨其在RA诊断中的临床应用价值。方法 ANA检测采用间接免疫荧光法,抗核抗体谱检测采用免疫印迹法。结果 128例RA患者中,ANA阳性率达79.7%,ANA谱阳性率达47.7%。ANA与ANA谱检测结果呈正相关。RA患者中ANA≥1:320阳性时的荧光模式主要是核均质型,ANA谱阳性抗体出现较多的是抗SS-A、抗Ro-52、抗nRNP/Sm、抗SS-B等。结论联合检测RA患者ANA及ANA谱,能明确患者血清中的自身抗体种类,为RA的诊断和疗效观察提供重要的参考指标。

基于反相液相色谱-串联质谱的鹿茸模拟胃肠道消化的肽谱及生物活性研究

利用反相液相色谱-串联质谱(Reversed phase liquid chromatography-tandem mass spectrometry,RPLCMS/MS)对鹿茸蛋白经过模拟消化的肽谱进行分析,同时考察了消化产物的体外活性。从鹿茸水提物(Antler aqueous extract,AAE)、鹿茸水提物消化产物(Aqueous extract digest,AED)和鹿茸的粉末消化产物(Powder digest,PD)中分别鉴定到23、417和389条肽段,其中源于胶原蛋白的肽分别有15、146和75条。以血管紧张素转换酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)、二肽基肽酶IV(Dipeptidyl peptidase IV,DPP-IV)、脯氨酰内切酶(Prolyl endopeptidase,PEP)抑制活性和抗氧化活性为指标考察AAE、AED和PD的体外生物活性,发现其活性强弱关系为AAE<AED<PD。结果表明,经过模拟消化后,AED释放出更丰富的胶原蛋白肽,而PD具有更好的生物活性,说明食用鹿茸粉末和鹿茸水提物互为补充,各具优势。

重组人粒细胞集落刺激因子肽谱分析方法初探

目的 :建立检测重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG -CSF)肽谱的方法。方法 :采用RP -HPLC法及CZE法。结果 :检测rhG -CSF经胰蛋白酶裂解后的肽段 ,发现九源公司生产的各批产品的一级结构具有一致性。 2种分析方法均具有灵敏度高 ,重现性好等优点。结论 :本法适用于基因工程药物的肽谱分析。

19个近交品系小鼠珠蛋白β肽谱的建立及遗传型的比较

采用蛋白质细微结构分析技术,为BALB/c,BALB/cA,BALB/cJ,BALB/cJ-nu,BALB/nu/+,BALB/cyJax,B_(10),B_(10)A/sui,C_(57)BL/6,C_(57)BL/10snJ,SMMC/B,SMMC/C,C_3H/He,CFW,DBA/2,SWI,Swars/nu/+,SSB,129/sv等19个品近交小鼠建立了血红蛋白β肽链肽段图谱。结果表明,19个品系小鼠的β肽谱之间有明显差异,各自具有独特的β肽谱,这标志着不同品系小鼠各具特有的遗传型。这种遗传上的多态性可能是来自于某种交换过程。

应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法研究原发性胆汁性肝硬化的血清多肽谱

目的应用弱阳离子交换磁珠提取多肽结合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱系统(MALDI-TOF-MS)分析原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者的血清多肽谱,寻找具有潜在意义的血清标志物。方法收集105例血清样本,包括55例PBC患者、25例其他肝病患者和25例正常对照者血清样本,经弱阳离子交换磁珠纯化,MALDI-TOF-MS分析及ClinProTools生物信息学方法研究其血清多肽表达谱。结果在质荷比(m/z)1000～10 000 Da的范围内3组间共检测到158个血清多肽峰,其中83个有统计学意义(P<0.001),在PBC中表达上调的多肽有31个,表达下调的多肽有52个。组合m/z 1062.47、5356.13、4268.63、846.18、1945.31和6649.53Da 6个峰建立多肽诊断指纹图谱模型,该模型盲样验证的准确率在PBC组、正常对照组和其他肝病组分别为100%、81.8%和72.7%。结论可以利用MALDI-TOF-MS技术和ClinProTools软件来筛选PBC血清标志物,其在PBC诊断方面具有一定的价值。

腐乳发酵过程中肽谱变化及其促生长性能初探

通过对腐乳生产过程中不同阶段不同分子量中肽谱变化及其促生长性能的初步研究。结果表明,腐乳制作过程中白坯至后酵1周阶段,分子量≤10 kDa和1 kDa肽含量达到最大值(1 695.6 mg.100 g-1和722.2 mg.100 g-1),随着发酵时间延长,氨基酸总量不断增加,小分子肽含量逐渐降低。促生长试验表明,不同分子量的小分子肽对酵母菌和保加利亚乳杆菌具有显著的促生长功能。

重组人甲状旁腺素1-34肽谱及一级结构的液相色谱/电喷雾离子化质谱法分析

目的:采用液相色谱/电喷雾质谱联用法(LC—ESI—MS/MS)对重组人甲状旁腺素1—34(rh—PTH 1—34)进行肽谱及一级结构分析。方法:用LC—ESI—MS法测定相对分子质量,并在线分析其胰蛋白酶和V8蛋白酶酶解质量肽谱;结合质谱源内碰撞诱导电离技术解析酶解肽段的氨基酸序列。结果:相对分子质量测定值与理论值一致;胰蛋白酶和V8蛋白酶酶解肽段氨基酸序列与理论值基本一致,序列覆盖率分别为97%和88%。结论:LC—ESI—MS/MS联用法为基因重组多肽类药物的一级结构分析和质量控制提供了新途径。

反相高效液相色谱对CaBP_(21)的肽谱分析

对CaBP_(21),一种新发现的兔阑尾B淋巴细胞的钙结合蛋白,作手工Edman化学降解,结果表明其N末端封闭。取15nmole CaBP_(21)用溴化氰裂解,产物不经衍生,直接以RP-HPLC作肽谱分析。肽谱时间2h。得到两个BrCN肽解片段,其中C端片段可用作Edman顺序测定。同时证明了CaBP_(21)为相同亚基2聚体。

DWT-PLS在SELDI-TOF MS血清多肽谱解析中的应用

针对表面增强激光解吸/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF MS)血清多肽谱解析,首先采用离散小波变换(discrete wavelet transform,DWT)对数据进行滤噪、压缩;再采用偏最小二乘(partial leastsquares,PLS)法建立癌症诊断预测模型.考察了DWT对血清多肽谱数据预滤噪、压缩的效率,同时重点研究了小波分解尺度、主成分数对诊断预测准确率的影响.研究结果表明,采用DWT-PLS法解析血清多肽谱简便、高效、预测准确.

2709碱性蛋白酶水解BSA蛋白肽谱变化的研究

以2709碱性蛋白酶酶解牛血清白蛋白为研究对象,采用液相色谱-飞行时间质谱联用分析方法和位点非特异性酶切肽谱鉴定方法,分析水解过程中肽谱的动态变化。蛋白电泳分析结果显示,2709碱性蛋白酶在0.1%的添加比例条件下,0.5 h内可将全部蛋白降解,表明其具有极强的水解能力。肽谱分析结果显示,该酶酶解BSA蛋白过程中肽谱变化复杂多样,不同序列多肽具有不同的动态变化特征。酶切位点分析结果显示,2709碱性蛋白酶几乎能在所有种类的氨基酸位点发生酶切,但酶切的频率并不相同,这表明该酶在水解位点上具有宽泛的选择性和一定的倾向性,其中在肽键C端氨基酸种类的选择上具有明显的亮氨酸倾向性。该文可为研究其他工业蛋白酶水解肽谱的规律提供借鉴,并有助于提高我国工业蛋白酶制剂的应用水平和蛋白质加工水平。

基于LC-MS/MS的酸乳肽谱及ACE抑制活性

利用液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)的方法,对4种酸乳(优味舒风味发酵乳、风味发酵乳、初乳24+K风味发酵乳和十天风味发酵乳)的肽谱进行分析,分别鉴定到152、125、364条和274条肽段。利用血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)的抑制活性比较以上4种酸乳的生物活性,在相同质量浓度2.0 mg/L时,4种酸乳ACE抑制率分别为46.84%、42.75%、77.41%和63.84%。初乳24+K风味发酵乳含有肽的数量大、ACE抑制活性高可能与其独特的原料成分相关。对4种酸乳的肽谱及ACE抑制活性的考察,为进一步研究酸乳肽的功能特点和ACE抑制活性提供了理论依据。

大白猪和长白猪新复等位基因及其多态性与结合肽谱分析

本文分别对5头大白猪和长白猪品系中猪主要组织相容性复合体(SLA-I)基因进行了克隆,获得了22条新SLA-I等位基因并进行了分析与命名。随后,以SLA-I*1204为代表,表达、组装了pSLA-1*1204复合体;并对其呈递抗原肽谱进行了测定,分析了与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的匹配肽。结果显示,SLA-I多态性主要发生在其组成抗原结合槽(PBG)的α1和α2结构域,其高变异位点能够直接影响PBG与多肽的亲和力。根据质谱获得的多肽谱分析,pSLA-1*1204的结合多肽的位点为P1、P2、P9位氨基酸。P9位主要为长侧链及芳香烃氨基酸,固定多肽于PBG的C端,P1和P2分别插入PBG的A和B口袋,固定多肽于PBG的N端。通过多肽结合基序分析发现了能与PRRSV匹配的10条潜在细胞毒性T细胞(CTL)候补表位。本试验研究了大白猪和长白猪的SLA-I多态性并实际测定了1个新等位基因SLA-1*1204的抗原肽结合谱,为进一步促进猪CTL免疫学发展提供了一定的科学依据。

尿毒症患者血清肽谱的差异性研究

目的比较尿毒症患者与正常人的血清肽谱,寻找差异表达的血清肽谱。方法将研究对象分成试验组和对照组。试验组为30例尿毒症患者,包括10例未透析患者、10例腹膜透析患者和10例血液透析患者;对照组为13例健康志愿者。采用ClinProt磁珠浓缩和基质辅助激光解吸电离法分析两组研究对象血清肽谱的差异。结果与对照组相比,未透析组、腹膜透析组、血液透析组分别筛选出7个、7个、9个显著表达的差异性多肽;比较未透析组与腹膜透析组、未透析组与血液透析组、腹膜透析组与血液透析组,分别筛选出2个、5个、1个显著表达的差异性多肽。采用遗传算法对样本进行分类并建立诊断预测模型,对区分未透析组、腹膜透析组、血液透析组与对照组的交叉验证能力分别为99.30%、95.12%和98.61%,而识别率均为100%;对区分未透析组与腹膜透析组、未透析组与血液透析组、腹膜透析组与血液透析组的交叉验证能力分别为95.00%、90.59%和79.72%,识别率分别为96.88%、100%和100%。结论应用蛋白组学建立了尿毒症患者的血清肽谱模型,为人们更好地了解尿毒症的发病机制提供了新的思路。

RP-HPLC法分析人血白蛋白肽谱方法的建立

目的建立人血白蛋白(plasma human serum albumin,pHSA)肽谱分析方法。方法采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)的方法,分别用胰蛋白酶还原及非还原方法裂解pHSA,用Sephasilpetide C18柱,以0.1%(v/v)TFA/水、0.08%(v/v)TFA/乙腈为流动相,流速0.5ml/min梯度洗脱的方法,检测波长214nm,分析PHSA肽谱。结果pHSA经胰蛋白酶还原或非还原裂解,适当的酶与底物的比例及酶解的时间,都可以得到重现性好的稳定的肽谱。结论RP-HPLC法具有灵敏度高,重现性好等优点。本法适用于重组PHSA的肽谱分析。