水稻肽转运蛋白基因OsPtr1的功能分析

【目的】利用T-DNA插入突变的方法揭示候选基因P0421H01.23(命名为OsPtr1,Peptite 24-48Transporter1)的功能表达。【方法】提取水稻明恢86成花后12 d的胚乳RNA,反转录成cDNA后,进行OsPtr1基因扩增,以胚乳特异表达Gt1为启动子,构建OsPtr1基因植物过表达载体,用农杆菌介导法将OsPtr1基因导入水稻品种日本晴,对其后代及突变体w9101进行氮代谢物测定分析;同时,构建绿色荧光蛋白基因GFP和OsPtr1基因融合表达载体,用基因枪转入洋葱表皮细胞,培养24~48 h后,用荧光共聚焦电子显微镜观察OsPtr1基因亚细胞定位。【结果】OsPtr1基因编码蛋白定位于质膜上,该基因与氮类物质的运输有关,OsPtr1功能缺失突变体种子的氨基酸和蛋白质等含氮物质积累效率降低,过表达植株种子的氨基酸和蛋白质等含氮物质含量增加。【结论】OsPtr1基因参与水稻氮类物质的跨膜运输。

小肽转运蛋白(PepT1)及其活性调控

小肽是蛋白质消化的主要产物,在氨基酸消化、吸收以及动物营养代谢中起着重要的作用。小肽转运蛋白(PepT 1和PepT 2)的克隆揭示了动物小肽转运的机制。主要综述了小肽转运蛋白(PepT 1)的分子结构特征,PepT 1 mRNA在不同动物、不同组织中的分布,以及各种因素对PepT 1转运活性的影响,并就需要进一步深入研究的问题进行了探讨。

饲粮精粗比对犊牛肠道小肽转运蛋白mRNA表达的影响

本试验旨在研究不同精粗比颗粒料对犊牛肠道黏膜小肽转运蛋白Pep T1、Pep T2、PHT1和PHT2 mRNA表达的影响。选择日龄、体重相近的中国荷斯坦公犊牛6头,分为2个处理,每个处理3头,各处理精粗比分别为75∶25(Ⅰ)和65∶35(Ⅱ),预试期14 d,正试期56 d。结果表明:1)十二指肠和空肠Pep T1 mRNA表达丰度极显著高于回肠、盲肠和结肠(P<0.01);处理Ⅰ犊牛十二指肠和空肠Pep T1 mRNA表达丰度极显著高于处理Ⅱ(P<0.01);2)与Pep T1 mRNA相比,Pep T2 mRNA在犊牛肠道中表达丰度较低;处理Ⅰ十二指肠和结肠Pep T2 mRNA表达丰度极显著高于处理Ⅱ(P<0.01);3)处理Ⅰ盲肠PHT1 mRNA表达丰度极显著低于处理Ⅱ(P<0.01),处理Ⅰ犊牛回肠和结肠PHT1 mRNA表达丰度显著高于处理Ⅱ(P<0.05);4)处理Ⅰ犊牛盲肠PHT2 mRNA表达丰度极显著低于处理Ⅱ(P<0.01),处理Ⅰ犊牛十二指肠和结肠PHT2mRNA表达丰度极显著高于处理Ⅱ(P<0.01)。以上结果说明,与精粗比为65∶35的饲粮相比,精粗比为75∶25的饲粮更能够促进犊牛肠道中Pep T1、Pep T2、PHT1和PHT2 mRNA的表达。

影响小肽转运蛋白表达的因素

小肽转运蛋白的活性和表达量直接影响小肽的吸收。文章主要介绍了日粮、激素、疾病等因素对小肽转运蛋白表达的影响。

小肽转运蛋白(PepT1)的活性调节

小肽是蛋白质在动物体内消化的主要产物,而位于小肠刷状缘膜上的小肽转运蛋白(PepT1)在小肽的吸收过程中发挥着重要作用,因此PepT1的活性直接影响小肽的吸收。文中主要介绍底物、营养不良、激素、昼夜节律和生长发育对PepT1的活性调节。

饲粮精粗比对马肠道小肽转运蛋白mRNA表达的影响

试验研究日粮精粗比对马肠道小肽转运蛋白mRNA表达的影响。选取(102±4)日龄、体重(120.14±4.06)kg的6匹马,分为2个处理,每个处理3个重复。处理Ⅰ的日粮精粗比为75∶25,处理Ⅱ的日粮精粗比为65∶35。预试期14 d,正式试验期56 d。结果显示,马十二指肠和空肠的PepT1 m RNA表达丰度极显著高于回肠、盲肠和结肠(P<0.01),结肠PepT1 mRNA表达丰度显著高于盲肠(P<0.05)。与处理Ⅱ相比,处理Ⅰ的马十二指肠、空肠和结肠PepT1 mRNA表达丰度显著升高(P<0.05),十二指肠、回肠的PepT2 m RNA表达丰度极显著升高(P<0.01)。处理Ⅰ的盲肠PHT1 mRNA表达丰度极显著低于处理Ⅱ(P<0.01);处理Ⅰ的回肠和结肠PHT1 mRNA表达丰度显著高于处理Ⅱ(P<0.05)。处理Ⅰ的马十二指肠、结肠PHT2 mRNA表达丰度极显著高于处理Ⅱ(P<0.01),盲肠PHT2 mRNA表达丰度极显著低于处理Ⅱ(P<0.01)。研究表明,与精粗比为65∶35的日粮相比,精粗比为75∶25的日粮能够促进马肠道中小肽转运蛋白mRNA的表达。

乳腺癌中肽转运蛋白1的表达及临床病理意义

目的探讨肽转运蛋白1(peptide transporter 1,PEPT1)在乳腺癌中的表达及临床病理意义。方法利用TIMER 2.0数据库分析PEPT1在乳腺癌不同分子亚型和癌旁正常组织中的表达;通过Kaplan-Meier Plotter数据库分析其与乳腺癌预后的相关性。收集80例乳腺癌及40例癌旁正常组织蜡块及患者临床信息,采用免疫组化MaxVision法检测PEPT1的表达,分析其与临床病理特征及患者无进展生存期(progression free survival,PFS)的相关性。结果TIMER 2.0数据库分析显示,PEPT1在癌旁正常组织和乳腺癌不同亚型的表达,差异有显著性(P<0.001)。Kaplan-Meier Plotter数据库分析显示,Luminal A、Luminal B型及三阴型乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)中PEPT1高表达,其20年无复发生存期(relapse-free survival,RFS)明显比低表达者长(P<0.005)。免疫组化结果显示,PEPT1高表达与乳腺癌的淋巴结转移、远处转移呈负相关(P均<0.05);TNBC中PEPT1高表达者(65.7%)明显高于非三阴型乳腺癌者(22.2%),且PEPT1高表达与TNBC患者术后化疗3年PFS呈正相关(P<0.05)。结论PEPT1在乳腺癌不同分子亚型中表达具有明显差异,在TNBC中的表达明显高于非三阴型乳腺癌,且与TNBC患者化疗预后关系密切,有望成为预测TNBC患者疗效的生物学指标。

寡肽转运蛋白(PepT1)生物学特性及活性调控研究进展

作为蛋白质主要的消化产物,小肽的吸收不仅在氨基酸消化、吸收和代谢中起到至关重要的作用,对于维持反刍动物的生长、发育也具有重要意义。目前寡肽转运蛋白(PepT1)被预测出有12个跨膜结构域,Fei等对其跨膜结构域进行了初步的研究。PepT1所具有的无从差别转运小肽、在特定的PH条件下电现象等特点也使得其成为学者们研究的热点。此外,底物因素、生理生物因素以及营养因素等对于PepT1活性调控的影响也是人们研究的热点。本文基于对PepT1生物学特性及活性调控研究进展的论述,对PepT1的研究前景进行了展望,以期为促进PepT1的进一步研究提供进一步的参考。

甘蔗镰孢菌质子偶联寡聚肽转运蛋白基因FsPTR2E的功能研究

甘蔗镰孢菌(Fusarium sacchari)是引起甘蔗梢腐病的主要病原菌之一,明确其致病机理对于探寻甘蔗梢腐病防治策略具有重要意义。质子偶联寡聚肽转运蛋白由质子移动力提供能量,转运二肽、三肽等氮源,在生物体生长发育过程中发挥着至关重要的作用。本文对F.sacchari中一个与质子偶联寡聚肽转运蛋白编码基因高度同源的基因FsPTR2E在病菌大型分生孢子形成过程及侵染阶段的表达模式进行分析,同时对FsPTR2E敲除突变体(ΔFsPTR2E)的主要生物学特性进行研究。结果表明,1)同在常规培养基(PDA)上相比,F.sacchari在大型分生孢子诱导培养基上培养24~72 h,FsPTR2E的表达量显著升高;2)F.sacchari侵染寄主72 h时,FsPTR2E的表达量和菌丝阶段相比显著下降;3)敲除FsPTR2E不影响病菌生长、孢子萌发以及对逆境胁迫的响应,但是敲除突变体ΔFsPTR2E的大型分生孢子和小型分生孢子的产量和野生型菌株相比均显著降低;4)ΔFsPTR2E的致病力较野生型菌株显著增强;5)同野生型菌株一样,ΔFsPTR2E可以在以二肽为唯一氮源的培养基上正常生长。这些结果表明FsPTR2E参与了F.sacchari的产孢与致病过程,但可能不负责二肽转运。

细菌肽转运蛋白的研究进展

细菌的肽转运蛋白包括3种,寡肽转运蛋白(Oligopeptide permease,Opp)、二肽转运蛋白(Dipeptide permease,Dpp)和二/三肽转运蛋白(Di-and tripeptide permease,Dtp)。Opp和Dpp属于ABC型超家族(ATP-binding cassette superfamily)转运蛋白,利用ATP水解产生的能量实现底物转运。对Opp和Dpp研究最多的是胞外肽结合蛋白OppA和DppA,它们起着最初识别与结合底物的重要作用。Dtp属于主要协助转运蛋白超家族(Major facilitator superfamily,MFS),与质子进行底物共转运。细菌肽转运蛋白的晶体结构解析结合大量的生化数据分析,使得人们对其转运机制有了深入的了解。本文对这三种肽转运蛋白的研究进展分别进行综述。

猪多杀性巴氏杆菌重组抗菌肽ABC转运体ATP结合蛋白诱导的免疫保护研究

为研究猪多杀性巴氏杆菌(Pm)重组抗菌肽ABC转运体ATP结合蛋白的免疫保护性,本研究采用PCR方法扩增该蛋白基因,并将其克隆于pET-28a(+)中构建重组质粒pET-ABP,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达。分析表明,猪Pm抗菌肽ABC转运体ATP结合蛋白基因为696 bp,编码231 aa,不同血清型的该蛋白基因推导氨基酸序列同源性达99%以上。表达的蛋白分子量约为27 ku。动物实验表明,实验组小鼠三免后第14 d其血清IgG抗体水平显著升高,明显高于对照组。对照组攻毒后3 d存活率为20%,7 d全部死亡;免疫组小鼠攻毒后3 d存活率为80%,7 d存活率为40%。该研究为进一步研制Pm的混合疫苗奠定了基础。

药物转运蛋白功能及应用

细胞膜转运蛋白是一些药物的吸收、分布和消除的决定因素,具有重要的药剂学意义。作为异生物质排出细胞的通道,ABC转运蛋白对大多数现在使用的药物的体内行为产生重要影响,包括治疗肿瘤、艾滋病和微生物感染用药。小肽转运蛋白具有广谱的底物特异性,能够转运大量的口服的结构类似于小肽的药物。由于新的小肽和多肽模拟物类药物的迅速增加,小肽转运蛋白因可能成为药物转运系统而倍受关注。在分子水平加深对药物转运蛋白的理解势必促进药物设计与生物药剂学的发展。

不同铁源对缺铁仔猪铁营养状况及相关铁转运蛋白基因表达的影响

本试验旨在比较在缺铁仔猪饲粮中添加硫酸亚铁（FeSO4）和甘氨酸螯合铁（Fe—Gly）对铁营养状况及铁转运相关基因表达的影响。本试验选取18头仔猪（杜×长×大；6．50±0．52kg）进行研究。阶段1，所有试验猪饲喂19d基础日粮（舍铁20．23mg／kg），直至仔猪产生缺铁性贫血。阶段2，18头仔猪随机分为3个处理（每个处理6个重复，每个重复1头仔猪）再饲喂10d。日粮处理如下：（1）对照组（基础日粮）；（2）硫酸亚铁组（基础日粮＋120mg／kg FeSO4，以铁计）；（3）甘氨酸螯合铁组（基础日粮＋120mg／kg Fe—Gly，以铁计）。试验结束后，与对照组相比，饲喂甘氨酸螯合铁或硫酸亚铁的仔猪，心脏、肝脏和肺含铁量显著升高（P〈0．05），而血清总铁结合力（TIBC）明显降低（P〈0．05）。与硫酸亚铁组相比，甘氨酸螯合铁组仔猪十二指肠和空肠的小肽转运蛋白1（PEPT1）mRNA表达水平显著升高（P〈0．05），膜铁转运蛋白（Ferroportin1）mRNA表达水平显著降低（P〈0．05）。但对仔猪生长性能无显著影响（P〉0．05）。综上所述，研究结果表明，甘氨酸螯合铁组与硫酸亚铁组相比，甘氨酸螯合铁可更有效地改善缺铁仔猪铁营养状况。并且，不同铁源之间，铁转运相关基因的表达不同。结果还表明，PEPT1可能在甘氨酸螯合铁的吸收中起着至关重要的作用。

小肽在动物体内的吸收、转运和利用

文章通过总结小肽在鼠、兔、家畜和家禽中应用的研究数据,详细论述了其在动物体内的吸收利用,同时简述了肽转运蛋白的基本特征。

大鼠无肝状态肾脏罗库溴铵相关转运蛋白OATP-3及其基因的表达变化的研究

目的研究无肝状态前后大鼠肾脏罗库溴铵相关转运蛋白阴离子转运多肽3(organanion transportingpoly peptides3,oatp3)及其基因表达的变化,以期初步阐释罗库溴铵无肝期肝外代谢特点形成的原因。方法12只大鼠随机分为2组(6只/组),对照组与阻断肝门60min组,取各组大鼠肾脏组织,采用Westernblot检测各组OATP3蛋白的表达。采用逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)检测各组oatp3mRNA的表达。结果大鼠肾脏组织OATP3蛋白表达水平阻断肝门60min组表达水平高于对照组(P<0.01);大鼠肾脏组织oatp3mRNA表达水平阻断肝门60min组明显高于对照组(P<0.05)。结论大鼠肾脏组织oatp3在无肝期比无肝期前增多,oatp3基因表达在无肝期比无肝期前增多,这可能是罗库溴铵无肝期肝外代谢增强的机制。

肠道蛋白质感应系统与肠道内分泌细胞调控研究进展

肠道上皮细胞的感应系统能够感应肠腔营养物质,影响肠道内分泌细胞(EECs)分泌脑肠肽,从而调节机体生理活动。机体对蛋白胨的感应主要通过小肽转运蛋白(Pep T1)和溶血磷脂酸受体5(LPAR5)发挥作用,对氨基酸的感应主要通过G蛋白偶联受体C家族6组a亚型受体(GPRC6A)、1型味觉受体1和3(T1R1/T1R3)以及雷帕霉素靶蛋白复合体1(m TORC1)信号通路发挥作用。文章对动物肠道蛋白质的感应机制及内分泌调控进行综述,旨在为同行提供参考。

高血压肾病患者血清PEPT1和PEPT2表达与肾功能减退及预后的相关性分析

目的探讨高血压肾病患者血清肠肽转运蛋白1(PEPT1)和肠肽转运蛋白2(PEPT2)表达与肾功能减退及预后的相关性。方法选取2010年1月至2020年1月该院肾内科收治的192例高血压肾病患者作为高血压肾病组。另随机选择同期于该院门诊体检的63例健康志愿者为对照组。采用实时定量聚合链反应检测PEPT1、PEPT2相对表达水平,全自动生化分析仪检测血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr),计算估算的肾小球滤过率(eGFR)。分析PEPT1、PEPT2与BUN、Scr、eGFR的相关性,影响高血压肾病进展为终末期肾病(ESRD)的因素,绘制受试者工作特征曲线,分析PEPT1、PEPT2预测高血压肾病进展为ESRD的价值。结果高血压肾病组血清PEPT1、PEPT2相对表达水平和eGFR低于对照组,BUN、SCr水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。高血压肾病患者血清PEPT1、PEPT2与BUN、SCr呈负相关(P<0.05),与eGFR呈正相关(P<0.05)。ESRD组年龄、收缩压、舒张压、高血压肾病病程、BUN、SCr高于NESRD组,血清PEPT1、PEPT2、eGFR低于NESRD组,差异有统计学意义(P<0.05)。收缩压、高血压肾病病程是高血压肾病进展为ESRD的危险因素(P<0.05),PEPT1、PEPT2、eGFR是保护因素(P<0.05)。PEPT1、PEPT2及联合预测高血压肾病进展为ESRD的曲线下面积为0.636、0.714、0.897。结论高血压肾病患者血清PEPT1、PEPT2相对表达水平增高,且与肾功能减退及ESRD进展有关,可作为预后预测的标志物。

环泊酚可抑制System Xc-/GPX4通路介导的铁死亡减轻大鼠肾缺血再灌注损伤

目的探讨环泊酚对减轻肾缺血再灌注损伤的作用及机制。方法建立SD大鼠肾缺血再灌注模型,单独或联合应用环泊酚、铁死亡抑制剂Fer-1及铁死亡激动剂Erastin干预造模大鼠,24 h后处死,取大鼠心脏血液检测肌酐及尿素氮,同时取大鼠肾,部分行苏木精和伊红染色及Paller评分评估大鼠肾损伤程度,另一部分检测铁死亡相关指标活性氧、谷胱甘肽、Fe^(2+)、丙二醛水平及胱氨酸/谷氨酸反向转运蛋白的主要亚基SLC7A11与下游功能蛋白GPX4的表达水平及转录水平。结果与模型组相比,环泊酚组与Fer-1组肾损伤指标血肌酐、血尿素氮及Paller评分、活性氧、亚铁离子、丙二醛水平较低(P<0.05);与模型组相比,环泊酚组谷胱甘肽、SLC7A11、GPX4水平,及SLC7A11、GPX4相关基因表达水平较高;与环泊酚组相比,环泊酚+Erastin组上述各项指标较低(P<0.05)。结论环泊酚可以减轻肾缺血再灌注损伤,其机制与System Xc-/GPX4通路有关。

紫杉醇通过上调TAP-1,TAP-2以及消除调节性T细胞逆转肺癌免疫逃逸

背景与目的化疗是否可以逆转肿瘤的免疫逃逸尚未得到肯定的回答。本研究旨在探讨紫杉醇类抗肿瘤药物紫杉醇参与逆转肺部肿瘤细胞免疫逃逸的机制。方法体外实验应用流式单抗TAP-1、TAP-2检测分析3LL细胞株(Lewis肺腺癌细胞)和经紫杉醇5×10-8mol/L处理的3LL细胞株抗原肽转运体(transporters associated with antigen processing,TAP)的表达;体内实验中,3LL细胞经尾静脉注射成瘤,8d后化疗组小鼠腹腔内注射紫杉醇:0.0125mg/只;对照组小鼠腹腔内注射生理盐水;设立空白对照组;21d后取各组小鼠的肺部组织,制备单细胞悬液,流式三染法检测调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)。结果经紫杉醇处理的3LL细胞高表达TAP-1(5.68%±0.65%)和TAP-2(89.54%±4.8%),明显高于3LL细胞组TAP-1(1.93%±0.25%)和TAP-2(67.78%±5.08%)的表达(P分别为0.006和0.036);体内实验中:荷瘤小鼠肺部肿瘤中Treg细胞的表达(25.46%±2.23%)明显高于正常对照组的小鼠(12.46%±1.21%),差异具有统计学意义(P<0.001);紫杉醇化疗组明显抑制小鼠肺部肿瘤组织中Treg细胞的表达(17.53%±1.24%),与荷瘤小鼠肺部组织的Treg细胞相比,差异具有统计学意义(P=0.004)。结论化疗药物紫杉醇通过上调肿瘤细胞表面抗原转运肽的表达以及消除肿瘤局部调节性T细胞的产生,可能部分参与了逆转肺癌免疫逃逸的功能。

肽/组氨酸转运蛋白SLCl5A4在系统性红斑狼疮中的作用研究

SLE是一种可累及全身多个系统的慢性自身免疫病,其发病机制目前仍尚不明确。肽/组氨酸转运蛋白SLCl5A4是一种定位于溶酶体上的转运蛋白,能将组氨酸、寡肽等从溶酶体内转运至细胞质中。研究发现肽/组氨酸转运蛋白SLCl5A4参与了SLE的发生,并且与Toll样受体7/9(TLR7/9)介导的Ⅰ型干扰素信号通路有关。本文对近年来有关肽/组氨酸转运蛋白SLCl5A4在SLE中可能的作用机制进行综述,旨在为探索肽/组氨酸转运蛋白SLCl5A4在SLE中的作用提供新的思路。