鳜小肽转运载体PepT1基因分子特征及其表达研究

小肽转运载体(PepT1)是低亲和力、高容量的肽转运载体,在小肽的吸收过程中发挥着重要的作用。研究采用同源克隆和RACE技术克隆了鳜鱼(Siniperca chuatsi)PepT1基因全长cDNA序列,其cDNA序列全长为2480 bp,包含43 bp的5′UTR序列,232 bp的3′UTR序列,以及2205 bp开放阅读框,编码735个氨基酸。氨基酸序列同源性分析结果显示,鳜鱼与石斑鱼(Epinephelus aeneus)、鲈鱼(Dicentrarchus labrax)PepT1间同源性均为89%,与其他非鱼类物种的同源性则在46%—56%。经预测,鳜鱼PepT1编码蛋白的分子量为64.8 kD,等电点为8.97,该蛋白具有与哺乳动物同源蛋白相似的12个螺旋跨膜结构,并且在跨膜区9和10之间有一个大的外环;跨膜区氨基酸高度保守,并存在有5个膜外N-糖基化位点和3个膜内含蛋白激酶C基序的相同区域。实时荧光定量表达分析表明,鳜鱼PepT1基因在前肠和中肠中表达量显著高于后肠(P<0.05),这说明前、中肠是鳜鱼肠道吸收小肽的主要部位;在胚后不同发育阶段鳜鱼前肠均能检测到PepT1基因的表达,并且在10 g个体中表达量最高,之后随着体重的增加其表达量维持在一个稳定水平。本研究结果首次报道了鳜鱼PepT1基因全序列及其分子表达特征,为鱼类营养及生理学的研究提供有价值的参考资料。

小肽转运载体1的生物学特性及其功能

小肽转运载体1(PepT1)是H+/肽偶联的转运载体。该载体通过利用肠腔到肠细胞的质子梯度来转运二肽和三肽。PepT1对游离氨基酸、多肽在动物肠道内的转运调控具有重要作用。本文综述了PepT1的分类、生物学特征及功能,并探讨了影响PepT1活性调控的因素。

脾阳虚大鼠肽转运载体蛋白表达及转运功能的改变

目的观察脾阳虚模型大鼠小肠黏膜肽转运载体1(PepT1)的表达及其转运功能的变化。方法采用劳倦泄下合利血平复合因素造模法建立脾阳虚大鼠模型,RP-HPLC法测定cefalexin血药浓度以评价小肠黏膜PepT1的转运吸收功能,免疫组化方法观察脾阳虚大鼠肠上皮PepT1蛋白表达情况。结果十二指肠给药120min后,RP-HPLC法测定模型大鼠血清cefalexin浓度为(5.23±2.10)μg/ml,高于正常对照组的(2.52±0.47)μg/ml(P<0.01);模型大鼠小肠黏膜上PepT1蛋白表达较正常对照大鼠表达升高。结论脾阳虚证模型大鼠小肠黏膜肽转运载体PepT1表达及对cefalexin的转运能力增强。

肽转运载体的分子特征

动物体内的肽转运载体主要有两种,PepT1和PepT2.PepT1主要是肠肽转运载体,PepT2主要是肾脏肽转运载体.肽载体的分子结构特征主要有:(1)有12个假想的穿膜区,在9区和10区之间有一大的胞外环,且所有穿膜区内的序列都高度保留,胞外环上的序列保留的很少;(2)被编码的蛋白上有多个N-糖基化和蛋白激酶的识别位点,他们可能参与肽转运的调控;(3)PepT1上的His-57和PepT2上的His-87是最关键的组氨酸残基,他们可能是转运蛋白发挥吸收功能时最关键的结合位点;(4)不同动物肽转运蛋白的氨基酸范围在707到729之间,且不同动物相同器官肽转运载体的同源性高(大约80％),同种动物不同器官肽转运载体的同源性低(大约50％).了解肽载体的分子特征和组织分布,可以更好地理解肽吸收的分子机制并有利于今后肽类药物的研发.

肽转运载体的分子特征及其分布

动物体内的肽转运载体目前发现的至少有五种 ,其中研究最为广泛的是PepT1和PepT2。PepT1和PepT2都是依质子的寡肽转运载体 (POT)家族的成员。PepT1是低亲和力 /高容量的肽载体 ,PepT2是高亲和力 /低容量的肽载体。PepT1主要在消化道中表达 ,在肾脏中也有微弱的表达 ;PepT2主要在肾脏中表达。这些肽载体的分子结构特征主要有 :(1)有 12个假想的穿膜区 ,在9区和 10区之间有一大的胞外环 ,且所有穿膜区内的序列都高度保守 ,胞外环上的序列保守的很少 ;(2 )被编码的蛋白上有多个N 糖基化和蛋白激酶的识别位点 ,它们可能参与肽转运的调控 ;(3)PepT1上的His 5 7和PepT2上的His 87是最关键的组氨酸残基 ,它们可能是转运蛋白发挥吸收功能时最关键的结合位点 ;(4)不同动物肽转运蛋白的氨基酸范围在 70 7到 72 9之间 ,且不同动物相同器官肽转运载体的同源性高 (大约 80 % ) ,同种动物不同器官肽转运载体的同源性低 (大约5 0 % )。了解肽载体的分子特征和组织分布 。

小肽转运载体的分子营养学的研究进展

目前动物体内的小肽转运载体发现的至少有五种,其中研究最为广泛的是PepT l和PepT 2。PepT 1和PepT 2都是依质子的寡肽转运载体(POT)家族的成员。PepT 1是低亲和力、高容量的肽载体,PepT 2是高亲和力、低容量的肽载体。PepT l主要在消化道中表达,在肾脏中也有微弱的表达:PepT 2主要在肾脏中表达。本文主要对小肽转运载体的组织分布、分子结构特征以及影响小肽转运载体转运的因素等方面的研究进展作一综述。

小肽转运载体2及其在乳腺泌乳中的作用

作为一种潜在的重要的乳腺小肽转运系统,PepT2在乳腺氨基酸氮转运、降低乳汁药物分布以及乳腺疾病治疗方面都起到重要作用。对PepT2在乳腺中作用的深入研究在泌乳生理和临床治疗上都有着非常重要的意义。本文主要从PepT2的蛋白质结构与功能、底物转运特性、表达调控以及其在泌乳生理中的作用4个方面进行简要综述。

小肽转运载体(PepT1和PepT2)研究进展

由小肽转运载体介导的小肽吸收对动物的生长和发育有着特殊的作用,因此,对小肽转运载体的深入研究在生理、药理和临床上都有着非常重要的意义。文中主要从小肽转运载体(PepT1和PepT2)的蛋白质分子结构与功能、主要的组织分布和影响其活性的因素三方面进行简要综述。

肽转运载体2 mRNA在脂多糖致急性肺损伤大鼠肺组织中的表达(英文)

目的研究肽转运载体(PEPT)2 mRNA在脂多糖(LPS)致急性肺损伤大鼠肺组织的表达。方法健康雄性SD大鼠分为正常对照组,生理盐水组,LPS 0.5mg·kg-12,4和8h组。光镜下观察肺组织病理变化,测定肺湿/干重比、支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量和肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性;半定量RT-PCR检测肺组织PEPT2 mRNA表达。结果气管内给予LPS 0.5mg·kg-1,大鼠肺组织呈现典型的炎症病理变化,如肺泡充血、出血、水肿、中性粒细胞浸润、肺泡壁增厚和透明膜形成等。LPS 2,4和8h组大鼠肺湿/干重比(4.72±0.18,5.06±0.17和5.12±0.16)明显高于正常对照组和生理盐水组(4.12±0.15和4.14±0.11)。与正常对照组和生理盐水组〔(1.26±0.12)和(1.25±0.07)U·g-1湿组织〕相比,LPS2,4和8h组大鼠肺MPO活性〔(1.96±0.15),(2.23±0.10)和(2.34±0.12)U·g-1湿组织〕明显增高。LPS 2,4和8h组大鼠BALF中蛋白含量〔(36.6±2.9),(86.9±3.5)和(92.2±2.7)mg·L-1〕明显高于正常对照组和生理盐水组〔(29.3±1.3)和(29.4±2.7)mg·L-1〕。LPS各组大鼠肺组织PEPT2 mRNA的表达水平与正常对照组和生理盐水组相比无明显变化。结论PEPT2 mRNA在LPS致急性肺损伤大鼠肺组织中的表达水平无明显变化。

一种新的阿片肽对小鼠脑和小肠组织阿片受体和肽转运载体基因的影响

目的:从转录水平研究一种新的外源阿片肽 YPFPGPIRYG经胃肠道途径对小鼠脑组织和小肠组织阿片受体和肽转运载体基因的影响．方法:24只小鼠随机分为阿片肽样品组n= 12)和对照组(n=12),在饮水中分别添加浓度为8×10-7mol/L的阿片肽样品YPFPGPIRYG 和双蒸水(空白对照组),小鼠连续饮用2 wk．提取受试小鼠脑组织和小肠组织的总RNA, RT-PCR检测μ阿片受体、δ阿片受体和肽转运载体PepT1 mRNA的变化情况．结果:小鼠的脑组织中同时有μ阿片受体和δ阿片受体mRNA的表达,但阿片肽组小鼠与对照组相比,脑组织中μ阿片受体和δ阿片受体 mRNA的丰度没有变化;小鼠的小肠中同时有μ阿片受体、δ阿片受体和肽转运载体PepT1 mRNA的表达,且阿片肽组小鼠小肠中的μ阿片受体和δ阿片受体mRNA的表达与对照组相比明显上调(P<0．05),而肽转运载体PepT1 mRNA的丰度与对照组相比没有差异．结论:小鼠组织中不同阿片受体的表达存在明显的组织特异性,阿片肽YPFPGPIRYG对小鼠的生理调节不是通过与中枢神经系统上的阿片受体结合发挥作用,其可能与小肠上的δ和μ阿片受体结合发挥作用．

肽转运载体与肽和仿肽类药物肺部转运

新近发现,定位于呼吸道的肽转运载体在肽和仿肽类药物肺部转运过程中起重要作用.将对肽转运载体的结构、定位、功能和转运机制研究作一综述.

四君子汤对脾虚模型大鼠肽转运载体1转运功能及其基因表达的影响

目的:观察四君子汤对脾虚模型大鼠小肠黏膜上皮细胞肽转运载体蛋白PepT1对二肽转运功能改变,PepT1的表达及其m RNA水平的影响以及四君子汤的浓度依赖性。方法:采用利血平造模法建立脾虚大鼠模型,以头孢羟氨苄做为PepT1的转运底物,通过高效液相法(RP-HPLC)测定其血药浓度来反映脾虚大鼠小肠上皮细胞PepT1的吸收转运功能,免疫组织化学方法观察大鼠小肠PepT1蛋白表达情况,荧光PCR法测定大鼠小肠黏膜PepT1 m RNA表达水平。结果:模型组大鼠0~4h血清中头孢氨苄浓度和PepT1蛋白表达明显高于正常组,用药后,四君子汤高剂量组和中剂量组的大鼠头孢羟氨苄血药浓度和PepT1蛋白表达与模型组比明显下降,高剂量组与正常组接近,低剂量组无显著变化。模型组大鼠PepT1 mRNA表达水平相对于正常组略有升高,但无显著性差异(P>0.05),用药之后,四君子汤高、中、低剂量组大鼠PepT1 mRNA表达量对于模型组略有升高,但无显著性差异(P>0.05),但相对于正常组,高、中剂量有显著性升高(P<0.01,P<0.05)。结论:四君子汤治疗可使脾虚大鼠异常升高的PepT1蛋白表达趋于正常,对头孢羟氨苄的吸收减少,且有明显的浓度依赖性;但对脾虚大鼠PepT1 mRNA数量无显著影响。

甲状腺素、胰高血糖素和表皮生长因子对肉鸡小肠Ⅰ型肽转运载体mRNA表达量的影响

本试旨在研究甲状腺素、胰高血糖素(PG)和表皮生长因子(EGF)对肉鸡小肠Ⅰ型肽转运载体(PepT1)mRNA表达量的影响。选择体重无差异的25日龄雄性肉仔鸡30只,分为5组,每组6只鸡,分别接受不同激素处理,每天1次,连续5d。对照组、EGF组、PG组分别皮下注射蒸馏水0.20mL/kg、EGF0.03m g/kg、PG0.10m g/kg;T4组、TH组分别灌服左旋甲状腺素钠(T4)330.00μg/kg、甲巯咪唑25.00m g/kg,同时皮下注射蒸馏水0.20mL/kg。最后1次处理12h后,测定血清人表皮生长因子(h-EGF)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、PG含量以及十二指肠、空肠、回肠PepT1mRNA表达量。结果表明:皮下注射EGF和PG对血清中相应含量无显著影响(P>0.05);口服T4、甲巯咪唑分别显著提高、显著降低血清T3含量(P<0.05)。皮下注射PG(P<0.05)和口服T4(P<0.01)均显著提高了鸡小肠PepT1mRNA表达量,皮下注射EGF和口服甲巯咪唑有降低PepT1mRNA表达量的趋势,但均未达到显著水平(P>0.05)。结果提示,甲状腺素和PG在肉鸡小肽的吸收中发挥着重要调控作用。

蛋鸡小肠肽转运载体PepT1表达差异性的评定

本试验旨在研究蛋鸡十二指肠、空肠、回肠小肽转运载体mRNA表达的差异性。选用相同背景的健康成年蛋鸡10只,从十二指肠、空肠、回肠组织提取RNA样品,采用相对定量RT-PCR,对蛋鸡小肠各段肽转运载体mRNA表达的差异性进行评定。结果表明,蛋鸡空肠PepT1 mRNA的表达水平显著高于十二指肠(P<0.05),与回肠比差异不显著(P>0.05),十二指肠PepT1 mRNA的表达水平与回肠之间无显著差异(P>0.05)。

肠道氨基酸和小肽转运载体的基因表达、影响因素与分子调控机制

饲粮蛋白质在瘤胃或肠道被降解成多肽,并进一步被分解成氨基酸和小肽,然后被吸收、利用。肠道氨基酸的转运受多种氨基酸转运载体,如中性、酸性和碱性氨基酸转运载体等的调节,小肽的转运则由小肽转运载体1介导。目前,对氨基酸及小肽转运载体基因的表达和功能调节相关的分子机制还不清楚,有待于进一步研究。本文综述了动物小肠肽与氨基酸转运载体等,重点介绍了其基因表达调节的分子机制、影响因素以及营养调控方面的研究进展。

鱼类小肽转运载体PepT1研究进展

小肽作为蛋白质主要的消化产物,与氨基酸的吸收是两个相互独立的转运系统。Peptide Transporter 1(PepT1)是其中一种重要的小肽转运载体。文章就鱼类PepT1的分子特点,PepT1 cDNA的克隆与表达,以及PepT1的转运机制等研究作一综述。

蛋氨酸三肽对奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白和小肽转运载体基因表达量的影响

本试验旨在研究蛋氨酸三肽(Met-Met-Met)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)酪蛋白和小肽转运载体基因表达量的影响。采用酶消化法培养的第3代奶牛乳腺上皮细胞为模型,各处理在培养基中分别添加0(对照)、40、50、60、70和80μg/mL的蛋氨酸三肽,每个处理5个重复,每个重复1个培养孔,分别培养细胞24、48和72h,检测奶牛乳腺上皮细胞的相对增殖率,整体试验重复2次,确定最佳培养时间;各处理在培养基中分别添加0(对照)、40、50、60、70和80μg/mL的蛋氨酸三肽,每个处理3个重复,每个重复1个培养孔,以最佳培养时间培养,用实时定量PCR法检测酪蛋白基因的表达量,确定适宜蛋氨酸三肽浓度,整体试验重复3次;以最佳培养时间和适宜蛋氨酸三肽浓度培养细胞,以未添加蛋氨酸三肽的培养基为对照,每个处理3个重复,每个重复1个培养孔,测定小肽转运载体基因的表达量,整体试验重复3次。结果表明:在培养基中添加蛋氨酸三肽培养奶牛乳腺上皮细胞24h时,相对增殖率最高;培养基中加入60μg/mL的蛋氨酸三肽培养细胞24h,αs1-酪蛋白和β-酪蛋白的基因表达量最高,同时发现奶牛乳腺上皮细胞中小肽转运载体1和小肽转运载体2基因表达量显著高于对照处理(P<0.05)。综上所述,培养基中添加60μg/mL的蛋氨酸三肽能够提高奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白和肽转运载体基因的表达量。

配合饲料替代活饵对鳜生长性能、消化功能及小肽转运载体基因表达的影响

【目的】比较投喂活饵鱼和配合饲料对鳜(Siniperca chuatsi)生长性能、消化功能及肠道PepT1基因表达的影响,明确其摄食配合饲料后的消化、吸收生理变化,为提高鳜对配合饲料的利用效果提供理论依据。【方法】挑选驯化鳜鱼苗(初始平均体质量5.92±1.41 g)和未驯化鳜鱼苗(初始平均体质量6.06±1.73 g)各300尾,分别使用配合饲料或活饵鱼喂养30 d,饲养结束后测定分析其生长性能、肌肉成分、消化道结构、消化酶活性及小肽转运载体(PepT1)基因表达情况。【结果】配合饲料组鳜的终末平均体质量、总摄食量、尾摄食量、饵料系数、日增重量、日增重率、特定生长率、蛋白质效率、存活率及肥满度均极显著低于活饵鱼组鳜(P<0.01,下同),脏体比和肝体比显著高于活饵鱼组鳜(P<0.05,下同)。以配合饲料替代活饵鱼投喂鳜,对其肌肉成分有明显影响,具体表现为鳜肌肉水分含量极显著低于活饵鱼组鳜,粗蛋白含量显著高于活饵鱼组鳜。在消化酶活性方面,配合饲料组鳜的幽门盲囊胰蛋白酶活性极显著低于活饵鱼组鳜,幽门盲囊脂肪酶活性显著低于活饵鱼组鳜,但肝脏和肠道中的消化酶活性无显著差异(P>0.05,下同);配合饲料组鳜的肝细胞排列松散,肝细胞间有脂肪堆积,胃、肠道肌层及胃黏膜下层厚度极显著小于活饵鱼组鳜,肠道单个褶皱绒毛层杯状细胞数极显著多于活饵鱼组鳜,幽门盲囊褶皱间距极显著大于活饵鱼组鳜。PepT1基因在鳜肠道中的相对表达量表现为前肠>中肠>后肠,且在前肠表现为配合饲料组鳜极显著低于活饵鱼组鳜,在中肠和后肠则表现为差异不显著。【结论】鳜对配合饲料的摄食量和利用率均低于活饵鱼,消化道组织结构及其消化酶活性也因摄食配合饲料发生适应性变化。投喂配合饲料显著影响鳜的消化吸收功能和生长性能,因此,还需针对其摄食和代谢特性进一步改良配合饲料的营养组分或优化鳜的配合饲料驯化技术。

驴小肽转运载体1基因的克隆、序列分析及组织表达研究

小肽转运载体1(PepT1)在动物肠道小肽的摄取过程中发挥重要作用。本试验旨在研究驴(Equus asinus)PepT1(ePepT1)基因的分子克隆、序列分析和组织表达。提取驴肠道组织总RNA,PCR克隆ePepT1基因片段,测序验证并进行序列分析;采用实时荧光定量PCR(real⁃time qPCR)方法分别测定驴肾脏、脾脏、心脏、肝脏、肺脏、胃、十二指肠、空肠和回肠组织中ePepT1基因的相对表达量。结果表明:ePepT1开放阅读框为2124 bp,共编码707个氨基酸残基。蛋白质理化性质预测显示,ePepT1蛋白分子质量为78.6 ku,等电点为7.52,具有11个跨膜区(TMD),且TMD 9和TMD 10之间有1个大的细胞外环;ePepT1蛋白有5个胞外N-糖基化位点,5个胞外蛋白激酶C(PKC)作用位点和3个蛋白激酶A(PKA)作用位点。组织分布研究发现,ePepT1基因在各组织均有表达,但在肠道(十二指肠、空肠和回肠)中相对表达量最高。综上所述,本研究首次克隆了ePepT1基因,研究了其组织表达规律,为进一步研究驴肠道小肽吸收提供了基础。