小肽转运载体1的生物学特性及其功能

小肽转运载体1(PepT1)是H+/肽偶联的转运载体。该载体通过利用肠腔到肠细胞的质子梯度来转运二肽和三肽。PepT1对游离氨基酸、多肽在动物肠道内的转运调控具有重要作用。本文综述了PepT1的分类、生物学特征及功能,并探讨了影响PepT1活性调控的因素。

四君子汤对脾虚模型大鼠肽转运载体1转运功能及其基因表达的影响

目的:观察四君子汤对脾虚模型大鼠小肠黏膜上皮细胞肽转运载体蛋白PepT1对二肽转运功能改变,PepT1的表达及其m RNA水平的影响以及四君子汤的浓度依赖性。方法:采用利血平造模法建立脾虚大鼠模型,以头孢羟氨苄做为PepT1的转运底物,通过高效液相法(RP-HPLC)测定其血药浓度来反映脾虚大鼠小肠上皮细胞PepT1的吸收转运功能,免疫组织化学方法观察大鼠小肠PepT1蛋白表达情况,荧光PCR法测定大鼠小肠黏膜PepT1 m RNA表达水平。结果:模型组大鼠0~4h血清中头孢氨苄浓度和PepT1蛋白表达明显高于正常组,用药后,四君子汤高剂量组和中剂量组的大鼠头孢羟氨苄血药浓度和PepT1蛋白表达与模型组比明显下降,高剂量组与正常组接近,低剂量组无显著变化。模型组大鼠PepT1 mRNA表达水平相对于正常组略有升高,但无显著性差异(P>0.05),用药之后,四君子汤高、中、低剂量组大鼠PepT1 mRNA表达量对于模型组略有升高,但无显著性差异(P>0.05),但相对于正常组,高、中剂量有显著性升高(P<0.01,P<0.05)。结论:四君子汤治疗可使脾虚大鼠异常升高的PepT1蛋白表达趋于正常,对头孢羟氨苄的吸收减少,且有明显的浓度依赖性;但对脾虚大鼠PepT1 mRNA数量无显著影响。

驴小肽转运载体1基因的克隆、序列分析及组织表达研究

小肽转运载体1(PepT1)在动物肠道小肽的摄取过程中发挥重要作用。本试验旨在研究驴(Equus asinus)PepT1(ePepT1)基因的分子克隆、序列分析和组织表达。提取驴肠道组织总RNA,PCR克隆ePepT1基因片段,测序验证并进行序列分析;采用实时荧光定量PCR(real⁃time qPCR)方法分别测定驴肾脏、脾脏、心脏、肝脏、肺脏、胃、十二指肠、空肠和回肠组织中ePepT1基因的相对表达量。结果表明:ePepT1开放阅读框为2124 bp,共编码707个氨基酸残基。蛋白质理化性质预测显示,ePepT1蛋白分子质量为78.6 ku,等电点为7.52,具有11个跨膜区(TMD),且TMD 9和TMD 10之间有1个大的细胞外环;ePepT1蛋白有5个胞外N-糖基化位点,5个胞外蛋白激酶C(PKC)作用位点和3个蛋白激酶A(PKA)作用位点。组织分布研究发现,ePepT1基因在各组织均有表达,但在肠道(十二指肠、空肠和回肠)中相对表达量最高。综上所述,本研究首次克隆了ePepT1基因,研究了其组织表达规律,为进一步研究驴肠道小肽吸收提供了基础。

鱼类肠道小肽转运载体PepT1的研究进展

从生理特性,cDNA序列和蛋白质分子结构,组织分布与表达这三个方面叙述了欧洲鳗鲡(An-guilla anguilla),罗非鱼(Oreochromis mossambicus),rockfish(Sebastes caurinus),银鱼(Chionodraco hama-tus),斑马鱼(Danio rerio),亚洲泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus),大西洋鳕鱼(Gadus morhua)和欧洲黑鲈(Dicentrarchus labrax)中有关肠道Ⅰ型肽转运载体(PepT1)方面的研究进展情况。

过表达驴小肽转运载体1 CHO细胞的构建

为了研究驴小肽转运载体1(oligopeptide transporter1,PepT1)的转运功能,试验取驴肝脏组织,对PepT1基因进行克隆构建了驴PepT1的表达载体pcDNA3.1-PepT1,并将其转染至中华仓鼠卵巢(CHO)细胞中,采用Western-blot方法检测转染效率,然后以未转染的CHO细胞作对照进一步检测转染后CHO细胞对β-丙氨酸-赖氨酸-N-7-氨基-4-甲基香豆素-3-乙酸(β-Ala-Lys-AMCA)的摄取情况。结果表明:成功扩增出驴PepT1基因CDS序列,并构建了表达载体pcDNA3.1-PepT1;转染pcDNA3.1-PepT124 h后,在CHO细胞中检测到过表达的驴PepT1蛋白,且过表达驴PepT1蛋白的CHO细胞对β-Ala-Lys-AMCA的摄取量显著高于对照组(P<0.05)。说明成功构建了pcDNA3.1-PepT1表达载体并转染至CHO细胞中,实现了驴PepT1蛋白的瞬时过表达。

脾阳虚大鼠肽转运载体蛋白表达及转运功能的改变

目的观察脾阳虚模型大鼠小肠黏膜肽转运载体1(PepT1)的表达及其转运功能的变化。方法采用劳倦泄下合利血平复合因素造模法建立脾阳虚大鼠模型,RP-HPLC法测定cefalexin血药浓度以评价小肠黏膜PepT1的转运吸收功能,免疫组化方法观察脾阳虚大鼠肠上皮PepT1蛋白表达情况。结果十二指肠给药120min后,RP-HPLC法测定模型大鼠血清cefalexin浓度为(5.23±2.10)μg/ml,高于正常对照组的(2.52±0.47)μg/ml(P<0.01);模型大鼠小肠黏膜上PepT1蛋白表达较正常对照大鼠表达升高。结论脾阳虚证模型大鼠小肠黏膜肽转运载体PepT1表达及对cefalexin的转运能力增强。

理中汤、人参皂苷Rg1、6-姜酚对Caco-2细胞PepT1转运功能影响的比较

目的:观察比较理中汤、人参皂苷Rg1、6-姜酚对Caco-2细胞肽转运载体PepT1转运二肽的能力及其蛋白、mRNA表达的影响。方法:Caco-2细胞融合后连续培养28d后分别给予理中汤、人参皂苷Rg1、6-姜酚处理,并设立正常对照组及cAMP抑制剂对照组,用放射性同位素示踪技术比较Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的能力,采用westernblot方法测定Caco-2细胞膜上PepT1蛋白的表达,荧光定量PCR方法测定PepT1mRNA(SLC15A1)的表达水平。结果:理中汤、人参皂苷Rg1及6-姜酚均在不同程度上表现为促进Caco-2细胞转运Glycyl-Sarcosine的作用;Caco-2细胞经理中汤/人参皂苷Rg1/6-姜酚处理24h后,细胞膜PepT1蛋白表达水平均明显增高。6-姜酚能明显上调Caco-2细胞SLC15A1表达,人参皂苷对Caco-2细胞SLC15A1表达的作用表现为下调,理中汤对Caco-2细胞SLC15A1表达作用不明显。且理中汤、人参皂苷Rg1、6-姜酚三者作用各有特点。结论:理中汤及其成分人参皂苷Rg1、6-姜酚具有促进正常培养Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的作用,该过程调控与胞内第二信使cAMP有一定的关系。

海东鸡种鸡日粮精氨酸水平对子代7日龄雏鸡小肠黏膜中营养转运载体及消化酶基因表达影响

为探讨种鸡日粮中添加不同水平的精氨酸对海东鸡雏鸡小肠黏膜中营养转运载体(PepT1、SGLT1、GLUT2)及消化酶(APN、SI)基因表达影响,将440只种鸡分为5组,分别添加0.96%、1.16%、1.36%、1.56%和1.76%的L-精氨酸。种鸡饲养44 d,对7日龄雏鸡的十二指肠、空肠、回肠取样,通过实时荧光定量PCR技术对各肠段内相应目的基因进行表达量测定。结果显示:海东鸡不同肠段PepT1、SGLT1、APN mRNA的相对表达量差异极显著(P<0.01),GLUT2和SI mRNA相对表达量存在显著差异(P<0.05);不同L-精氨酸水平海东鸡肠道PepT1、GLUT2、SGLT1、SI mRNA相对表达量存在极显著差异(P<0.01),APN mRNA差异不显著(P>0.05)。由此可见,海东鸡肠道营养转运载体PepT1、SGLT1、GLUT2及消化酶APN、SI mRNA表达具有肠段及L-精氨酸水平的差异性,日粮添加1.16%L-精氨酸对于肠道整体营养转运载体及消化酶的基因表达影响最佳。

理中汤对脾阳虚大鼠模型PepT1及其转运功能的影响

目的观察理中汤对脾阳虚模型大鼠小肠上皮肽转运载体蛋白1对二肽转运功能改变、肽转运载体PepT1及其mRNA表达变化的影响。方法采用利血平复合因素造模法建立脾阳虚大鼠模型,以头孢氨苄做为PepT1的转运底物,通过反相高效液相法(RP-HPLC)测定其血药浓度来反映脾阳虚大鼠小肠上皮细胞PepT1的吸收转运功能,RT-PCR测定大鼠小肠黏膜PepT1 mRNA表达,免疫组织化学方法观察大鼠小肠PepT1蛋白表达情况,同时用酶联免疫法测定小肠黏膜组织cAMP含量。结果模型组大鼠血清中cefalexin浓度明显高于正常组,经理中汤治疗后,大鼠cefalexin血药浓度与正常对照组比较无显著性差异;模型组大鼠PepT1蛋白表达明显上调(P<0.05),理中汤治疗组大鼠的PepT1蛋白表达与正常组比较未见明显差异;脾阳虚模型大鼠PepT1 mRNA表达水平较正常组明显下调(P<0.05),经理中汤治疗后,其下调趋势被逆转,与正常组比较未见明显差异;模型组大鼠小肠黏膜cAMP浓度较之于正常组,明显降低,经过理中汤治疗恢复接近正常组水平。结论脾阳虚模型大鼠小肠黏膜PepT1转运功能增强,蛋白表达上调,理中汤治疗可逆向调节这种改变。

理中汤对Caco-2细胞PepT1转运功能的影响

目的:观察理中汤对Caco-2细胞肽转运载体(PepT1)转运二肽的能力及其蛋白、mRNA表达的影响。方法:Caco-2细胞融合后连续培养28 d后给予理中汤处理,并设立空白及cAMP抑制剂对照组,用放射性同位素示踪技术比较Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的能力,用Western blot法测定Caco-2细胞膜上PepT1蛋白的表达,荧光定量PCR法测定PepT1 mRNA(SLC15A1)的表达水平。结果:理中汤处理组Caco-2细胞15,30,60,120 min时点Glycyl-Sarcosine吸收转运累计量分别为(4.52±0.57),(6.34±0.57),(7.29±0.64),(8.23±0.67)μmol/孔,高于空白对照组(P<0.05),后者分别为(2.42±0.68),(3.15±0.76),(5.62±0.20),(6.54±0.54)μmol/孔;理中汤与Rp-8-Br-cAMP合用组15,30,120 min时点分别为(2.68±0.46),(4.13±0.46),(6.73±0.43)μmol/孔,明显低于相应时点单用理中汤组(P<0.05);理中汤处理后Caco-2细胞膜PepT1蛋白表达增加,PepT1表达与内参GAPDH表达灰度比值理中汤组为(0.326±0.031),高于空白对照组(0.220±0.019)(P<0.01);理中汤对Caco-2细胞SLC15A1 mRNA表达未见明显作用,但与cAMP抑制剂合用,理中汤能逆转Rp-8-Br-cAMP下调Caco-2细胞SLC15A1 mRNA表达的作用。结论:理中汤具有促进正常培养Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的作用,该作用可能与其促进胞浆中PepT1蛋白嵌入胞膜中发挥转运二肽的功能有关,该过程调控与胞内第二信使cAMP有一定的关系。

6-姜酚对Caco-2细胞PepT1转运功能的影响

目的:观察6-姜酚对Caco-2细胞肽转运载体PepT1转运二肽的能力及其蛋白、mRNA表达的影响。方法:Caco-2细胞融合后连续培养28 d后给予6-姜酚处理,并设立正常对照组及cAMP抑制剂对照组,用放射性同位素示踪技术比较Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的能力,采用Western blot方法测定Caco-2细胞膜上PepT1蛋白的表达,荧光定量PCR方法测定PepT1 mRNA(SLC15A1)的表达水平。结果:6-姜酚处理组Caco-2细胞60,120 min时点Glycyl-Sarcosine吸收转运累计量分别为(6.84±0.46),(8.61±0.54)μmol/孔,高于正常对照组(P<0.05),后者分别为(5.62±0.20)、(6.54±0.54)μmol/孔;6-姜酚与Rp-8-Br-cAMP合用组120 min时点为(6.92±0.67)μmol/孔,明显低于相应时点单用6-姜酚组(P<0.05);6-姜酚处理后Caco-2细胞膜PepT1蛋白表达增加,PepT1表达与内参GAPDH表达灰度比值6-姜酚组为(0.317±0.022),高于空白对照组(0.220±0.019)(P<0.01);荧光定量PCR结果,6-姜酚能上调Caco-2细胞SLC15A1 mRNA表达,但与cAMP抑制剂合用后该抑制作用被阻断。结论:6-姜酚具有促进正常培养Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的作用,该作用可能与上调PepT1蛋白及mRNA表达有关,该过程调控与胞内第二信使cAMP有一定的关系。