血清甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶对肝癌诊断价值的探讨

目的检测血清甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)并探讨其对肝癌的诊断价值。方法采用连续监测法分别对30例原发性肝癌、胆石症、肺癌、肝硬化、慢性肝炎及15例胃癌患者血清GPDA进行测定。结果原发性肝癌患者的GPDA活性和阳性率比胆石症、肺癌、肝硬化、慢性肝炎及胃癌患者显著增高(P<0.01)。结论血清GPDA活性测定对原发性肝癌有一定辅助诊断价值。

类线粒体内膜肽酶2(IMMP2L)基因突变激活线粒体凋亡途径加重小鼠脑缺血性损伤

目的探讨类线粒体内膜肽酶2(IMMP2L)基因突变对脑缺血性损伤的影响及其机制。方法采用野生型(WT)小鼠及IMMP2L基因突变(IMMP2L^(+/-))小鼠,通过大脑中动脉栓塞法(MCAO)建立脑缺血再灌注(I/R)模型,于再灌注0、1、5、24 h收集皮质区脑组织。通过激光散斑血流成像技术(LSCI)监测脑血流(CBF)变化、Longa行为学评分评价神经功能、三苯基氯化四氮唑(TTC)染色评估脑梗死范围、HE染色观察神经元损伤;用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色分析神经元凋亡的变化情况,Western blot法检测裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)及凋亡诱导因子(AIF)的蛋白表达。结果与WT脑缺血组相比,IMMP2L^(+/-)脑缺血组神经行为学评分增加;再灌注5、24 h,梗死灶体积扩大、变性神经元数量增多、脑水肿程度加重;再灌注0、1、5、24 h,凋亡细胞增加;c-caspase-3和AIF的蛋白水平在I/R 5、24 h出现上调。结论IMMP2L突变加重脑缺血性损伤,并可能通过激活线粒体凋亡途径加重脑缺血性损伤。

人羧肽酶A1活性中心的毕赤酵母可溶表达

目的:应用毕赤酵母表达系统表达人羧肽酶A1(carboxypeptidaseA1,CPA1)活性中心蛋白.方法:从pGEX-CPA1重组质粒中扩增出CPA1活性中心基因,亚克隆入酵母表达载体pPIC9K,酵母重组表达载体pPIC9K-CPA1activecen-ter电转化入毕赤酵母SMD1168,并进行营养缺陷筛选和G418抗性筛选,对高拷贝整合的重组酵母表达菌株诱导表达.结果:构建得到酵母融合重组表达载体pPIC9K-CPA1activecen-ter,经G418浓度梯度筛选得到串联整合16个重组表达载体的重组酵母表达菌株,诱导表达后得到CPA1活性中心蛋白.结论:在毕赤酵母中成功表达了CPA1活性中心,为进一步研究CPA1活性中心在抗体导向酶-前体药物疗法中的应用打下了基础.

内质网氨肽酶2基因rs2549782多态性与妊娠期高血压发病的相关性

目的:探讨内质网氨肽酶2(ERAP2)基因rs2549782多态性与淮安地区汉族女性妊娠期高血压发病的关系。方法:应用病例对照研究,收集2013年6月—2016年4月江苏省淮安市妇幼保健院确诊的汉族妊娠期高血压疾病患者100例为研究对象(病例组),同期住院分娩正常孕妇310例为对照(对照组),应用MassARRAY-IPLEX技术和基质辅助激光解吸离子飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对ERAP2基因rs2549782位点进行基因分型。结果:2组中rs2549782位点等位基因分布差异无统计学意义(P=0.089),而基因型分布差异有统计学意义(P=0.045)。经校正混杂因素后,Logistic回归分析提示G等位基因(OR=1.64,95%CI:1.09~2.47)以及GT基因型(OR=2.23,95%CI:1.01~4.07)和GG基因型(OR=2.96,95%CI:1.20~7.31)为妊娠期高血压发生的危险因素。结论:ERAP2基因rs2549782位点单核苷酸多态性与淮安汉族妊娠期高血压疾病的发生具有相关性,G等位基因、GT和GG基因型均为妊娠期高血压的危险因素。

败血症休克大鼠组织中性内肽酶与肾上腺髓质素的相关关系研究

目的观察败血症休克大鼠组织肾上腺髓质素(ADM)含量和中性内肽酶(NEP)的活性及其表达水平,以探讨NEP的变化在休克时组织ADM水平变化中的意义。方法盲肠结扎穿孔方法复制大鼠败血症性休克模型,采用放射免疫方法和荧光分光光度法分别检测血浆和组织的ADM含量和NEP的活性,用半定量RT-PCR和免疫组织化学法分别检测NEP的mRNA及其蛋白的组织分布。结果ADM和NEP广泛分布于大鼠的血浆和组织。休克早期,大鼠各组织ADM含量普遍高于对照组,NEP活性在心脏和小肠低于对照组,在血浆中高于对照组,在肺、肾和主动脉无明显变化。免疫组化结果显示,休克早期NEP在大鼠心脏、主动脉内膜和中膜的分布低于对照组。休克晚期,除大鼠小肠的ADM含量低于休克早期,血浆和其余组织的ADM含量均高于休克早期;与休克早期比较,NEP的活性除在大鼠肾脏无明显变化外,在血浆和其余组织均明显降低。NEP的免疫组化结果显示,休克晚期,NEP在大鼠心脏、主动脉内膜和中膜、肺和肾的分布弱于休克早期,在主动脉外膜无明显变化。RT-PCR结果显示,休克晚期大鼠心脏、主动脉、肺脏和小肠的NEPmRNA表达均显著低于对照组。结论NEP在大鼠败血症休克的不同时期和不同组织中的变化与ADM含量的变化不一致,提示休克过程中,不同组织局部的NEP对ADM含量的影响不同。

基因芯片法检测胆囊胆固醇结石病人肝脏羧肽酶E的表达

目的:利用基因芯片和实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)分析胆囊胆固醇结石病人肝脏中羧肽酶E(carboxypeptidase E,CPE)的mRNA表达,探讨CPE与胆囊胆固醇结石形成可能相关的分子机制。方法:检测病人的血清总胆固醇、三酰甘油以及胆石、胆汁成分测定。正常肝细胞株(HL-7702)为共同参照,用含10 000个cDNA克隆的芯片对8份肝脏标本样品(包括6例胆囊结石和2例无胆囊结石对照)进行基因表达谱对比分析;通过实时PCR验证阳性结果。结果:有效表达基因6 068个,与正常对照组比较,胆固醇结石病人的肝脏有67条差异表达基因,其中CPE基因呈下调表达,经实时PCR验证与芯片筛选结果一致。进一步比较另12例胆固醇结石病人和8例对照组的肝脏组织CPE表达,CPE在胆囊胆固醇结石病人肝脏中的表达也显著低于对照组(39.52±6.21比124.50±36.36,P<0.05)。结论:肝脏CPE表达下降可能与胆囊胆固醇结石的形成有关。

γ-sem inoprotein单链抗体/突变型人羧肽酶A融合基因的构建

目的 从人正常肺组织中提取羧肽酶 A基因后进行了定点突变 ,并将突变型人羧肽酶 A基因与抗精浆蛋白单链抗体基因进行融合 .方法 应用重叠延伸法将突变型人羧肽酶 A与抗精浆蛋白单链抗体基因进行融合 ,并在大肠杆菌中进行表达 .结果 序列分析表明 :我们得到大约为 1 980 bp的基因 ,其 5 端为抗精浆蛋白单链抗体基因 ,3 端为人羧肽酶 A突变体基因 ,抗精浆蛋白单链抗体和突变型人羧肽酶 A基因成功地融合为一条基因 ,应用 p GEX- 4 T- 1表达载体原核表达得到一 Mr约为 970 0 0的特异蛋白 .结论 抗精浆蛋白单链抗体和突变型人羧肽酶

中性内肽酶抑制药在心血管疾病治疗中的应用

中性内肽酶抑制药通过抑制中性内肽酶 ,延迟缓激肽分解 ,抑制血管紧张肽Ⅱ和内皮素生成等机制发挥扩血管 ,改善血管内皮功能、促进排钠利尿等作用 ,在高血压、心力衰竭等疾病的治疗中发挥重要作用。

尿二肽氨肽酶Ⅳ测定的临床意义

报告采用荧光分光光度计法测定慢性肾小球肾炎，狼疮性肾炎及肾移植术后病人尿二肽氨肽酶Ⅳ（ＤＡＰⅣ）的活性。结果表明有肾小管间质损害的病人此酶活性增高，两者呈正相关关系。肾移植术后合并急性排斥反应，此酶活性增高幅度大，出现时间早，敏感性较尿Ｎ－乙酰－β－葡萄糖酰胺酶（ＮＡＧ）。

肺心病患者血清Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原及脯氨酸肽酶测定的临床意义

目的 :研究肺心病患者血清中Ⅲ型前胶原 (PCⅢ )、Ⅳ型胶原 (CⅣ )及脯氨酸肽酶 (PLD)的含量变化及其临床意义。方法 :采用放射免疫分析法检测血清中PCⅢ与CⅣ含量 ;用分光光度比色法检测血清中PLD含量。结果 :肺心病患者血清中PCⅢ、CⅣ及PLD均显著高于对照组 (P <0 .0 1) ,且其升高程度与病情相关。结论 :肺心病患者血清PCⅢ、CⅣ及PLD水平可作为估价肺血管重建、肺动脉高压及患者病情的参考指标。

曼氏迭宫绦虫中亮氨酸氨基肽酶基因的生物信息学分析和转录水平检测

目的检测曼氏迭宫绦虫的3个亮氨酸氨基肽酶亚类(leucine aminopeptidases of Spirometra mansoni,Sm LAPs)基因在虫体不同发育阶段的转录水平,为进一步病原诊断研究奠定基础。方法运用生物信息学相关软件对3个亮氨酸氨基肽酶亚类编码蛋白的氨基酸序列的功能区域、免疫学特征、信号肽和跨膜区预测分析。应用Real time PCR方法检测Sm LAPs在曼氏迭宫绦虫的成节、孕节和裂头蚴阶段的转录水平。结果对Sm LAPs编码氨基酸序列的保守区域进行比对,Sm LAPa与Sm LAPb、Sm LAPc的氨基酸序列一致性均为38%,Sm LAPb和Sm LAPc的一致性也只有44%。多功能位点分析发现,Sm LAPs均含有底物结合位点、锌离子结合位点和多肽结合位点。在B细胞线性表位预测结果显示,Sm LAPa有13个、Sm LAPb有14个、Sm LAPc有13个。T细胞表位预测中,Sm LAPa有12个、Sm LAPb有13个、Sm LAPc有14个。3个Sm LAPs亚类序列中均含有一个强烈的信号肽,并且均没有跨膜区域。在虫体各个发育阶段的转录水平检测中,在成节阶段,Sm LAPb的转录水平是Sm LAPa的1.34倍,Sm LAPc的转录水平是Sm LAPa的46.53倍。在孕节阶段,Sm LAPb的转录水平是Sm LAPa的1.96倍,Sm LAPc的转录水平是Sm LAPa的56.89倍。在裂头蚴阶段,只有Sm LAPc有转录,没有检测到Sm LAPa和Sm LAPb的转录。结论在3个Sm LAPs亚类基因中,Sm LAPc是裂头蚴病更有价值的免疫诊断分子。

肺心病患者血清Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原及脯氨酸肽酶含量的改变

目的 研究肺心病患者血中Ⅲ型前胶原 (PCⅢ )、Ⅳ型胶原 (CⅣ )及脯氨酸肽酶 (PLD)的含量变化及临床意义。方法 对 30例肺心病患者和 30例健康人采用放射免疫分析法检测血清中PCⅢ及CⅣ的含量 ;用分光光度比色法检测血清中PLD含量。结果 肺心病患者血清中PCⅢ及CⅣ含量明显增高 ,同时PLD含量亦增加 ,与健康对照组比较 ,差异有高度显著性 ,P <0 .0 1。结论 肺心病患者血清PCⅢ、CⅣ及PLD的水平可作为反映肺血管重建和肺动脉高压的参考指标。

LMP2/LMP7基因多态性与人群中乙型肝炎病毒感染相关性研究

目的:探讨低相对分子质量蛋白酶体(lowmolecularweightproteasome,LMP)基因单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphisms,SNP)与人群中乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)感染易感性的关联。方法:提取176例HBV感染者及208例健康人外周血基因组DNA,用PCR方法扩增LMP2/LMP7基因包含Codon60/Codon145两个多态性位点的片段,DNA直接测序法检测健康个体基因型,限制性片段长度多态性方法(restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)明确HBV感染者基因型。并采用PHASE1.0软件构建这两个多态性位点的个体单倍体型。以非条件Logistic回归校正混杂因素,并进行多态性与HBV感染风险关联的统计学分析。结果:LMP7基因多态性位点在两组人群中的差异有统计学意义(P<0.05),较之野生型Q/Q,杂合型Q/KOR=2.11(95%CI:1.36～3.26),纯合型K/KOR=2.66(95%CI:1.17～6.02);LMP2基因多态性位点在两组人群中差异无统计学意义(P>0.05)。在这两个位点所构建的单倍体型中,具有单倍体RK的个体在两组人群中差异有统计学意义(P<0.01,OR=1.81)。结论:LMP7基因的多态性与HBV感染有着显著的易感关联,虽然LMP2/LMP7基因多态性位点共同存在于单倍型时呈现一定拮抗作用,但结果提示,对于HBV感染的发生,LMP的多态性仍然是一个重要的易感危险因素。

胰腺癌胰液差异蛋白质丝氨酸蛋白酶2在胰腺癌组织和细胞株中的表达

目的研究胰腺癌胰液差异蛋白质丝氨酸蛋白酶2(PRSS2)在胰腺癌组织和细胞株中的表达,为临床胰腺癌的早期诊断及治疗提供新靶点。方法在4株胰腺癌细胞株、20例胰腺癌组织及20例正常胰腺组织中,以PCR法检测PRSS2 mRNA的表达,并分析其与胰腺癌临床特征之间的关系。结果PRSS2在正常胰腺、胰腺癌组织和胰腺癌细胞株中均有表达,在胰腺癌和正常组织中的相对表达量(RQ值)分别为33.76(6.47,107.98)和3.74(0.96,28.83),前者明显高于后者(P<0.05);PRSS2在癌组织中的表达与肿瘤分化程度、肿瘤大小、肿瘤淋巴结转移、血清CA19-9水平、血清CEA水平均无相关性。结论胰腺癌胰液中的PRSS2可作为胰腺癌诊断的潜在肿瘤标志物;从胰液筛查差异蛋白质作为胰腺癌早期诊断的肿瘤标志物是可行的。

4项检测指标诊断细菌性阴道病的价值比较

目的比较Amsel′s标准方法与安图阴道炎五联试剂盒(简称安图五联检测法)检测过氧化氢(H2O2)、白细胞酯酶(LE)、唾液酸苷酶(NA)、脯氨酸氨基肽酶(PIP)对细菌性阴道病的诊断价值。方法对中山市人民医院妇科就诊的1250例患者阴道分泌物标本进行常规Amsel′s标准方法检测,以安图五联检测法检测H2O2、LE、NA、PIP。结果 1250例受检者Amsel′s标准法检出细菌性阴道病220例,占17.6%;与Amsel′s标准法比较,阴道分泌物中H2O2、LE、NA、PIP的总符合率分别为61.6%、77.4%、95.3%、95.6%;敏感性分别为88.6%、99.5%、90.0%、91.4%;特异性分别为55.8%、72.6%、96.4%、96.5%;阳性预测值分别为30.0%、43.7%、84.3%、84.8%;阴性预测值分别为95.8%、99.9%、97.8%、98.1%。结论安图五联检测法与Amsel′s标准方法相比具有敏感性高、特异性较强、操作简便快速等优点,对传统的旧指标有互补和替代作用,可为临床诊治细菌性阴道病提供新的参考依据。

中华眼镜蛇毒金属蛋白酶诱导人肥大细胞释放组胺的作用

目的:探索中华眼镜蛇毒金属蛋白酶(MT)对人肥大细胞释放组胺的诱导作用及其机制。方法:用肝素凝胶和Superdex75亲和力凝胶纯化MT。将手术切除的人肺、大肠和扁桃体组织在37℃用Ⅰ型胶原酶和Ⅰ型透明质酸酶消化,悬浮细胞均匀地加入含MT、刺激剂或缓冲液的试管中,进行激发实验并用荧光显色法测量上清液的组胺水平。结果:纯化后的MT在SDS-PAGE上呈1条带。MT能诱导人肺、大肠和扁桃体肥大细胞发生剂量依赖性组胺释放。浓度低至0.03 mg/L时,MT就能诱导大肠肥大细胞显著性的组胺释放,但对于肺和扁桃体的肥大细胞,MT的最低有效浓度分别为0.3 mg/L和30 mg/L。MT诱导大肠和肺肥大细胞组胺释放,12 min时达高峰,而扁桃体肥大细胞的组胺释放则在8 min时达高峰。人大肠、肺和扁桃体肥大细胞经代谢抑制剂和百日咳毒素预处理后,MT诱导其释放组胺的作用明显减弱。缺乏外源性钙、镁离子时,MT诱导肥大细胞释放组胺的能力也明显减弱。结论:MT可能通过G蛋白偶联受体途径激活人肥大细胞,从而参与毒蛇咬伤人体后所发生的病理生理过程。

平阳霉素对体外培养血管内皮细胞的作用

目的研究平阳霉素对人脐静脉内皮细胞的抑制作用及其原理,以揭示其治疗头颈部血管瘤的机理。方法采用人脐静脉内皮细胞系ECV-304,用MTT实验比较平阳霉素作用24小时、48小时后的细胞抑制率,通过流式细胞术测定平阳霉素作用24小时后细胞周期、凋亡、半胱氨酸蛋白酶(Caspase3)表达的变化。结果平阳霉素作用24小时和48小时其浓度和细胞抑制率存在依赖关系,24小时各浓度抑制作用均强于48小时;平阳霉素各浓度作用24小时后,G1期百分率增高,G1期前出现亚二倍体凋亡峰,S期百分率降低,G2期百分率无明显变化。平阳霉素作用后细胞凋亡百分率随药物浓度增加而增高,Caspase3表达在平阳霉素各浓度组均增强。结论平阳霉素对脐静脉内皮细胞有确切的抑制作用,这种抑制作用主要是通过细胞凋亡实现的,Caspase3参与了平阳霉素诱导血管内皮细胞凋亡的过程。

白细胞介素-1β诱导牙髓细胞的金属蛋白酶-1和COX2的表达

目的 :探讨白细胞介素 1β对人牙髓细胞金属蛋白酶 1(matrixmetalloproteinase 1,MMP 1)、环氧合酶 2 (cyclooxygenase 2 ,COX2 )基因表达变化的生物学意义。方法 :培养人牙髓细胞 ,传代至第 4代 ,PT PCR检测人牙髓细胞是否表达IL 1β受体 ,进而用 1nmol/L人的重组IL 1β刺激人牙髓细胞 18h ,提取细胞总RNA ,反转录为cDNA ,半定量PCR检测IL 1β对人牙髓细胞的金属蛋白酶 1、COX2的mRNA的表达变化。结果 :人牙髓细胞表达IL 1β受体 ,而且用 1nmol/L人的重组IL 1β明显地刺激牙髓细胞的金属蛋白酶 1、COX2的mRNA表达。结论 :牙髓炎时牙髓组织内的IL 1β生成增多 ,会进一步引发金属蛋白酶 1、COX2基因异常表达相应增多 ,而金属蛋白酶 1导致炎症基质降解、COX2将引发炎性痛的病理改变。