铅对肾上腺皮质细胞线粒体的氧化损伤

【目的】研究铅对肾上腺皮质细胞氧化应激和线粒体功能的影响 ,为了解其肾上腺皮质毒作用机制提供依据。【方法】原代分离培养豚鼠肾上腺皮质细胞 ,以 0、6 2 5、12 5、2 5、5 0、10 0 μmol/L醋酸铅 (PbAc)处理细胞 ,观察PbAc诱导肾上腺皮质细胞活性氧 (ROS)产生和线粒体损伤作用。ROS检测采用荧光分光光度法 ,线粒体膜电位 (MMP)和细胞存活状态采用Rh12 3和PI双标记、流式细胞术检测 ,细胞ATP水平采用化学发光法测定。【结果】PbAc染毒后肾上腺皮质细胞ROS形成水平随剂量增加而增加 ,具有剂量效应关系 [^y=4 16 +10 2 1× 1g(x+1) ,P <0 0 1,R2 =0 6 41];线粒体膜电位呈剂量依赖性降低 ,Rh12 3的平均荧光强度 (MFI)在 6 2 5～ 10 0 μmol/L各剂量组依次为 1 0 1,0 94,0 96 ,0 95和 0 91,与对照组(1 35 )比较具有显著性差异 (P <0 0 1) ;染毒后细胞死亡率轻度增加 ,与对照组 (1 0 2 % )比较 ,5 0 μmol/L和 10 0 μmol/L的PbAc组分别为 3 16 %和 3 40 % ,差异具有显著性 (P <0 0 5 ) ;ATP水平降低与PbAc剂量之间存在剂量效应关系 [^y =2 12 96 5 7- 5 15 92 5× 1g(x +1) ,P <0 0 1,R2 =0 5 6 8],剂量和时间对ATP水平的影响呈协同抑制作用 (P <0 0 1)。【结论】线粒体氧化应激介导肾?

雷公藤内酯醇药物血清对体外培养的大鼠肾上腺皮质细胞分泌功能的影响

目的:研究雷公藤内酯醇药物血清对体外培养的大鼠肾上腺皮质细胞分泌功能的影响。方法:将SD大鼠30只随机分成对照组、泼尼松组和低、中、高剂量雷公藤内酯醇组,相应药物灌胃7d制备药物血清。分离正常大鼠肾上腺皮质细胞,分别加入药物血清常规培养48h后,采用免疫组织化学法观察增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达,并计算PCNA阳性细胞数;透射电子显微镜观察肾上腺皮质细胞的超微结构;酶联免疫吸附测定法检测细胞培养上清液中皮质酮水平;实时荧光定量聚合酶链式反应法检测肾上腺皮质细胞3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroi ddehydrogenase,3β-HSD)mRNA表达水平。结果:各个浓度雷公藤内酯醇药物血清组肾上腺皮质细胞培养上清液中皮质酮水平及细胞中3β-HSDmRNA表达水平较对照组明显升高;中、高剂量雷公藤内酯醇组PCNA阳性细胞比率高于对照组(P<0.05),泼尼松组上清液中皮质酮水平、细胞中3β-HSDmRNA表达水平和PCNA阳性细胞比率均低于对照组(P<0.05)。结论:雷公藤内酯醇对体外培养的大鼠肾上腺皮质细胞有刺激作用,可以促使肾上腺皮质细胞分泌皮质酮。

氯化镉致豚鼠肾上腺皮质细胞凋亡作用

目的探讨P44/42丝裂素活化蛋白激酶(P44/42MAPK)在CdCl2诱发豚鼠肾上腺皮质细胞凋亡中的作用机制。方法原代培养豚鼠肾上腺皮质细胞,以0,12.5,25,50,100和200μmol/L CdCl2处理细胞2 h,及100μmol/L的CdCl2处理0,0.5,1,2,3和4 h,以Annexin V碘化丙啶(PI)联合染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率;0,12.5,25,50,100和200μmol/L CdCl2处理1 h,或者100μmol/L的CdCl2处理0,15,30,60,90和120 min;采用蛋白印迹(Western Blot)法分析P44/42总蛋白量、磷酸化水平以及c-Fos的表达水平。结果CdCl2以时间和剂量依赖的方式诱导细胞凋亡,0,12.5,25,50,100和200μmol/L CdCl2处理细胞2 h后,凋亡率分别为1.99%,14.79%,35.28%,44.62%,55.91%及73.48 7%;100μmol/L CdCl2染毒0,0.5,1,2,3和4 h,细胞凋亡率分别为1.04%,14.70%,33.99%,49.36%,61.57%及71.55%。CdCl2诱发P44、P42磷酸化水平升高及c-fos的高表达,以25,50,100和200μmol/L CdCl2染毒1 h,P44磷酸化水平分别升高了1.0,1.2,2.1和3.2倍;100和200μmol/L CdCl2染毒1 h,P42磷酸化水平升高了0.8和1.3倍;12.5,25,50,100和200μmol/L CdCl2处理细胞1 h,c-Fos的表达水平升高了0.6,1.2,1.4,2.3和1.8倍。100μmol/L CdCl2作用细胞15,30,60,90和120 min后,P44磷酸化水平分别升高了0.5,3.1,4.9,5.9和5.3倍;P42的磷酸化水平分别升高了0.1,0.5,0.9,1.1和1.1倍,同时c-Fos蛋白水平分别升高了1.6,2.3,2.3,3.1和2.8倍。结论一定剂量CdCl2作用肾上腺皮质细胞后,P44/42呈现过度磷酸化,并可能通过诱发c-Fos高表达,导致细胞凋亡。

大鼠肾上腺皮质细胞微囊移植研究

目的 :将成年大鼠肾上腺皮质细胞分离 ,培养并微囊化后植入肾上腺功能低下大鼠模型体内 ,以探索新的肾上腺移植途径。方法 :成年SD大鼠分成三组 :A组为对照组 ,B组模型植入体外培养并微囊化的肾上腺皮质细胞 ,C组模型植入未经微囊化的肾上腺皮质细胞 ,用放射免疫方法 (RIA)检测移植术后 3 ,9,2 1,42 ,6 3d模型鼠血中皮质醇浓度 ,9周后行组织学检查。结果 :(1)B组大鼠血浆皮质醇最后达 (30 1.33± 88.81)nmol/L ;(2 )植入微囊化肾上腺皮质细胞的模型鼠组织切片 ,未发现排斥反应。结论 :接受微囊化肾上腺皮质细胞移植后肾上腺功能低下大鼠的血清皮质醇水平可接近正常值。

应激活化蛋白激酶介导氯化镉致肾上腺皮质细胞凋亡作用探讨

目的 了解氯化镉 (CdCl2 )对豚鼠肾上腺皮质细胞应激活化蛋白激酶 (stressactivatedproteinkinase ,SAPK)活性的影响及与凋亡的可能关系。方法 以 0 6 2 5、1 2 5和 2 5 0mg/kgCdCl2 整体腹腔注射染毒雄性豚鼠 ,分别于染毒 1h和 12h处死动物 ,取肾上腺皮质进行SAPK活性测定 (免疫沉淀 -蛋白印迹杂交 -化学发光法 )和电镜观察细胞凋亡。结果 整体染毒 1h ,SAPK活性随CdCl2 染毒剂量的增加呈增加的趋势 ;染毒 12h ,各组SAPK活性变化不明显。电镜观察染毒 1h肾上腺皮质细胞未见凋亡征象 ;但染毒 12h可见早期细胞凋亡。结论 SAPK活化在CdCl2

P44/42MAPK介导雷公藤甲素致肾上腺皮质细胞凋亡作用

目的 :了解P44/42丝裂素活化蛋白激酶在雷公藤甲素诱导大鼠肾上腺皮质细胞凋亡中的作用。方法 :体外分离培养大鼠肾上腺皮质细胞,以不同浓度梯度雷公藤甲素染毒相同时间,或相同浓度雷公藤甲素染毒不同时间,以蛋白因子添加素V和碘化丙啶联合标记,流式细胞仪检测细胞凋亡率;蛋白印迹法分析P44/42总蛋白量、磷酸化水平以及c-Fos的表达水平。结果 :雷公藤甲素以时间和剂量依赖的方式诱导细胞凋亡;雷公藤甲素诱导P44、P42磷酸化水平升高及c-Fos的高表达。结论 :一定剂量雷公藤甲素作用于肾上腺皮质细胞后,P44/42过度磷酸化,诱导c-Fos的高表达,导致细胞凋亡。

雷公藤甲素诱导大鼠肾上腺皮质细胞凋亡研究

目的:了解雷公藤甲素诱导大鼠肾上腺皮质细胞凋亡的发生。方法:体外分离培养大鼠肾上腺皮质细胞,以蛋白因子添加素V和碘化丙啶(PI)联合标记,流式细胞仪检测,观察雷公藤甲素诱导细胞凋亡的特征。结果:雷公藤甲素以时间和剂量依赖的方式诱导细胞凋亡,0、12.5、25、50、100和200μg/L雷公藤甲素处理细胞2h,凋亡率分别为1.67%、16.54%、32.53%、47.62%、57.12%及77.45%;100μg/L雷公藤甲素染毒0、0.5、1、2、3和4h,细胞凋亡率分别为1.12%、14.37%、35.26%、49.75%、62.65%及78.46%。结论:雷公藤甲素可诱导肾上腺皮质细胞凋亡。

大鼠肾上腺皮质细胞原代培养分离与鉴定

目的体外培养大鼠肾上腺皮质细胞原代细胞，并为临床实验提供对照和补充。方法采用胶原酶Ⅱ、透明质酸酶消化法分离Wistar大鼠的肾上腺皮质细胞，在不同离心转速下离心后分为三组（A组1200r／min、B组1500r／rain和C组1800r／min）；分离出的细胞于全料培养基恒温培养；采用免疫组织化学法、培养基上清皮质酮水平测定及电镜下观察细胞形态分别鉴定。结果三组中B组培养得到肾上腺皮质细胞较多，A、C组得到正常的皮质细胞较少；光镜下培养的肾上腺皮质细胞呈梭形、胞体较大、有少量突起，3β-羟内固醇脱氢酶特异性染色后胞质内可见大量棕黄色甲蜡沉淀；培养3d后换液，取培养基上清测定皮质酮水平特异性增高。结论通过皮质酮水平测定、光镜和电镜下细胞形态观察及特异酶染色鉴定，本实验培养的细胞为原代大鼠肾上腺皮质细胞，该方法培养出的肾上腺皮质细胞为肾上腺体外实验研究提供了技术基础。

肾上腺皮质细胞的单层培养方法

目的 :体外单层培养大鼠肾上腺皮质细胞 ,以便为肾上腺皮质细胞的有关实验提供必要条件。方法 :采用胶原酶Ⅱ、透明质酸酶消化等步骤分离Wistar大鼠的肾上腺皮质细胞 ;分离的细胞于含 15 %NBS的DMEM培养基、37℃、5 %CO2 的环境中培养 ,3β 羟基类固醇脱氢酶特异染色鉴定。结果 :培养的肾上腺皮质细胞呈梭形 ,胞体较大、有少量突起 ,3β 羟基类固醇脱氢酶特异染色后胞体显著着蓝色。肾上腺皮质细胞不呈典型的“S”形增殖趋势 ,适于作原代培养。上皮样细胞和成纤维样细胞同时存在。结论 :通过细胞形态观察及特异酶染色鉴定 ,本文培养的细胞为大鼠肾上腺皮质细胞。

内皮素-1对原代培养的大鼠肾上腺皮质细胞增殖与分泌的影响

目的:探讨内皮素(ET)-1对原代培养的大鼠肾上腺皮质细胞增殖与分泌的影响,以期优化肾上腺皮质细胞体外培养方案,为肾上腺细胞移植提供最适宜的条件。方法:原代培养大鼠肾上腺皮质细胞,培养液中含不同浓度(10-6^-15mol/L)ET-1,以MTT法检测细胞增殖;细胞爬片免疫组化检测各组细胞增殖因子(PCNA)阳性率;放射免疫法检测各组培养液中皮质酮浓度。结果:ET-1浓度为10-10^-11 mol/L时,MTT法吸光度值、PCNA阳性率、皮质酮浓度均高于对照组(P<0.05)。结论:10-10^-11 mol/L ET-1可有效促进大鼠皮质细胞的增殖及分泌功能,增加细胞活力,利于肾上腺细胞移植的进行。

磷脂类对肾上腺的作用 一、肾上腺皮质细胞形态观察

一、本实验共用小白鼠38只,家兔17只,大鼠8只,全部为成年雄性,其中实验组每日喂以浓缩黄豆磷脂,定期杀死取两侧肾上腺,制作线粒体、高尔基体、核酸及冰冻切片标本,观察肾上腺皮貭的细胞形态学变化。二、喂磷脂后发现肾上腺皮貭细胞1.线粒体的数目和大小有轻微增多增大现象,小白鼠的束状带和网状带以及家兔的交错带较为显著些。2.高尔基体网架较为粗大,网团范围较广,结构较复杂,对锇酸还原力较强,在皮貭的可见范围较大。3.类脂貭稍见增多。4.细胞核较有增大,核仁数目也加多。三、喂磷脂后尽管由于个体或细胞类型的不同,以致它们所表现的结果也不完全相似,但总起来看,对细胞结构都具有一定的加强作用。四、文中对高尔基体和类脂貭在皮貭的出现,以及它们与线粒体的关系进行了讨论。并认为网状带是一层活性很强的细胞。

肾上腺皮质球状带细胞的电兴奋性与醛固酮分泌:离子通道的作用

醛固酮是肾上腺皮质球状带(ZG)细胞产生的类固醇类激素,对体液电解质平衡和血压稳定起着关键调控作用。醛固酮生成是一个钙离子依赖性的过程,离子通道在这一过程中扮演着关键角色。临床上发现的原发性醛固酮增多症大多与离子通道的突变有关。最近ZG细胞独特的rosette结构与其电兴奋性的关系引起了更多研究兴趣。阐明rosette与ZG细胞电兴奋性以及醛固酮分泌之间的关系,有助于更深入地了解调节醛固酮分泌的机制,为原发性醛固酮增多症的发病机制提供新见解。

镉对肾上腺皮质细胞线粒体功能的影响

目的 研究镉对肾上腺皮质细胞线粒体功能的影响 ,为探讨其内分泌毒作用机制提供依据。方法 原代分离培养豚鼠肾上腺皮质细胞 ,用氯化镉 (CdCl2 ) 0、6 .2 5、12 .5 0、2 5 .0 0、5 0 .0 0、10 0 .0 0、2 0 0 .0 0 μmol/L处理细胞 1h ,以 5 0 μmol/LCdCl2 处理细胞 0、15、30、6 0、12 0、2 40min ,观察CdCl2对肾上腺皮质细胞线粒体功能毒作用的剂量 -效应及时间 -效应关系。应用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)试验检测线粒体酶活力 ,用流式细胞仪结合罗丹明 12 3(Rh12 3)和碘化丙啶 (PI)双标记法检测线粒体膜电位 (MMP)和细胞存活状态。结果 CdCl2 引起细胞线粒体酶活力及MMP降低 :以 6 .2 5～ 2 0 0 .0 0μmol/LCdCl2 染毒细胞 1h ,对照组MTT的平均吸光度 (A570nm)值为 0 .16 4,CdCl2 各组为 0 .138～ 0 .0 6 7,比对照组明显降低 ;染CdCl2 组细胞MMP也降低 ,Rh12 3平均荧光强度为 2 .44～ 1.0 2 (对照组为 2 .6 3)。5 0 μmol/LCdCl2 染毒后不同时间 (15～ 2 40min) ,MTTA570nm值和MMP均降低 ,前者为 0 .0 93～ 0 .0 49(对照组为 0 .180 ) ,MMP为 1.37～ 0 .93(对照组为 1.85 )。从最低剂量组 (6 .2 5 μmol/LCdCl2 )和最短染毒时间 (15min)起 ,MTTA570nm值和MMP的变化与对照组相比 ,差异均有显著性 (P

补骨脂酚对人肾上腺皮质癌H295R细胞中睾酮和雌二醇分泌的影响

[目的]研究补骨脂酚对人肾上腺皮质细胞(H295R)睾酮及雌二醇分泌的影响。[方法]实验分为空白对照组及补骨脂酚不同浓度组,分别使用CCK-8法及酶联免疫吸附法(ELISA法)检测补骨脂酚对H295R细胞活力、睾酮和雌二醇分泌的影响;同时采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测补骨脂酚对睾酮和雌二醇合成酶CYP17A1和CYP19A1 m RNA表达的影响。[结果]补骨脂酚对睾酮合成酶CYP17A1 m RNA无显著影响,但能上调雌二醇合成酶CYP19A1 m RNA含量,具有减少睾酮分泌增加雌二醇分泌的作用。[结论]补骨脂酚促进H295R细胞中雌激素的产生。

微囊化人胎肾上腺皮质细胞的制备及其形态、功能的研究

目的研究微囊化人胎肾上腺皮质细胞的制备及其功能，并进行形态学观察。方法将人胎肾上腺皮质制成单细胞，再用具有良好生物相容性的海藻酸钠聚赖氨酸海藻酸钠（ＡＰＡ）微囊包裹，制成微囊化肾上腺皮质细胞。将分离的肾上腺皮质细胞和微囊化肾上腺皮质细胞分组进行培养，测定培养２２、４６、７０小时的培养液中的皮质醇含量，在取培养液的同时加入含促肾上腺皮质激素（１２５ｎｇ／Ｌ）的培养液刺激培养２小时，即培养中的２４、４８、７２小时再取培养液测定皮质醇含量。结果形态学观察发现机械法分离的肾上腺皮质细胞存活率为９２％，制备成微囊后的肾上腺皮质细胞存活率为８３％；微囊化肾上腺皮质细胞形态完整，肾上腺皮质细胞均匀地分布在ＡＰＡ微囊内，微囊表面光滑完整；两个培养组的皮质醇含量变化的差异无显著性（Ｐ＞０．０５），微囊对肾上腺皮质细胞的活性无显著影响。

人肾上腺皮质腺癌细胞株裸鼠移植瘤模型的建立及其意义

目的建立人肾上腺皮质腺癌移植瘤动物模型,为研究肾上腺皮质腺癌提供实验平台。方法选取4-6周龄裸鼠5只,将体外培养的人肾上腺皮质腺癌细胞株（SW-13）注射至其双侧腋窝皮下,建立人肾上腺皮质腺癌移植瘤模型。结果 6周后5只裸鼠双侧腋窝皮下均长出肿瘤,肿瘤胞膜完整,HE染色可见大量肿瘤细胞。结论成功建立人肾上腺皮质腺癌移植瘤动物模型,可以为肾上腺皮质腺癌的研究提供有效的动物模型平台。

鸡胚胎腺垂体促肾上腺皮质激素细胞的发生及其变化

为了研究鸡胚胎腺垂体促肾上腺皮质激素 (ACTH )细胞的发生及其在发育过程中的变化 ,分别在鸡胚胎发育的第 3.5～ 2 0 .5d采集鸡胚胎垂体 ,利用免疫组织化学方法对鸡胚胎腺垂体ACTH细胞的发生、数量和形态分布变化规律进行了研究。结果 ,鸡胚胎发育早期 (10 .5d)可观察到少量明显的ACTH细胞分布于腺垂体前叶 ,随着胚胎的发育 ,ACTH细胞的数量明显增多 ,分布于整个腺垂体前叶。早期ACTH细胞体积小、细胞浆少、细胞核较大、细胞界限不清 ,随着胚龄的增加 ,ACTH细胞体积增大、细胞浆增多、细胞浆浓染。结果证明 ,鸡胚胎腺垂体ACTH细胞发生于胚胎发育的中期 ,细胞的增殖和分化过程发生在胚胎发育的中期至出壳前 。

不同海拔对大鼠腺垂体促肾上腺皮质激素细胞影响的形态学研究

目的:观察Wistar大鼠急速进入不同海拔高度的腺垂体促肾上腺皮质激素(ACTH)细胞的形态结构变化,为探讨ACTH细胞在机体对低氧应激反应中的作用提供形态学依据。方法:将Wistar大鼠随机分为三组(海拔为1700、3100、4050m),在不同海拔高度生活12天后取垂体,采用免疫组化和图像分析软件进行分析,并利用透射电镜对细胞超微结构进行观察。结果:图像分析结果显示,ACTH细胞的阳性细胞面积比(R)和平均光密度(A)值随着海拔的升高均增大。统计学分析表明,4050m组ACTH细胞的阳性细胞R与1700m组相比差异有显著性意义(P<0.05),而其余各组之间无统计学意义(P>0.05)。A值则在各组间差异均无显著性意义(P>0.05)。随着海拔的升高,电镜下大鼠ACTH细胞分泌颗粒明显变大、变多,而且粗面内质网、线粒体等细胞器均有所增加。结论:ACTH是参与高原反应的重要生理和病理体液因子,并在短期高原低氧应激反应中有重要的调节作用。

肾上腺皮质嗜酸细胞腺瘤合并松果体瘤及空泡蝶鞍综合征一例

松果体瘤（pineal body numor）的发病率为0．4％～1％，肾上腺皮质一侧有两个腺瘤的发病率为1％，空泡蝶鞍综合征（ESs）的发病率约占尸检的5％～20％，三者并发于同一人临床罕见，现报告1例。