TBBPA-DHEE暴露对大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞的影响及机制

目的:研究四溴双酚A双(2-羟基乙基)醚[tetrabromobisphenol A bis(2-hydroxyetyl)ether,TBBPA-DHEE]对大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的影响及潜在的作用机制。方法:将PC12细胞随机分为5组,分别为空白对照组、溶剂对照组(0.05%二甲基亚砜)、TBBPA-DHEE低剂量组(5μg/mL)、中剂量组(20μg/mL)和高剂量组(35μg/mL),按分组对应处理48 h;通过MTT实验分析TBBPA-DHEE对PC12细胞的半数抑制浓度(IC_(50));采用试剂盒检测PC12细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛和活性氧含量,以及细胞培养液中NO和Ca^(2+)含量;采用ELISA法检测PC12胞内电压门控钙离子通道(voltage-gated calcium channel,VGCC)含量;采用蛋白质免疫印迹法测定钙离子信号通路相关蛋白表达。结果:TBBPA-DHEE(≥20μg/mL)暴露显著抑制PC12细胞活力,半数抑制浓度为33.4μg/mL;与对照组相比,5、20和35μg/mL TBBPA-DHEE组PC12细胞SOD活力、丙二醛及活性氧含量显著升高(P<0.05),细胞培养液中NO和Ca^(2+)含量显著增加(P<0.01或P<0.05),VGCC含量显著降低(P<0.01);5μg/mL TBBPA-DHEE组钙离子信号通路中p-CaMKⅡ、p-ERK1/2和p-CREB蛋白相对表达水平显著降低(P<0.01),20和35μg/mL TBBPA-DHEE组CaM、MKP-1、p-CaMKⅡ、p-ERK1/2和p-CREB蛋白相对表达水平显著降低(P<0.01)。结论:TBBPA-DHEE暴露可显著抑制PC12细胞活力并导致细胞氧化损伤,其可能通过下调VGCC表达,影响细胞钙离子稳态,进而影响钙离子信号通路相关蛋白的表达,从而产生神经毒性。

新生小牛肾上腺髓质嗜铬细胞的原代培养及其儿茶酚胺的分泌

目的：原代培养新生小牛肾上腺髓质嗜铬细胞,观察离体条件下肾上腺髓质细胞的生长和儿茶酚胺的分泌特性。方法：密度梯度离心和差速贴壁法分离和纯化肾上腺髓质细胞,ELISA检测培养上清液中肾上腺素和去甲肾上腺素的浓度变化。结果：肾上腺髓质嗜铬细胞生长良好。4～6周起细胞出现终极分化。培养液中儿茶酚胺浓度在第2～8 d内稳定,第10 d开始明显下降。结论：应用单细胞培养法可以成功建立原代肾上腺髓质嗜铬细胞,并可在原代培养前8d内进行细胞行为学的研究。

家族遗传性肾上腺髓质嗜铬细胞瘤并发高血压脑出血1例报告

肾上腺嗜铬细胞瘤引起的高血压脑出血临床不多见。高血压性脑出血是神经科常见的急症之一,临床上以高血压动脉硬化所引起的最为常见约占48%。高血压80%~90%是因原发性高血压所致,其余10%~20%由症状性高血压引起。

^(131)I-MIBG核素显像在肾上腺髓质嗜铬细胞瘤诊断中的初步应用

目的探讨^(131)I-MIBG肾上腺髓质显像在嗜铬细胞瘤诊断中的应用,同时与CT、B超及尿VMA测定结果进行比较。方法病例选择经手术、病理确诊的3例嗜铬细胞瘤患者及经临床确诊的2例高血压患者、4例肾上腺肿大患者及1例肾上腺皮质瘤患者。受检者静脉缓注^(131)I-MIBG111MBg,注射后24h、48h使用SPECT进行全身和局部显像。结果3例嗜铬细胞瘤患者可见患侧有异常放射性浓聚区,心肌、肝脏不显影。其他7例非嗜铬细胞瘤患者肾上腺不显影,但有6例心肌、肝脏显影。131I-MIBG显像阳性率为100%,CT检查阳性率为66.7%,B超检查3例患者只能定位,不能定性,VMA检测阳性率为100%。结论131I-MIBG显像对嗜铬细胞瘤的诊断优于CT、B超和尿VMA测定。

大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞钙通道亚型研究

目的 研究大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞钙离子通道的亚型。方法 利用全细胞膜片钳技术 ,在维持电压 - 70m V的条件下 ,给予细胞 4 0 ms,从 - 6 0 m V到 +6 0 m V的序列除级方波 ,阶跃 10 m V,引导出钙通道电流 (ICa) ,观察不同类型钙通道阻滞剂对 ICa的影响。结果 用 10 μmol/ L 硝苯地平 (NIF)、 1μm ol/ Lω- conotoxin GVIA和 10 0 nmol/Lω- agatoxin IVA灌洗细胞 10 m in,对 ICa有明显的抑制作用 ,抑制率分别为 (44 .6± 2 .0 ) %、 (31.3± 2 .0 ) %和 (2 0 .6± 2 .0 ) %。结论 在大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞中 ,L 型钙通道是主要的 ,同时也存在 N型和 P/

应急大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞胞吐特性的超微结构研究

运用透射电镜对制动应急大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞内分泌颗粒的胞吐特性进行研究 ,结果显示 :它具有三种不同的胞吐方式 :单颗粒胞吐、多颗粒连续胞吐及颗粒内容物通过暂时性融合小孔进行胞吐。用电镜细胞立体形态计量法对正常大鼠肾上腺素细胞内两种不同形态颗粒进行测量 ,结果显示 :肾上腺素细胞中致密圆形颗粒的数目较内容浅淡的颗粒多 (P <0 0 1) ;大鼠制动 8h时 ,以致密圆形颗粒的胞吐为主 ,制动 2 4h时 ,则两种颗粒均发生胞吐。以上结果提示 :这两种不同形态的颗粒可能是大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞中同一种分泌颗粒的不同发育阶段。

哮喘大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞表型转化与神经生长因子表达水平初探

目的观察支气管哮喘状态下大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞(AMCC)形态和功能的改变以及神经生长因子(NGF)在肾上腺髓质嗜铬细胞中的表达,探讨肾上腺髓质嗜铬细胞与支气管哮喘的关系。方法2005年10月至2006年3月,在中南大学湘雅医院呼吸内科将雄性SD大鼠16只,随机分为对照组和哮喘组,每组8只。哮喘组以鸡卵清蛋白(OVA)致敏和激发哮喘,对照组以生理盐水代替OVA进行致敏和激发。光镜和电镜下观察2组大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞的组织结构和超微结构改变,免疫组织化学结合显微图像分析观察肾上腺髓质嗜铬细胞中NGF的表达变化,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中肾上腺素和去甲肾上腺素的变化。结果HE染色光镜下可见哮喘组大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞不同程度的空泡变性样改变,脂质增多,少数可见纤维样物质伸向皮质。电镜下哮喘组大鼠髓质嗜铬细胞线粒体丰富,脂质增多,嗜铬颗粒浓度降低,并且部分出现核膜皱缩现象。与对照组相比,哮喘大鼠NGF免疫阳性反应在肾上腺髓质嗜铬细胞明显上调(P<0.05),ELISA示哮喘组大鼠肾上腺素水平明显低于对照组(P<0.05),去甲肾上腺素水平没有明显变化(P>0.05)。结论支气管哮喘时肾上腺髓质嗜铬细胞NGF的表达增高,增高的NGF可能使肾上腺髓质嗜铬细胞发生表型的转化导致肾上腺素合成与释放不足而参与哮喘的发生、发展。

妊娠期支气管哮喘诱导子代大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞表型转变

目前研究结果表明，支气管哮喘（简称哮喘）患者可能存在肾上腺素释放功能障碍，导致体内肾上腺素水平过低，造成难以有效缓解哮喘所致的支气管痉挛。这一病理生理现象的出现可能与下列机制存在密切关联：哮喘患者体内神经生长因子（nerve growth factor，NGF）表达过高，诱导肾上腺髓质嗜铬细胞发生神经元转变倾向，进而损伤嗜铬细胞的内分泌功能，使肾上腺素分泌减少。本研究中采用卵清白蛋白（OVA）致敏和激发的方法建立妊娠期哮喘大鼠模型，并用NGF及其抗体对模型进行干预，观察子代大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞表型的转变情况。

丝裂原活化蛋白激酶信号通路介导神经生长因子启动肾上腺髓质嗜铬细胞冗余性

神经生长因子（NGF）是目前发现的参与支气管哮喘（简称哮喘）气道神经源性炎症的关键,对神经元的分化起重要作用.

肾上腺髓质外嗜铬细胞瘤有关问题的商榷(附肾下极嗜铬细胞瘤尸检1例)

嗜铬细胞瘤来自肾上腺和肾上腺外嗜铬组织,含嗜铬颗粒.能分泌去甲肾上腺素和肾上腺素,因而有嗜铬性。因本病临床上比较少见,部分病例发病突然,呈间歇性,若肿瘤发生在少见部位,则容易误诊,引起医疗纠纷,故提出探讨,以引起各方面的重视。该病临床以阵发性高血压为主要表现,病理上发生肾上腺髓质外嗜铬细胞瘤又称嗜铬性副神经节瘤。1

巨大肾上腺嗜铬细胞瘤患者一例的围手术护理体会

嗜铬细胞瘤（pheochmmocytoma，PHEO）是起源于肾上腺髓质嗜铬细胞的肿瘤，合成、存储和分解代谢儿茶酚胺（CA），并因后者的释放引起症状。本例PHEO患者由于肿瘤体积大，采用开放手术切除肿瘤及同侧肾上腺，术后经过精心的治疗与护理。取得满意疗效。现将护理体会总结报告如下。

神经生长因子启动肾上腺髓质细胞功能冗余性致肾上腺素释放障碍的研究

目的探讨神经生长因子(NGF)等对原代培养的肾上腺髓质嗜铬细胞生物行为学影响的发生机制。方法采用单细胞消化法原代培养肾上腺髓质细胞,密度梯度离心和差速贴壁法分离和纯化肾上腺髓质细胞。相差显微镜、电镜观察外源性NGF、P物质(SP)作用下肾上腺髓质嗜铬细胞形态和超微结构的改变,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测培养上清液中肾上腺素和去甲肾上腺素浓度的变化。结果NGF干预2 d后,相差显微镜下可见肾上腺髓质细胞膜表面渐渐长出长丝状突起。电镜下NGF干预后可见肾上腺髓质嗜铬细胞表面丰富的杵状和绒毛状突起,近细胞膜处可见小囊泡形成,细胞浆内线粒体丰富,结构较模糊,部分嵴丢失。ELISA检测发现经NGF干预后培养上清液中肾上腺素浓度较正常组明显降低(P<0.05),去甲肾上腺素浓度没有明显改变。SP干预后肾上腺素和去甲肾上腺素浓度没有明显改变。结论NGF通过启动肾上腺髓质细胞功能冗余性使其表型和功能发生改变致肾上腺素合成和释放障碍。

多发副神经节细胞瘤1例报告并文献复习

一般认为,起源于肾上腺髓质嗜铬细胞的神经内分泌肿瘤称为嗜铬细胞瘤（phaeochromocytoma,PCC）,而起源于肾上腺髓质以外的嗜铬细胞肿瘤统称为副神经节细胞瘤（paraganglioma,PGL）,二者合成为PPGL[1].WHO将其起源的肿瘤归为神经内分泌肿瘤,而根据功能和嗜铬性的不同,PPGL可分为两类,一类为与交感系统密切相关、具有交感特性、嗜铬染色阳性者（分泌儿茶酚胺类递质）,另一类为与副交感系统关系密切、具有副交感特性、嗜铬染色阴性者（不分泌儿茶酚胺类递质）[2,3].副神经节细胞瘤可起源于全身多处,其中,胸腹部嗜铬细胞起源的副神经节细胞瘤,常为儿茶酚胺分泌型,头颈部副神经节细胞瘤常起源于胚胎神经嵴组织的特殊神经化学感受器,如颈动脉体部、颈静脉、鼓室部和迷走神经副神经节,常为儿茶酚胺不分泌型,位于颈静脉孔区的副神经节细胞瘤,又称为颈静脉球瘤、化学感受器瘤、血管球瘤等[2,4].

嗜铬细胞瘤／副神经节瘤的分子遗传学研究进展

嗜铬细胞瘤（pheochromocytoma，PHEO）／副神经节瘤（paraganglioma，PGL）是一种起源于神经嵴细胞的肿瘤，常分泌儿茶酚胺等物质，临床较少见。2004年WHO内分泌肿瘤分类定义PHEO为来源于肾上腺髓质嗜铬细胞的肿瘤，恶性约占10％；肾上腺外或异位嗜铬细胞瘤统称为PGL，约占PHEO／PGL的9％～24％，30％～40％的PGL为恶性。

烟碱型乙酰胆碱受体变化对急性支气管哮喘小鼠肾上腺素分泌的影响

机体受到刺激时，支配肾上腺髓质的交感神经兴奋，释放乙酰胆碱，乙酰胆碱激活肾上腺髓质嗜铬细胞（adrenal medullary chromafiin cells，AMCCs）的烟碱型乙酰胆碱受体（nicotinic acetylcholine receptors，nAChRs），进而活化钙通道，使细胞内钙离子浓度升高触发儿茶酚胺（肾上腺素、去甲肾上腺素等）释放。与正常小鼠相比，支气管哮喘（哮喘）小鼠，

滋阴方与温阳方对鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:探索滋阴方与温阳方(六味地黄丸与肾气丸)对鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法:以鱼藤酮诱导PC12肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞损伤为模型,观察滋阴方与温阳方(六味地黄丸与肾气丸)对细胞活力、细胞形态、活性氧的产生、凋亡率、ATP的产生以及酪氨酸羟化酶产生的影响作用。结果:滋阴方与温阳方可明显保护鱼藤酮64μg·L-1诱导的PC12细胞的损伤。滋阴方与温阳方可在质量浓度为0. 02 g·m L-1时明显保护鱼藤酮导致的细胞活力的降低,分别使细胞活力由鱼藤酮单独作用时的0. 65±0. 04增加至0. 86±0. 05(P <0. 05)与0. 89±0. 04(P <0. 05);保护鱼藤酮导致的细胞形态的改变,使缩短的突起长度恢复,并减少细胞的收缩变圆程度。滋阴方与温阳方可在质量浓度为0. 01 g·m L-1和0. 02 g·m L-1时,减少鱼藤酮导致的细胞活性氧的产生,使活性氧由鱼藤酮单独作用时的136. 4±9. 3分别减少至联合滋阴方时的(106. 5±7. 3)(P <0. 05)与(63. 6±8. 2)(P <0. 05)和联合温阳方时的98. 2±7. 4(P <0. 05)与58. 2±6. 5(P <0. 05);减少细胞凋亡,使凋亡率由鱼藤酮单独作用时的15. 2%±0. 6%分别减少至联合滋阴方时的11. 5%±0. 5%(P <0. 05)与7. 3%±0. 6%(P <0. 05)和联合温阳方时的10. 3%±0. 4%(P <0. 05)和6. 5%±0. 4%(P <0. 05);增加鱼藤酮导致的细胞内ATP含量的减少(减少至空白对照组的60. 6%±0. 6%),滋阴方使ATP含量增加至空白对照组的85. 4%±5. 7%(P <0. 05)和92. 3%±5. 6%(P <0. 05),而温阳方分别使细胞内ATP含量增加至空白对照组的86. 3%±6. 7%(P <0. 05)和95. 2%±5. 8%(P <0. 05)。另外,滋阴方与温阳方在质量浓度0. 02g·m L-1处理时,保护鱼藤酮导致的细胞内酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)荧光强度减少(减少至空白对照组的66. 6%±7. 6%),分别使细胞内TH荧光强度增加至空白对照组的87. 2%±7. 8%(P <0. 05)和89. 3%±6. 9%(P <0. 05)。结论:滋阴方与温阳方(六味地黄丸与肾气丸)可保护鱼藤酮诱导的PC12细胞的损伤;滋阴方与温阳方的保护作用无明显差异。