用微囊牛肾上腺髓质细胞移植治疗恶性肿瘤疼痛研究

用胶原酶消化法分离牛肾上腺髓质细胞,用海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)法包埋牛肾上腺髓质细胞,将微囊牛肾上腺髓质细胞植入恶性肿瘤病人的珠网膜下腔,移植后不使用免疫抑制剂。结果显示在30例恶性肿瘤患者中,显效率为67％(20例),有效率为27％(8例),无效率为6％(2例),镇痛作用维持时间长达150天,除个别病人发烧和腰痛外未发现其它明显副作用。

开窍中药对牛肾上腺髓质细胞儿茶酚胺分泌的影响

目的探讨开窍中药冰片、牛黄、麝香、石菖蒲及苏合香对牛肾上腺髓质细胞儿茶酚胺分泌的影响。方法体外培养牛肾上腺髓质细胞,HPLC-ECD检测其分泌儿茶酚胺的含量,分别考察5种开窍药对乙酰胆碱、藜芦定碱和56 mmol·L-1高钾溶液诱导的儿茶酚胺分泌的影响。结果5种开窍中药均显著抑制乙酰胆碱、藜芦定碱诱导的儿茶酚胺分泌(P<0.05或P<0.01)而对高钾溶液诱导的儿茶酚胺分泌均无显著影响;对乙酰胆碱诱导的儿茶酚胺分泌的抑制作用随浓度升高而增强(P<0.05或P<0.01)。结论开窍中药具有抑制交感活性作用,且通过乙酰胆碱受体途径和电压依赖型钠离子通道发挥作用。

乙酰胆碱和A23187对离体大鼠肾上腺髓质细胞肾上腺素分泌的作用

通过胆碱能激动剂乙酰胆碱及离子诱导剂A2 3187(以下简称激动剂 )作用于分离的肾上腺髓质细胞 ,以引起离体细胞的刺激 分泌耦联过程。运用细胞立体形态计量法计算分泌过程中的嗜铬颗粒数目的变化 ,运用电镜X射线显微分析法测量分泌过程中嗜铬颗粒内钙含量的变化 ,并运用高压液相色谱分析法测定离体细胞在激动剂作用后的肾上腺素分泌情况。结果发现 ,分离的肾上腺髓质细胞嗜铬颗粒内钙含量在激动剂作用 10min时有明显下降 ,颗粒数目在激动剂作用过程中呈缓慢下降趋势 ,而细胞悬液中的肾上腺素含量在激动剂作用 2 0min以后有明显的升高。激动剂作用引起的离体肾上腺髓质细胞分泌时颗粒内钙含量的下降早于颗粒数目减少或肾上腺素升高 ,提示颗粒释放的Ca2

大鼠实验性胃溃疡自愈期肾上腺髓质细胞超微结构的变化

目的 :探讨大鼠实验性胃溃疡自愈期间肾上腺髓质细胞超微结构的变化。方法 :采用透射电镜观察了肾上腺髓质嗜铬细胞超微结构的变化。结果 :溃疡组术后 4d、6d髓质嗜铬细胞中NA细胞增多 ,细胞内有较多颗粒 ,细胞中可见扩张的内质网和胞质缺损区。结论 :肾上腺髓质细胞可能直接或间接参与了大鼠实验性胃溃疡修复的调解。

荷叶生物碱对牛肾上腺髓质细胞儿茶酚胺分泌的影响

目的探讨荷叶生物碱对牛肾上腺髓质细胞儿茶酚胺分泌的影响。方法采用体外培养牛肾上腺髓质细胞,通过HPLC-ECD、FlexstationⅢ荧光法分别检测细胞培养液中儿茶酚胺的含量、细胞内钙含量,考察荷叶生物碱对不同刺激剂诱导的儿茶酚胺分泌的影响,以及在不同刺激剂下荷叶生物碱浓度变化对儿茶酚胺的分泌和钙流的影响。结果荷叶生物碱能明显抑制乙酰胆碱、藜芦定碱、高钾诱导的儿茶酚胺分泌(P<0.05或P<0.01),呈现剂量依赖性;且能抑制乙酰胆碱诱导的细胞外钙离子内流。结论荷叶生物碱通过烟碱型乙酰胆碱受体、电压依赖型钠离子通道、钙离子通道发挥抑制交感活性作用。

人胎肾上腺髓质细胞原代分离培养

本文介绍了一种较简捷、快速的人胎肾上腺髓质细胞原代分离培养的方法。分离出的人胎肾上腺髓质经胶原酶消化后,用Percoll液密度梯度离心可获得纯度为75～85%的肾上腺髓质细胞,将髓质细胞接种到铺有胶原的培养板上,培养2-7天后髓质细胞胞体增大,长出突起,胞浆含有颗粒,用特异性儿茶酚胺诱发萤光技术进一步确定培养的肾上腺髓质细胞的性质,用HPLC测定培养液中单胺类物质的含量。对培养过程中的某些技巧问题进行了讨论。

海洛因戒断及复吸对大鼠肾上腺髓质细胞β-内啡肽和促肾上腺皮质激素表达及血清皮质醇的影响

目的探讨海洛因戒断、脱毒及复吸对大鼠肾上腺髓质细胞β-内啡肽(β-EP)和促肾上腺皮质激素(ACTH)表达及血清皮质醇(COR)的影响。方法成年雄性SD大鼠63只,随机分为实验组(21只)、盐水对照组(21只)和正常对照组(21只),实验组又分为戒断组、脱毒组和复吸组,采用免疫组织化学、图像分析法及放射免疫测定法进行研究。结果与正常及盐水对照组比较,海洛因戒断组β-EP免疫反应(β-EP-IR)细胞染色变浅,平均灰度值升高(P<0.05);经美沙酮脱毒治疗,β-EP-IR细胞染色较正常及盐水对照组加深,平均灰度值降低(P<0.05);海洛因复吸组β-EP-IR细胞表达再次减弱,但与正常及盐水组比较,平均灰度值差异无显著性。与正常及盐水对照组比较,实验各组大鼠肾上腺髓质ACTH免疫反应(ACTH-IR)细胞染色均变浅,平均灰度值增高,有显著差异(P<0.05)。放射免疫测定结果表明,实验各组大鼠血清COR均显著高于正常对照组(P<0.05)。结论海洛因戒断、脱毒、复吸影响了大鼠肾上腺髓质细胞表达β-EP、ACTH以及血清COR的分泌。

神经元特异性烯醇酶和胺共存于肾上腺髓质细胞嗜铬颗粒的新发现

神经元特异性烯醇酶(NSE)是神经元和神经内分泌细胞的特异性标志酶,也是分化成熟的标志物。本实验应用HRP-SPA免疫细胞化学法,观察了生后发育中大鼠和成年猫肾上腺髓质细胞内的NSE和多巴胺-β-羟化酶(DβH)的超微结构定位。

TBBPA-DHEE暴露对大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞的影响及机制

目的:研究四溴双酚A双(2-羟基乙基)醚[tetrabromobisphenol A bis(2-hydroxyetyl)ether,TBBPA-DHEE]对大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的影响及潜在的作用机制。方法:将PC12细胞随机分为5组,分别为空白对照组、溶剂对照组(0.05%二甲基亚砜)、TBBPA-DHEE低剂量组(5μg/mL)、中剂量组(20μg/mL)和高剂量组(35μg/mL),按分组对应处理48 h;通过MTT实验分析TBBPA-DHEE对PC12细胞的半数抑制浓度(IC_(50));采用试剂盒检测PC12细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛和活性氧含量,以及细胞培养液中NO和Ca^(2+)含量;采用ELISA法检测PC12胞内电压门控钙离子通道(voltage-gated calcium channel,VGCC)含量;采用蛋白质免疫印迹法测定钙离子信号通路相关蛋白表达。结果:TBBPA-DHEE(≥20μg/mL)暴露显著抑制PC12细胞活力,半数抑制浓度为33.4μg/mL;与对照组相比,5、20和35μg/mL TBBPA-DHEE组PC12细胞SOD活力、丙二醛及活性氧含量显著升高(P<0.05),细胞培养液中NO和Ca^(2+)含量显著增加(P<0.01或P<0.05),VGCC含量显著降低(P<0.01);5μg/mL TBBPA-DHEE组钙离子信号通路中p-CaMKⅡ、p-ERK1/2和p-CREB蛋白相对表达水平显著降低(P<0.01),20和35μg/mL TBBPA-DHEE组CaM、MKP-1、p-CaMKⅡ、p-ERK1/2和p-CREB蛋白相对表达水平显著降低(P<0.01)。结论:TBBPA-DHEE暴露可显著抑制PC12细胞活力并导致细胞氧化损伤,其可能通过下调VGCC表达,影响细胞钙离子稳态,进而影响钙离子信号通路相关蛋白的表达,从而产生神经毒性。

应急大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞颗粒数目与其钙含量的关系

采用电镜细胞立体形态计量法及电镜X射线显微定量分析术 ,对制动应急大鼠的肾上腺髓质细胞内嗜铬颗粒数密度和颗粒内Ca浓度变化进行测量。结果显示 ,两者在制动过程中均呈进行性下降 ,但颗粒内钙浓度的下降快于颗粒数目的减少 (P <0 0 1)。该结果支持颗粒内钙释放入胞质 ,参与胞质内游离钙浓度的升高 ,进而激发颗粒胞吐的假设 。

经冻存的APA微囊牛肾上腺髓质细胞功能研究

目的观察海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(alginate-polylysine-alginate,APA)微囊牛肾上腺髓质细胞经液氮冻存前后的微囊形态、细胞活性和儿茶酚胺分泌功能变化。方法APA微囊牛肾上腺髓质细胞(牛嗜铬细胞,bevine chromaffin cell,BCC)的冻存以DMSO为保护剂,冻存采取循序缓慢降温,复苏采取快速复温。通过微囊形态、细胞活性和儿茶酚胺分泌量检测观察细胞功能变化。结果与冻存前相比,冻存复苏后的APA微囊BCC形态及细胞活性无明显变化,儿茶酚胺分泌量约为冻存前的80%。结论经冻存复苏的APA微囊BCC仍然保持了较好的形态、细胞活性和儿茶酚胺分泌功能。

新生小牛肾上腺髓质嗜铬细胞的原代培养及其儿茶酚胺的分泌

目的：原代培养新生小牛肾上腺髓质嗜铬细胞,观察离体条件下肾上腺髓质细胞的生长和儿茶酚胺的分泌特性。方法：密度梯度离心和差速贴壁法分离和纯化肾上腺髓质细胞,ELISA检测培养上清液中肾上腺素和去甲肾上腺素的浓度变化。结果：肾上腺髓质嗜铬细胞生长良好。4～6周起细胞出现终极分化。培养液中儿茶酚胺浓度在第2～8 d内稳定,第10 d开始明显下降。结论：应用单细胞培养法可以成功建立原代肾上腺髓质嗜铬细胞,并可在原代培养前8d内进行细胞行为学的研究。

家族遗传性肾上腺髓质嗜铬细胞瘤并发高血压脑出血1例报告

肾上腺嗜铬细胞瘤引起的高血压脑出血临床不多见。高血压性脑出血是神经科常见的急症之一,临床上以高血压动脉硬化所引起的最为常见约占48%。高血压80%~90%是因原发性高血压所致,其余10%~20%由症状性高血压引起。

^(131)I-MIBG核素显像在肾上腺髓质嗜铬细胞瘤诊断中的初步应用

目的探讨^(131)I-MIBG肾上腺髓质显像在嗜铬细胞瘤诊断中的应用,同时与CT、B超及尿VMA测定结果进行比较。方法病例选择经手术、病理确诊的3例嗜铬细胞瘤患者及经临床确诊的2例高血压患者、4例肾上腺肿大患者及1例肾上腺皮质瘤患者。受检者静脉缓注^(131)I-MIBG111MBg,注射后24h、48h使用SPECT进行全身和局部显像。结果3例嗜铬细胞瘤患者可见患侧有异常放射性浓聚区,心肌、肝脏不显影。其他7例非嗜铬细胞瘤患者肾上腺不显影,但有6例心肌、肝脏显影。131I-MIBG显像阳性率为100%,CT检查阳性率为66.7%,B超检查3例患者只能定位,不能定性,VMA检测阳性率为100%。结论131I-MIBG显像对嗜铬细胞瘤的诊断优于CT、B超和尿VMA测定。

神经生长因子启动肾上腺髓质细胞功能冗余性致肾上腺素释放障碍的研究

目的探讨神经生长因子(NGF)等对原代培养的肾上腺髓质嗜铬细胞生物行为学影响的发生机制。方法采用单细胞消化法原代培养肾上腺髓质细胞,密度梯度离心和差速贴壁法分离和纯化肾上腺髓质细胞。相差显微镜、电镜观察外源性NGF、P物质(SP)作用下肾上腺髓质嗜铬细胞形态和超微结构的改变,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测培养上清液中肾上腺素和去甲肾上腺素浓度的变化。结果NGF干预2 d后,相差显微镜下可见肾上腺髓质细胞膜表面渐渐长出长丝状突起。电镜下NGF干预后可见肾上腺髓质嗜铬细胞表面丰富的杵状和绒毛状突起,近细胞膜处可见小囊泡形成,细胞浆内线粒体丰富,结构较模糊,部分嵴丢失。ELISA检测发现经NGF干预后培养上清液中肾上腺素浓度较正常组明显降低(P<0.05),去甲肾上腺素浓度没有明显改变。SP干预后肾上腺素和去甲肾上腺素浓度没有明显改变。结论NGF通过启动肾上腺髓质细胞功能冗余性使其表型和功能发生改变致肾上腺素合成和释放障碍。

大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞钙通道亚型研究

目的 研究大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞钙离子通道的亚型。方法 利用全细胞膜片钳技术 ,在维持电压 - 70m V的条件下 ,给予细胞 4 0 ms,从 - 6 0 m V到 +6 0 m V的序列除级方波 ,阶跃 10 m V,引导出钙通道电流 (ICa) ,观察不同类型钙通道阻滞剂对 ICa的影响。结果 用 10 μmol/ L 硝苯地平 (NIF)、 1μm ol/ Lω- conotoxin GVIA和 10 0 nmol/Lω- agatoxin IVA灌洗细胞 10 m in,对 ICa有明显的抑制作用 ,抑制率分别为 (44 .6± 2 .0 ) %、 (31.3± 2 .0 ) %和 (2 0 .6± 2 .0 ) %。结论 在大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞中 ,L 型钙通道是主要的 ,同时也存在 N型和 P/

肾上腺髓质外嗜铬细胞瘤有关问题的商榷(附肾下极嗜铬细胞瘤尸检1例)

嗜铬细胞瘤来自肾上腺和肾上腺外嗜铬组织,含嗜铬颗粒.能分泌去甲肾上腺素和肾上腺素,因而有嗜铬性。因本病临床上比较少见,部分病例发病突然,呈间歇性,若肿瘤发生在少见部位,则容易误诊,引起医疗纠纷,故提出探讨,以引起各方面的重视。该病临床以阵发性高血压为主要表现,病理上发生肾上腺髓质外嗜铬细胞瘤又称嗜铬性副神经节瘤。1

大鼠肾上腺髓质嗜铬颗粒数目和钙含量的关系

大鼠肾上腺髓质嗜铬颗粒数目和钙含量的关系刘懿凌诒萍俞彰吴正泉钟慈声（上海医科大学生物物理学教研室，上海２０００３２）肾上腺髓质细胞作为一种内分泌细胞，其胞质内的嗜铬颗粒中含有大量儿茶酚胺类激素，当发生刺激－分泌耦联时，这些颗粒以胞吐的形式向细胞外分泌...

人参甾体皂苷代谢物对肾上腺髓质细胞分泌儿茶酚胺的影响

体外研究三醇系人参皂苜可以抑制肾上腺髓质细胞乙酰胆碱所致的儿茶酚胺(CA)释放，这种抑制作用是拮抗烟碱性乙酰胆碱受体，抑制Na^+内流的结果。该结果与人参的抗应激作用有关。但是人参皂苷元结合的糖部分在消化道被水解、吸收。本次探讨了二醇系代谢物(M1、M2、M3、M5、M12)与三醇系代谢物(M4、M11)对牛肾上腺髓质细胞分泌CA的影响。