中药制剂肾八味胶囊的安慰剂制备及评价研究

目的:建立中药制剂肾八味胶囊安慰剂的制备方法,并客观评价其模拟效果,为中药临床试验中安慰剂的研制提供参考。方法:以肾八味胶囊安慰剂地研制为例,采用盲法,从外观、色泽、气味等多个方面对其进行模拟效果评价打分。结果:肾八味胶囊安慰剂与原药粉末的外观、色泽、气味基本一致,模拟临床试验表明此安慰剂不易破盲。结论:该安慰剂能够满足肾八味胶囊临床试验课题的研究需要。

肾八味胶囊中大黄的测定

目的：对肾八味胶囊中的大黄进行鉴别和含量测定。方法：采用薄层色谱（TLC）法对处方中的大黄进行鉴别，并采用高效液相色谱（HPLC）法测定其含量。结果：TLC鉴别大黄素、大黄酚斑点清晰。HPLC定量分析中，大黄素的线性范围为1．1～22．0mg·L^-1，r=0．9992；平均回收率为96．7％，RSD为2．0％（n=5）。大黄酚的线性范围1．2～24．0mg·L^-1，r=0．9997；平均回收率为101．6%，RSD为1．9％（n=5）。结论：薄层鉴别大黄素、大黄酚，方法专属、斑点清晰；HPLC法测定其含量，方法准确，重复性好。

HPLC-ELSD法测定肾八味胶囊中黄芪甲苷的含量

目的:建立HPLC-ELSD法测定肾八味胶囊中黄芪甲苷的含量。方法:色谱柱:Hypersil SB-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);柱温:室温;流动相:乙腈:水(32:68);流速:1 ml·min^(-1);蒸发光散射检测器参数:漂移管温度:105℃;雾化温度:50℃;载气:氮气(0.99999%),流量:2.0 L·min^(-1)。结果:黄芪甲苷的线性范围为0.25～8.00μg,r=0.999 6;平均回收率为98.3%,RSD为2.0%(n=6)。结论:本方法简便,结果准确可靠,可作为控制肾八味胶囊质量的方法。

肾八味胶囊的薄层定性鉴别

慢性肾炎、原发性肾病综合征多易复发，预后在很大程度上取决于患者发病的易感因素，若控制不佳，常会发作且影响肾功能。我院与上海方心科技研究所在中医古方的基础上，结合临床经验，研发了肾八味胶囊，它由黄芪、三七、车前子、人参皂苷等八味药组成，具有健脾益气、活血化瘀、清热利水的功效。为了控制该产品的质量，保证临床用药效果，本文根据处方中药材的理化性质，采用薄层色谱法对制剂中的黄芪、三七、及大黄进行了定性鉴别。

HPLC法测定肾八味胶囊中黄酮类化合物含量

目的:建立测定肾八味胶囊中黄酮类化合物含量的方法。方法:采用HPLC法,样品用双蒸馏水分散后,超声提取、离心,用Inertsil ODS-3色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离化合物,流动相为乙腈与水,梯度洗脱,流量为1 mL·min-1,柱温为室温,检测波长为215 nm,外标法定量。结果:肾八味胶囊用加样回收法与对照品比较,检出黄酮类化合物5个,芦丁、野黄芩苷、金丝桃苷、黄芩素、汉黄芩素;样品中多数峰可以达到良好分离;5个测定化合物在各自的浓度范围内均有良好的线性(r>0.999),方法回收率分别为芦丁(101.31±2.14)%、野黄芩苷(102.19±1.5)%、金丝桃苷(100.48±2.97)%、黄芩素(100.47±2.78)%、汉黄芩素(100.75±2.54)%。结论:本方法可用于肾八味胶囊中黄酮类化合物含量测定。

用UHPLC-MS/MS法同时测定肾八味胶囊中6种皂苷的含量

目的：建立超高效液相联用质谱法（UHPLC—MS／MS）同时测定肾八味胶囊中6种皂苷（人参皂苷Rb1、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷F1、人参皂苷F2、原人参三醇）的含量。方法：采用Zorbax SB-C18色谱柱（2．1mm×50mm，1．8μm），以0．1％甲酸水溶液（A相）-0．1％甲酸乙腈溶液（B相）为流动相梯度洗脱（0～3．2min，20％～35％B相；3．2～3．4min，25％～45％B相；3．4～7．0min，45％～55％B相），流速为0．3ml／min，柱温20℃，进样量5μl，采用电喷雾离子源（ESI）正离子模式下检测。结果：人参皂苷Rb1、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷F1、人参皂苷F2和原人参三醇在相应的线性范围内线性关系良好（r≥0．9991），日内和日间RSD为0．54％～2．92％，平均加样回收率为97．06％～99．76％，重复性和稳定性良好。结论：本研究建立的UHPLC-MS／MS法能够快速、简便、灵敏地测定肾八味胶囊中6种皂苷的含量。主成分分析（PCA）和偏最小二乘判别分析（PLS-DA）可对有效期不同的样品进行区分，由此可为肾八味胶囊的质量控制提供科学依据。

肾八味胶囊的薄层色谱鉴别

目的:建立肾八味胶囊的薄层鉴别方法。方法:采用薄层色谱法(Thin-layer chromatography,TLC)鉴别肾八味胶囊中黄芪、益母草、大黄和半支莲。结果:斑点显色清晰,阴性对照无干扰。结论:本方法专属性强,可作为肾八味胶囊的定性鉴别方法。

HPLC法测定肾八味胶囊中盐酸水苏碱含量

目的:建立HPLC法测定肾八味胶囊中盐酸水苏碱的含量。方法:色谱柱:氨基柱(250 mm×4.6 mm,5μm);柱温:室温;流动相:乙腈:10 mmol·L^(-1)KH_2PO_4水溶液(用磷酸调节pH 3.0)(20:80);流速:1 ml·min^(-1);检测波长:203 nm。结果:盐酸水苏碱的线性范围为0.05～2.50 mg·ml^(-1),r=0.999 7;平均回收率95.1%,RSD 1.8%(n=6)。结论:本方法简便,结果准确可靠,可用于控制肾八味胶囊中盐酸水苏碱的含量。

肾八味胶囊对肾病综合征模型小鼠血清IL-6的影响

目的:观察肾八味胶囊对肾病综合征(NS)模型小鼠24h尿蛋白和血清白介素6(IL-6)的影响,以探讨该方对NS的免疫治疗作用机制。方法:给小鼠一次性尾静脉注射嘌呤霉素氨基核苷(Puromycin aminonucleoside,PA)复制NS模型,40只小鼠随机分为模型组、肾八味低剂量组、肾八味高剂量组、至灵胶囊组、生理盐水组,采用BCA法检测各组小鼠24h尿蛋白,采用酶联免疫吸附法检测小鼠血清IL-6的含量。结果:模型组小鼠24h尿蛋白和血清IL-6均较生理盐水组显著升高,中药灌服后能显著降低NS小鼠24h尿蛋白和血清IL-6的含量。结论:降低血清IL-6的含量可能是肾八味胶囊治疗NS的作用机制之一。

肾八味复方胶囊对大鼠多柔比星肾病综合征模型的影响

目的:探讨肾八味复方胶囊对肾病综合征大鼠的治疗作用。方法:将90只SD雄性大鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、阳性药阿魏酸哌嗪片组(200 mg/kg))和肾八味复方胶囊高、中、低(600、300、150 mg/kg)剂量组。以多柔比星诱导大鼠肾病综合征模型。造模后24 h开始给药,疗程为3周。以一般状况、肾脏脏器系数、尿蛋白、微量游离血红蛋白、血肌酐、尿素氮及三酰甘油等为观察指标,观察肾八味复方胶囊对肾病综合征模型大鼠的治疗作用。经肾组织光镜检查,观察肾脏组织结构的变化并进行病理评分。结果:注射多柔比星后,模型组大鼠尿蛋白、微量游离血红蛋白、血肌酐、尿素氮及三酰甘油水平均较正常组显著升高,提示肾病综合征模型制备成功。病理检查结果显示,肾小管上皮细胞出现水肿及空泡样病变。给予肾八味复方胶囊治疗3周后,大鼠体重和尿量明显增加,血肌酐、尿素氮、三酰甘油、尿液量、尿蛋白、微量游离血红蛋白水平及肾脏脏器系数同模型组相比均有明显好转(P<0.05)。病理组织学检查则显示,肾八味复方胶囊可有效减轻肾小管水肿及空泡样病变,使肾脏病变程度有所减轻,与模型组和阳性药阿魏酸哌嗪片组相比,肾八味复方胶囊高剂量组病理评分显著下降(P<0.05)。结论:肾八味复方胶囊对肾病综合征大鼠有一定的治疗作用。