血必净注射液在内皮祖细胞修复脂多糖诱导的肾内皮细胞损伤中的作用及机制

目的探究血必净注射液在内皮祖细胞修复脂多糖诱导的肾内皮细胞损伤中的作用及机制。方法提取并鉴定大鼠内皮祖细胞和肾脏微血管内皮细胞(RMEC),收集内皮祖细胞的培养上清作为条件培养基(CM)。取肾脏微血管内皮细胞,分为6组,空白组正常培养,模型组给予脂多糖(LPS)培养,CM+LPS组、CM+LPS+血必净12.5 mg/mL组、CM+LPS+血必净25 mg/mL组、CM+LPS+血必净50 mg/mL组给予相应干预。MTT法检测各组细胞增殖情况,Transwell小室法检测细胞迁移能力,小管形成实验检测体外血管新生能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,qRT-PCR法检测血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维生长因子(bFGF)表达情况,Western blot法检测NF-κB表达情况。结果模型组细胞增殖检测OD值及VEGF、bFGF相对表达量均明显低于空白组,细胞迁移数、小管形成数均明显少于空白组,细胞凋亡率及NF-κB相对表达量明显高于空白组,差异均有统计学意义(P均<0.05);CM+LPS组及血必净各组细胞增殖检测OD值及VEGF、bFGF相对表达量均明显高于模型组,细胞迁移数、小管形成数均明显多于模型组,细胞凋亡率及NF-κB相对表达量明显低于模型组,且血必净各组上述指标改善情况均明显优于CM+LPS组(P均<0.05)。结论血必净注射液可通过抑制NF-κB信号通路而促进内皮祖细胞修复脂多糖诱导的肾内皮细胞损伤。

槲皮素减轻高糖条件下人肾小球内皮细胞损伤的实验研究

目的研究槲皮素减轻高糖条件下人肾小球内皮细胞(HRGEC)损伤的作用及其机制。方法培养HRGEC并分为对照组、高糖组、10μmol/L槲皮素组、100μmol/L槲皮素组,后3组进行高糖处理,10μmol/L及100μmol/L槲皮素组分别给予10μmol/L及100μmol/L槲皮素处理。检测细胞活力、细胞凋亡、凋亡基因mRNA表达量、氧化应激指标含量、PI3K/AKT通路分子蛋白表达量。结果与对照组比较,高糖组的细胞活力、Bcl-2的mRNA表达量、SOD及GPx的含量、p-PI3K及p-AKT的蛋白表达量降低,细胞凋亡率、Bax及Caspase-3的mRNA表达量、MDA的含量增加(P<0.05);与高糖组比较,10μmol/L及100μmol/L槲皮素组的细胞活力、Bcl-2的mRNA表达量、SOD及GPx的含量、p-PI3K及p-AKT的蛋白表达量增加,细胞凋亡率、Bax及Caspase-3的mRNA表达量、MDA的含量降低(P<0.05)且100μmol/L槲皮素组的上述变化较10μmol/L槲皮素组更为显著(P<0.05)。结论槲皮素能够减轻高糖条件下HRGEC的损伤,且这一作用与激活PI3K/AKT通路有关。

高浓度尿酸对肾小球内皮细胞氧化应激及炎症反应的影响

目的探讨高浓度尿酸对肾小球内皮细胞氧化应激及炎症反应的影响。方法取传5～15代、对数生长期、生长状态良好的人肾小球内皮细胞(HRGEC),接种于6孔板,随机分为阴性对照组、生理浓度尿酸组、中浓度尿酸组、高浓度尿酸组。各组分别给予0、4、8、16 mg/d L尿酸干预24 h,分别采用RT-PCR法、Western blotting法检测内皮型一氧化氮合酶(e NOS)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、核因子κB(NF-κB)p56 mRNA和蛋白表达,采用荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)含量。结果阴性对照组、生理浓度尿酸组e NOS mRNA和蛋白相对表达量均明显低于中浓度尿酸组、高浓度尿酸组,ICAM-1、MCP-1、NF-κB p65 mRNA和蛋白相对表达量及ROS含量均明显高于中浓度尿酸组、高浓度尿酸组(P均<0. 05),而阴性对照组与生理浓度尿酸组、中浓度尿酸组与高浓度尿酸组上述指标比较P均> 0. 05。结论高浓度尿酸可能通过增加氧化应激途径中ROS产生和抑制e NOS表达,以及激活NF-κB信号通路促进炎症因子分泌等,导致肾小球内皮细胞损伤。