富硒黄芪多糖对STZ诱导的糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:观察富硒黄芪多糖对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响。方法:将50只STZ诱导的SPF级雄性糖尿病大鼠随机分为模型组、吡格列酮组和富硒黄芪多糖低、中、高剂量组,每组10只,正常组10只大鼠不进行造模。富硒黄芪多糖低、中、高剂量组按100、200、400 mg/kg灌胃,正常组及模型组灌胃等体积生理盐水,吡格列酮组按10 mg/kg灌胃吡格列酮。每天灌胃1次,连续干预4周。造模前及造模后第0、2、4周记录各组大鼠一般状况、检测尿微量白蛋白(urinary albumin,UAlb)和血糖。干预结束后,采用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining)观察各组大鼠肾脏组织形态学变化情况;测定各组大鼠血清肌酐(serum creatinine,SCr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和血尿酸(uric acid,UA)表达水平;荧光定量PCR检测各组大鼠肾组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤连蛋白(Fibronectin,FN)mRNA表达水平;免疫组化法(immunocytochemistry,IHC)检测各组大鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达。结果:与模型组比较,富硒黄芪多糖中、高剂量组及吡格列酮组大鼠血糖、24 h UAlb于造模后第2周明显下降(P<0.05),血清SCr、BUN及UA表达降低(P<0.05),富硒黄芪多糖高剂量组及吡格列酮组大鼠肾组织中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、FN表达均降低(P<0.05),E-cadherin表达升高(P<0.05),富硒黄芪多糖低、中、高剂量组及吡格列酮组大鼠肾组织中α-SMA表达下降(P<0.01),肾小球数量增多,细胞外基质减少;与吡格列酮组比较,黄芪多糖高剂量组大鼠24 h Ualb、血清SCr、BUN、UA水平及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、FN表达水平、E-cadherin和α-SMA蛋白表达变化均不明显(P>0.05),肾小球数量减少,细胞外基质减少。结论:富硒黄芪多糖可降低STZ诱导的糖尿病大鼠血糖,具有抑制糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化的作用。

肾分化调控的相关因子

随着新技术的应用 ,人们相继发现了参与肾分化调控的相关因子 ,有关的基因、蛋白对肾细胞分化、器官形成发挥了重要作用。本综述介绍了WT 1、Pax 2、Wnt4、BF 2等基因及肾素 血管紧张肽系统、转化生长因子 β和肝细胞生长因子、整合蛋白等因子的在肾分化中的调控功能 ,为阐明肾发育及疾病发生机制提供线索。

姜黄素对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化及TGF-β/Smads信号转导途径的影响

目的观察姜黄素对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾小管上皮细胞转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及TGF-β/Smads信号转导途径的影响。方法建立大鼠UUO模型,分为假手术组、模型组及姜黄素1、2组。姜黄素1组术后第2天开始给予姜黄素100mg/(kg·d)灌胃,姜黄素2组术后第10天开始给予姜黄素100mg/(kg·d)灌胃。假手术组和模型组给予同等剂量的生理盐水灌胃。术后28天处死大鼠,取梗阻侧肾组织,免疫组化染色观察α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscle actin,α-SMA),E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达分布;Western blot检测转化生长因子-β1(transforminggrowth factor-β1,TGF-β1)、P-Smad2、P-Smad3及Smad7的蛋白表达,实时荧光定量PCR方法检测TGF-β1、转化生长因子-β受体Ⅰ型(tansforming growth factor-βreceptorⅠ,TβRⅠ)、胶原蛋白-Ⅰ(collagen-Ⅰ,Col-Ⅰ)和胶原蛋白-Ⅲ(collagen-Ⅲ,Col-Ⅲ)mRNA水平表达。结果 UUO组大鼠肾组织中α-SMA表达明显增强(P<0·01),E-cadherin表达明显减弱(P<0·01),P-Smad2和P-Smad3蛋白,TGF-β1蛋白及mRNA,TβRⅠmRNA及Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA的表达水平均明显上调(P<0·01),Smad7蛋白表达明显减少(P<0·01)。姜黄素1、2组α-SMA蛋白,P-Smad2及P-Smad3蛋白,TGF-β1蛋白及mRNA,TβRⅠmRNA,Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA的表达水平与UUO组比较显著下降(P<0·05,P<0·01),E-cadherin和Smad7蛋白表达显著升高(P<0·05,P<0·01)。结论姜黄素可干预UUO大鼠TGF-β/Smads信号通路中多个位点,抑制肾小管上皮细胞EMT的发生,从而减轻肾小管间质纤维化。

冬虫夏草抑制ET-1对糖尿病肾病大鼠肾小管上皮细胞转分化作用

目的:观察冬虫夏草对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾小管上皮细胞转分化过程中所起的作用,探讨其在抗肾纤维化中可能的作用机制。方法:(1)干预处理后检测各组大鼠血、尿等相关指标,验证DN大鼠模型是否构建成功,比较不同组大鼠血糖、体重、肾重、肾脏肥大指数等的差异;(2)比较各组大鼠24h尿蛋白及血肌酐的差异;(3)免疫组化分析各组大鼠肾脏病理改变及纤维化程度;(4)免疫组化分析各组大鼠肾组织中ET-1、α-SMA和E-Cadherin等蛋白的表达病分析其相关性;(5)RT-PCR检测各组大鼠肾组织中ET-1、α-SMA和E-Cadherin mRNA水平的表达。结果:(1)DN大鼠模型构建成功,与对照组比较DN组大鼠血糖、体重、肾重、肾脏肥大指数差异明显(P<0.01);虫草组介于模型组与DN组之间(P<0.05);(2)各组大鼠的肌酐、蛋白尿差异有统计学意义(P<0.05);(3)虫草组病理改变较正常组严重(P<0.05),较模型组轻微(P<0.01);(4)DN大鼠肾组织中ET-1、α-SMA表达上调,E-Cadherin表达减少(P<0.05或P<0.01)。ET-1与α-SMA呈正相关(r=0.795,P<0.01),与E-Cadherin呈负相关(r=0.7353,P<0.01)。(5)冬虫夏草能明显减少糖尿病肾病大鼠尿蛋白排泄量,降低血清肌酐,改善糖尿病肾病肾组织病理形态学(P<0.05或P<0.01)同时能明显抑制肾组织中ET-1表达,调整肾组织α-SMA与E-Cadherin表达水平(P<0.05及P<0.01)。结论:冬虫夏草可以减轻DN大鼠模型肾脏纤维化的程度,这可能是通过抑制ET-1对糖尿病肾病大鼠肾小管上皮细胞转分化作用而实现的。

醛固酮及其拮抗剂安体舒通对高糖刺激下肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:通过观察高糖环境下,醛固酮(aldosterone,Aldo)及其拮抗剂安体舒通(spironolac-tone,SP)对大鼠肾小管上皮细胞(normal rat kidney epithelial cell,NRK-52E)转分化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)的影响,探讨Aldo及SP在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾保护作用中的机制。方法:用无血清DMEM(Dulbecco's modification of Eagle's medium Dulbecco)同步化培养NRK-52E细胞系12h后分为6组。LG组:采用低糖(1000mg/L)DMEM;HG组:采用高糖(4500mg/L)DMEM培养;10nmol/L Aldo组、50nmol/L Aldo组、100nmol/L Aldo组:分别采用高糖DMEM加10,50,100nmol/L Al-do培养;SP组采用高糖(4500mg/L)DMEM加10-7mol/L SP培养。采用细胞免疫化学、RT-PCR和Western免疫印迹方法检测各组细胞E-cadherin和α-SMA mRNA的表达情况。结果:RT-PCR结果表明,与LG组比较,HG组E-cadherinmRNA表达明显降低(P<0.01),α-SMAmRNA表达明显升高(P<0.05);50nmol/L Aldo组、100nmol/L Aldo组E-cadherinmRNA表达明显低于高糖组,而α-SMAmRNA表达明显高于高糖组(P<0.05),两者与Aldo呈浓度依赖关系(r=-0.70,P<0.05;r=0.67,P<0.05);SP组E-cadherinmRNA明显高于HG组,而α-SMAmRNA表达低于HG组(P<0.01)。细胞免疫化学和West-ern免疫印迹检测表明,与低糖组比较,HG组E-cadherin蛋白表达明显减低,而α-SMA表达明显升高(P<0.01);10nmol/L Aldo组、50nmol/L Aldo组、100nmol/L Aldo组E-cadherin蛋白表达明显低于HG组,而α-SMA蛋白表达明显高于HG组(P<0.05),与Aldo呈浓度依赖关系(r=-0.83,P<0.05;r=0.81,P<0.05);而SP组E-cadherin蛋白表达明显高于高糖组,α-SMA蛋白则明显低于HG组(P<0.05)。结论:Aldo能促进高糖环境下肾小管上皮细胞EMT的发生,致DN肾间质纤维化,而使用SP可抑制高糖诱导肾小管上皮细胞的EMT,这可能是其阻遏肾间质纤维化的重要机制。

丹酚酸B对输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:探讨丹酚酸B对输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化影响及作用机制。方法:雄性SD大鼠,建立单侧输尿管梗阻模型(UUO)。设假手术组、模型组、治疗组(丹酚酸B30mg·kg-1·d-1)术后第9天处死各组大鼠。采用光镜观察肾间质纤维化、炎细胞浸润,免疫组化观察肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Vi-mentin蛋白表达的变化。结果:(1)治疗组大鼠肾间质纤维化程度较模型组明显减轻;(2)UUO模型第9天时大鼠肾组织TGF-β1、α-SMA和Vimentin表达明显增强,炎细胞浸润明显增加。采用丹酚酸B治疗后,肾组织TGF-β1、α-SMA和Vi-mentin表达的异常增强能得到有效抑制,炎细胞浸润明显减少。结论:丹酚酸B具有减轻肾组织纤维化的作用,而这一作用与其能有效抑制炎细胞浸润和TGF-β1过度表达,进一步阻抑肾小管上皮细胞转分化(EMT)有关。

三七总皂甙抗肾小管上皮细胞转分化的实验研究

目的探讨三七总皂甙(Panax notoginseng saponins,PNS)抗肾小管上皮细胞转分化(EMT)的分子病理机制。方法将雄性SD大鼠80只随机等分为4组:假手术组、UUO模型组、PNS治疗组和氯沙坦(ARB)治疗组。术后3、7、14天和21天每组随机选择5只大鼠处死,收集肾组织。分别用Western杂交、免疫组化检测α-SMA的表达;用Real-Time PCR检测UUO术后大鼠α-SMA mRNA的表达。结果大鼠肾组织α-SMA表达,对于3d、7d,仅UUO组、PMS组均高于SOR组,其余任意两组比较均相近;14d、21d,仅PNS组与氯沙坦组均相近,其余任意两组比较均不同。UUO组、PNS组、氯沙坦组的时间与α-SMA表达间存在相似的正相关的曲线关系。大鼠肾组织α-SMA mRNAΔCT值,SOR组、氯沙坦组的7d与14d观察值均相近,其他组14d观察值均低于7d。结论PNS能有效下调UUO大鼠肾脏组织α-SMAmRNA及其蛋白的表达,具有抗肾小管上皮细胞转分化的作用。

人肾小管上皮细胞转分化过程中血管内皮细胞生长因子及其受体表达的变化

目的探讨转化生长因子β1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化过程中,血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体表达的变化。方法用不同浓度的TGFβ1诱导HK-2转分化,细胞免疫化学方法检测血管平滑肌肌动蛋白(α-SMA),反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测α-SMA和VEGFmRNA表达,酶联免疫分析(ELISA)检测上清中的VEGF,免疫印迹检测细胞裂解物中的VEGF及其受体。结果(1)HK-2细胞在TGFβ1(5、8ng/ml)刺激后,α-SMA免疫染色均为阳性,以8ng/ml时最强;TGFβ1呈剂量和时间依赖诱导α-SMAmRNA表达(P<0.001)。(2)TGFβ1诱导HK-2细胞转分化过程中,VEGF从基因到蛋白水平呈双相改变:0.1和1ng/mlTGFβ1刺激后VEGFmRNA和蛋白表达强度均高于对照组(P<0.001);而3、5和8ng/mlTGFβ1刺激后表达强度则低于对照组(P<0.001)。8ng/mlTGFβ1刺激较短时间(12和24h),VEGFmRNA和蛋白表达强度高于对照组(P<0.001);而刺激较长时间(36、48和72h),mRNA和蛋白表达强度均低于对照组(P<0.001)。(3)TGFβ1诱导HK-2细胞转分化过程中,以浓度和时间依赖性方式诱导VEGF受体表达增强(P<0.001)。结论TGFβ1诱导HK-2细胞转分化过程中,VEGF受体表达增强,而VEGF表达出现双相变化,高浓度的TGFβ1刺激可引起VEGF表达下调。

Smurf2在梗阻性肾病小鼠肾小管上皮细胞转分化形成中的作用

目的:探讨Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在小鼠单侧输尿管梗阻所致肾间质纤维化进展中的作用机制。方法:采用结扎雄性CD-1小鼠单侧输尿管(UUO)的方法建立肾间质纤维化动物模型,设假手术为对照组(Sham组)。术后3、7、14 d处死小鼠。用常规病理染色法观察两组小鼠肾组织形态和肾间质纤维化程度;以免疫蛋白印迹及免疫组织化学染色法检测两组小鼠肾组织中Smurf2、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接素(FN)的表达和分布。结果:与Sham组相比,UUO术后7 d小鼠出现部分肾小管扩张、萎缩和肾间质纤维化。同时,UUO术后肾组织中Smurf2、α-SMA和FN表达呈时间依赖性升高,E-cadherin表达则明显下降。并且,Smurf2蛋白主要分布于肾小管上皮细胞核内;α-SMA分布于肾小管上皮细胞和肾间质中;FN则分布于肾间质中。相关回归分析表明:UUO术后小鼠肾组织内Smurf2表达与α-SMA(r=0.765,P<0.001)和FN蛋白水平呈正相关(r=0.773,P<0.001);与E-cadherin表达呈负相关(r=-0.656,P<0.001)。结论:梗阻性肾病小鼠肾组织中Smurf2可能通过诱导肾小管EMT形成促进肾间质纤维化的进展。

姜黄素对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化影响的研究

目的:探讨姜黄素对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾小管上皮细胞转分化的作用。方法:采用UUO致肾间质纤维化大鼠模型。将24只大鼠随机均分为假手术组、模型组和姜黄素组。从制模后2 d起,姜黄素组给予100 mg.kg-1.d-1姜黄素腹腔注射。术后4周心脏穿刺抽血,测定各组大鼠血清尿素氮(BUN)和血肌酐(SCr)值。处死大鼠,用苏木素-伊红(HE)、Masson染色评定肾小管间质纤维化程度;用免疫组化方法检测肾组织内转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达部位及表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠BUN水平显著增加(P<0.01),肾间质纤维组织相对面积显著扩大(P<0.01),肾组织内TGF-β1、α-SMA和Vimentin的蛋白表达均显著上调(P均<0.01)。姜黄素干预后,上述上调指标都被显著抑制(P<0.05或P<0.01)。结论:姜黄素可能通过抑制UUO大鼠肾小管上皮细胞转分化而减轻肾间质纤维化。

红景天苷对转化生长因子-β1诱导人肾小管上皮细胞逆向分化的影响

目的:阐释红景天苷对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HKC)表型转分化的效应,探讨其对Ⅰ型(ColⅠ)和Ⅲ型(ColⅢ)胶原蛋白表达的影响。方法:体外培养HKC,应用不同浓度红景天苷处理经TGF-β1诱导活化的HKC细胞,显微镜观察细胞形态改变,免疫组化法检测角化蛋白-18和α-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)的表达;应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测ColⅠ型和ColⅢ型胶原蛋白表达。结果:HKC细胞经过TGF-β1诱导,细胞角化蛋白-18表达明显下调,α-SMA、ColⅠ、ColⅢ型胶原表达明显上调,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。经红景天苷干预后,其表达有所下降,与TGF-β1诱导组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:红景天苷可抑制TGF-β1诱导的HKC表型转分化,同时可以抑制肾小管上皮细胞外基质成分ColⅠ、ColⅢ型胶原的合成,在一定程度上具有阻止肾小管间质纤维化的作用。

中药复方糖耐康对KKAy小鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:探讨中药复方糖耐康对KKAy小鼠肾小管上皮细胞转分化的影响及其可能机制。方法:12周龄雄性KKAy小鼠50只,按血糖随机分为模型组、缬沙坦组、糖耐康高、中、低剂量组,每组10只,另设10只C57BL/6J小鼠为正常组,正常组和模型组给予0.9%氯化钠溶液,其余组给予对应浓度的药液灌胃,用药8周后处死,取肾脏组织,进行Mosson、PAS染色,免疫组化染色观察平滑肌肌动蛋白(α-SMA),E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达分布;Western Blot检测转化生长因子-β1(TGF-β1)表达。结果:与正常组相比较,模型组小鼠肾纤维化面积显著增大(P<0.01),α-SMA蛋白表达呈现较强阳性,E-cadherin蛋白表达弱阳性。与模型组比较,缬沙坦组、糖耐康各剂量组肾纤维化面积显著减小(P<0.01),α-SMA蛋白表达显著减少(P<0.01),而E-cadherin蛋白表达明显增加(P<0.05)。KKAy小鼠肾脏组织TGF-β1蛋白表达较正常小鼠显著升高(P<0.01);与模型组比较,缬沙坦组、糖耐康低、中和高剂量组TGF-β1蛋白表达含量都显著降低(P<0.01),其中糖耐康高剂量组与缬沙坦组相比较TGF-β1显著降低。结论:中药复方糖耐康可抑制肾小管上皮细胞EMT的发生,减轻肾小管间质纤维化而发挥肾脏保护作用。

川芎嗪对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的观察川芎嗪对单侧输尿管梗阻大鼠(UUO)肾小管上皮细胞-间充质转分化(EMT)的影响及机制。方法 SD大鼠60只,随机分为A组(假手术)、B组(UUO)、C组[川芎嗪,40 mL/(kg·d),腹腔注射]、D组[厄贝沙坦,50 mg/(kg·d),灌胃],每组各15只。术后分别于第3、7和14天取左肾组织。荧光实时定量PCR检测分化抑制因子1(Id1)mRNA,免疫组化法测Id1、小窝蛋白1(Cav1)、转化生长因子-β1(TGFβ1)、钙粘蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原表达及相关分析。结果与A组比较,B组大鼠各时间点Id1 mRNA和蛋白、Cav1、TGFβ1、α-SMA和I型胶原表达增多,E-cad表达逐渐减少;C组大鼠各时间点均反向调节上述因子,疗效与D组相似;UUO大鼠肾组织中Id1表达与Cav1、α-SMA、TGFβ1表达正相关,与E-cad表达呈负相关。结论 Id1及Cav1表达强弱与肾间质纤维化程度相关,川芎嗪能有效减轻UUO诱导的大鼠肾间质纤维化,可能与有效抑制Id1及Cav1表达,部分逆转EMT有关。

红景天甙对低氧诱导肾小管上皮细胞转分化的作用研究

目的观察红景天甙(salidroside,Sal)对氯化钴(cobaltous chloride,CoCl2.6 H2O,Co)诱导的低氧状态下正常大鼠近端肾小管上皮细胞(normal rat kidney tubular epithelia cell,NRK52E)转分化的影响并分析其可能的机制。方法体外培养NRK52E细胞,分为正常对照组,氯化钴低氧组,10、50、100μmol/L不同浓度红景天甙组。观察低氧标志蛋白低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible foctor-1α,HIF-1α)的表达。倒置相差显微镜观察细胞形态变化;荧光免疫及细胞免疫法检测NRK52E细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达情况;RT-PCR检测NRK52E细胞α-SMA、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)mRNA的表达;Western blot蛋白印迹检测HIF-1α和α-SMA蛋白的表达;酶联免疫吸附法检测细胞上清液胶原Ⅰ(collagenⅠ,Col-Ⅰ)和纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)的含量。结果100μmol/L Co诱导NRK52E细胞表达HIF-1α。Co组细胞明显肥大、拉长,呈肌成纤维细胞外观。不同浓度Sal组细胞形态介于正常与Co组之间。Co组α-SMA基因、蛋白和TGF-β1mRNA表达量较对照组升高(P<0.05),不同浓度Sal组α-SMA基因、蛋白和TGF-β1mRNA表达量较Co组减少(P<0.05)。Co组细胞上清液Col-Ⅰ和FN的含量较对照组增加(P<0.05),不同浓度Sal组Col-Ⅰ和FN的含量明显下降(P<0.05),以高剂量组最为明显。结论Sal可在一定程度上改善Co诱导的低氧状态和细胞转分化,减少细胞外基质的增加。其机制可能是通过抑制TGF-β1和HIF-1α的表达实现的。

己酮可可碱对肾小管上皮细胞转分化抑制作用的实验研究

目的 :探讨己酮可可碱 (PTX)对单侧输尿管梗阻 (UUO)模型大鼠肾间质平滑肌肌动蛋白 (α -SMA)表达的影响 ,并在体外研究其对肾小管上皮细胞转分化及其对Smad 7表达的作用。方法 :将实验大鼠分为假手术组、UUO对照组和UUO +PTX治疗组。用免疫组化法测定各组动物肾组织α -SMA表达。体外培养的人肾小管上皮细胞 (HK - 2 ) ,经TGF - β1及PTX干预后 ,用蛋白印迹检测α -SMA和Smad 7表达 ,用ELISA检测培养上清中Ⅰ型胶原含量。结果 :假手术组大鼠肾组织仅血管壁α -SMA免疫染色阳性。UUO对照组第 3d、第 7d、第 14d ,α -SMA表达程度分别为 (2 .90± 0 .71) %、(8.5 0± 0 .97) %、(17.9± 2 .70 ) % ,PTX治疗组则分别为 (2 .70± 0 .6 2 ) %、(6 .90±0 .83) %、(13.8± 1.9) % ,术后第 7d(P <0 .0 5 )、第 14d(P <0 .0 1)两组有统计学差异。TGF - β1(8ng/ml)刺激HK - 2细胞 72h后 ,α -SMA表达强度为 (87.7± 7.0 ) % ,培养上清中Ⅰ型胶原浓度为 (2 5 6 0 .4 9± 95 .0 3)ng/ml;而加入PTX 10、5 0、10 0、30 0、5 0 0 μg/ml干预 72h后 ,α -SMA表达强度 (F =174 .998,P <0 .0 0 1)和培养上清中的Ⅰ型胶原 (F =4 6 0 .883,P <0 .0 0 1)呈浓度依赖性减少。在TGF - β1刺激前 2 4h、TGF - β1刺激后 0h。

肾小管上皮细胞转分化与转化生长因子-β和以其为靶点的治疗策略

肾间质纤维化几乎是所有肾脏疾病进展到终未期肾功能衰竭的共同病理途径,近年研究表明,肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化(EMT)是肾间质纤维化发生发展的核心环节之一。转化生长因子(TGF)-β是促EMT作用最强的细胞因子,可以启动并完成整个EMT过程,是纤维化形成与发展的启动枢纽。因此,针对TGF-β可为肾间质纤维化的防治提供新的有效途径。现就该研究方向的新进展作一综述。

血管紧张素-(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)表型转化及细胞外基质分泌的影响。方法:体外培养NRK52E细胞,经Ang-(1-7)和AngⅡ(终浓度均为1×10-6mol/L)干预24、48、72、96 h后,应用细胞免疫化学法检测E-cadherin,α-SMA的表达;应用ELISA法检测细胞上清液中Ⅰ型胶原(ColⅠ)和纤维黏连蛋白(FN)的表达;采用实时荧光定量PCR(Real-tim e PCR)检测细胞中E-cadherin、α-SMA、ColⅠ和FN mRNA表达水平的变化。结果:AngⅡ作用96 h后,E-cadherin蛋白及mRNA表达显著减弱(P<0.05),α-SMA、ColⅠ、FN蛋白及mRNA表达显著增强(P<0.05);同时加入Ang-(1-7)后,与AngⅡ组比较,E-cadherin蛋白及mRNA的表达增强(P<0.05),α-SMA、ColⅠ、FN蛋白及mRNA表达减弱(P<0.05)。结论:Ang-(1-7)能够抑制AngⅡ诱导的大鼠肾小管上皮细胞表型转化及细胞外基质的分泌。

百令胶囊对肾小管间质纤维化大鼠肾小管上皮-间质转分化的干预作用(英文)

目的探讨百令胶囊对小管间质纤维化大鼠小管上皮-间质转分化的干预作用。方法利用腺嘌呤诱导建立肾小管间质纤维化大鼠模型,实验SD大鼠随机分为模型组、干预组、对照组各30只,分别于实验第7周、12周、17周收获动物各10只,进行功能学和肾脏组织病理学检测和观察。利用免疫组织化学对骨形态发生蛋白-7(BMP-7)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(-αSMA)在肾小管间质纤维化大鼠中的表达变化进行动态观察及百令胶囊的干预影响。结果实验第7周模型组大鼠即表现出大量蛋白尿、小管损伤、间质的轻度纤维化和炎症细胞浸润(P<0.01);随病程进展,上述病变呈进行性加重(P<0.01)。百令胶囊干预组动物在实验第7周、12周功能学组织学的改善同实验组相比有明显差异(P<0.01),17周后二者无显著差异。免疫组织化学显示百令胶囊12周前能显著上调BMP-7的表达和降低-αSMA和TGF-β1在肾脏小管间质中的表达(P<0.01),12周后这种变化无差异。结论百令胶囊在发病早期通过有效干预上皮-间质转分化达到改善肾脏纤维化的作用,随着肾小管间质纤维化程度的加重,百令胶囊逐渐失去其阻断作用。

肾小管上皮细胞转分化与糖尿病肾病

目的:探讨肾小管上皮细胞转分化与糖尿病肾病之间的关系、发病机制、发展规律。方法:通过查阅文献,对肾小管上皮细胞转分化的特征及影响因素几个方面对肾小管上皮细胞转分化与糖尿病肾病的关系进行综述。结论:糖尿病肾病(DN)对糖尿病患者的生存质量有着严重的影响,甚至会危机患者的生命。以肾小管转分化为切入点的诊疗方案必将对糖尿病肾病产生有益的影响。

大蒜素对高糖诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨大蒜素对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的影响。方法复苏并传代培养HK-2细胞,分为正常糖对照组(NG,5.5mmol/L)、高糖组(HG,25mmol/L)、高糖+不同剂量的大蒜素干预组(HG+2.5、5、10、20μg/ml Allicn)、高糖+JAK2抑制剂AG490组(HG+10μmol/L AG490)。倒置显微镜下观察高糖对细胞形态的影响,细胞免疫荧光检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)的表达变化,荧光定量PCR检测TGF-β1mRNA的表达变化,Western blot法检测TGF-β1、p-STAT3、STAT3蛋白的表达变化。结果与正常对照组相比,高糖刺激后的HK-2细胞的形态发生明显的长梭形改变,上皮细胞标志物E-cadherin表达明显减少,而间充质细胞标志物ɑ-SMA及collagenⅠ的表达明显升高(P<0.01);TGF-β1及p-STAT3的表达明显增高(P<0.05);而加入大蒜素或JAK2抑制剂AG490后,均能不同程度抑制高糖诱导的HK-2细胞转分化,而且大蒜素可明显抑制TGF-β1及p-STAT3的表达,以20μg/ml尤为显著(P<0.05)。结论大蒜素可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路活化,从而抑制高糖诱导的HK-2细胞转分化。