钙敏感受体在胰岛素抵抗状态下肾动脉平滑肌细胞增殖和迁移中的作用

目的探讨钙敏感受体(calcium sensing receptor,CaSR)在胰岛素抵抗状态下肾动脉平滑肌细胞(renal artery smooth muscle cell,RAMSC)增殖和迁移中的作用及机制。方法将对数生长期的RASMC随机分为:对照组、单纯模型组、模型+GdCl 3(CaSR激动剂)组、模型+NPS2143(CaSR抑制剂)组。应用α平滑肌肌动蛋白免疫组化染色鉴定RAMSC;Western blot检测CaSR、PCNA及MMP-2蛋白的表达;采用流式细胞术检测细胞增殖周期变化;应用Transwell小室法检测细胞迁移能力;应用ELISA法检测MMP-2蛋白的含量;应用激光共聚焦扫面显微镜技术检测细胞中钙离子浓度的变化。结果与对照组比较,模型组RAMSC CaSR蛋白表达增多,PCNA及细胞增殖指数增加,细胞穿膜数量及MMP-2表达增多,同时细胞内钙离子浓度升高。GdCl 3及NPS2143分别上调和下调胰岛素抵抗引起的上述作用。结论胰岛素抵抗活化的CaSR能够促进大鼠RASMC的增殖与迁移过程,细胞内钙离子在其中发挥重要作用。

神经肽Y刺激肾动脉平滑肌热休克蛋白表达及Losartan的干预作用

目的 探讨以HSP70作为神经肽Y (NPY)和losartan间在肾动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖活动相互作用为信号 ,在高血压肾动脉重塑中的作用。方法 应用快速微量MTT比色法和荧光免疫组织化学定量技术 ,观察神经肽Y作用下肾动脉VSMC增殖活动中热休克蛋白 (heatHSP)表达以及Losartan对NPY作用的干预作用。结果 神经肽Y刺激体外培养肾动脉平滑肌细胞的增殖度 (吸光度A值为 0 2 6 2 6± 0 0 0 2 5 )与细胞内因损伤产生的HSP70表达 (A值为 0 2 44 0±0 0 0 13)明显高于对照组 (A值为 0 2 2 3 9± 0 0 0 10 ) (P <0 0 1)。losartan可降低NPY对肾动脉平滑肌细胞的增殖度 (A值 )的刺激作用 ,减少细胞内HSP70的表达。结论 神经肽Y可影响肾动脉平滑肌细胞增殖引起高血压 ,而HSP70表达水平是肾动脉平滑肌细胞增殖的重要信号。

神经肽Y刺激肾动脉平滑肌热休克蛋白表达及洛沙坦的干预作用

神经体液因素中神经肽Y(neuropentide Y,NPY)对多种心血管疾病,尤其是高血压的发生密切相关[1]。神经肽Y是否可直接刺激肾动脉内血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)发生增殖或肥大导致肾动脉血管壁结构重塑及细胞凋亡作用?我们以快速微量噻唑蓝(MTT)

神经肽Y剌激肾动脉平滑肌热休克蛋白表达的实验研究

目的 以热休克蛋白 70 (HSP 70 )作为神经肽Y (NPY )刺激肾动脉平滑肌细胞增殖活动为信号 ,探讨高血压肾动脉重塑中发挥的作用。方法 应用快速微量MTT比色法和荧光免疫组织化学定量技术观察神经肽Y作用下肾动脉平滑肌细胞 (VSCM )增殖活动中HSP70表达作用。结果 神经肽Y可刺激体外培养肾动脉平滑肌细胞的增殖 ,其增殖度 (MTT A值 )和细胞内因损伤产生的HSP 70表达明显高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 神经肽Y可影响肾动脉平滑肌细胞增殖 ,而HSP 70表达水平是肾动脉平滑肌细胞增殖的重要信号。

钙敏感受体对高糖诱导的肾动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨钙敏感受体(CaSR)对高糖诱导的肾动脉平滑肌细胞增殖的影响,并分析其与细胞外调节蛋白激酶1,2(ERK1,2)信号通路的相关性。方法将对数生长期的肾动脉平滑肌细胞随机分为4组:正常组、模型组、干预-1组、干预-2组及干预-3组。干预-1组、干预-2组和干预-3组分别加入GdCl3(钙敏感受体激动剂)30μmol·L^(-1)、NPS2143(钙敏感受体抑制剂)10μmol·L^(-1)和PD98059(细胞外调节蛋白激酶1/2抑制剂)10μmol·L^(-1)+GdCl330μmol·L^(-1),均干预4 h后造模。用含葡萄糖25 mmol·L^(-1)、胰岛素1μmol·L^(-1)的DMEM培养细胞24 h来制备胰岛素抵抗模型。用蛋白质印迹法检测CaSR、增殖细胞核抗原(PCNA)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶1,2(p-ERK1,2)蛋白的表达(灰度值),用流式细胞技术检测细胞增殖指数。结果正常组、模型组、干预-1组、干预-2组及干预-3组的CaSR蛋白表达量分别为0.25±0.02,0.41±0.02,0.55±0.03,0.31±0.04和0.53±0.04;这5组的PCNA蛋白的表达分别为0.26±0.03,0.58±0.04,0.81±0.04,0.48±0.02和0.52±0.06;这5组的p-ERK1蛋白表达分别为0.48±0.02,0.81±0.04,0.92±0.05,0.37±0.03和0.72±0.06;p-ERK2蛋白表达分别为0.41±0.03,0.78±0.05,0.89±0.04,0.42±0.03和0.63±0.06;这5组的细胞增殖指数分别为13.52±2.12,20.72±2.96,35.41±3.23,16.98±2.36和19.72±2.28。上述指标:模型组与正常组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);干预-1组、干预-2组与模型组比较,差异均具有统计学意义(均P<0.05);干预-1组与干预-3组比较(CaSR除外),差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论高糖活化的钙敏感受体促进肾动脉平滑肌细胞增殖,其机制与ERK信号通路激活密切相关。