星点设计-效应面法优选糖肾宁颗粒乙醇提取工艺的研究

目的优选糖肾宁颗粒(黄芪、葛根、黄蜀葵花、大黄等)乙醇提取部分的工艺。方法以黄芪甲苷、金丝桃苷和葛根素提取率的总评归一值为评价指标,以乙醇体积分数、乙醇用量、提取时间为主要影响因素,采用星点设计-效应面优化法选择提取工艺的最佳条件。结果确定糖肾宁颗粒醇提部分的最优提取工艺为加12倍63%乙醇回流提取2次,每次2.5 h。结论星点设计-效应面法优选的糖肾宁颗粒醇提部分工艺,方法简便,精度更高。

糖肾宁颗粒中4种成分含量及其稳定性的测定

目的建立HPLC法测定糖肾宁颗粒（黄芪、葛根、大黄等）中4种成分的含有量,并考察其稳定性。方法HPLC法测定该药物甲醇提取液中黄芪甲苷、大黄酸、葛根素、金丝桃苷的含有量,再对3批样品进行加速稳定性试验（6个月）和常温稳定性试验（18个月）考察。结果黄芪甲苷、大黄酸、葛根素、金丝桃苷分别在8.09～32.36 ng（r=0.999 3）、29.52～369 ng（r=0.999 8）、348～1 740 ng（r=0.999 9）、71.75～358.75 ng（r=0.999 9）范围内线性关系良好,平均加样回收率（RSD）分别为95.2%（2.5%）、101.4%（2.6%）、101.9%（1.6%）、98.2%（2.6%）。该药物在性状、粒度、含水量、溶化性、定性鉴别和定量测定方面均符合要求。在加速稳定性试验中,黄芪甲苷、大黄酸、葛根素较为稳定;在常温稳定性试验中,4种成分均显示出良好的稳定性。结论糖肾宁颗粒含有量测定指标可从黄芪甲苷、大黄酸或葛根素中选择,而金丝桃苷对湿热不稳定。

薄层扫描法测定肾宁颗粒中黄芪甲苷的含量

目的：建立肾宁颗粒中黄芪甲苷的含量测定方法。方法：采用薄层扫描法。结果：黄芪甲苷含量在1．1116-6．096μg·L^-1范围内点样量与峰面积积分值的线性关系良好，r=0．9970（n=6）。平均回收率为100．5％，RSD为2．9％。结论：测定方法简便、准确、重现性好。

薄层扫描法测定肾宁颗粒中盐酸水苏碱的含量

目的:建立以薄层扫描法测定肾宁颗粒中盐酸水苏碱含量的方法。方法:展开剂为丙酮-无水乙醇-盐酸(10∶6∶1) ,显色剂为碘化铋钾试液-1%三氯化铁无水乙醇溶液(2∶1) ,测定波长为530nm ,参比波长为670nm ,狭缝大小为0.4mm×0. 4mm ,线性化参数Sx=3。结果:盐酸水苏碱点样量在2.412μg～6.432μg范围内斑点峰面积积分值呈良好的线形关系(r=0.9972) ,平均回收率为98.93% (RSD=1.15 % )。结论:本方法简便、准确、重现性好。

肾宁颗粒的薄层色谱鉴别

目的建立肾宁颗粒中各组成药味的鉴别方法。方法采用薄层色谱法鉴别黄芪、益母草、川芎。结果在选定的薄层色谱条件下,层析斑点清晰,分离效果好,易于识别。结论所建立的鉴别方法简便、专属性强,可作为该制剂的质量控制方法。

糖肾宁颗粒多息薄层鉴别研究

目的建立糖肾宁颗粒中7味药的多息定性鉴别方法。方法根据待检特征成分,将处方中黄芪、金樱子、川芎、黄蜀葵花、大黄、葛根、倒扣草等分为3组,采用薄层色谱(TLC)对其进行定性鉴别。结果 TLC能明显鉴别7味中药,斑点清晰,分离度好,专属性强。结论建立的TLC方法可有效地控制糖肾宁颗粒的质量,且快速、经济。

糖肾宁颗粒水提取部分工艺的研究

目的筛选糖肾宁颗粒的提取工艺路线并优选水提部分工艺。方法以KK-Ay小鼠制备糖尿病肾病模型,采用酶联免疫法测定24 h尿微量白蛋白含量,通过比较不同提取物给药前后微量白蛋白含量变化确定提取工艺路线;水提部分以加水倍数、提取时间、提取次数为主要影响因素,大黄酸转移率为评价指标,采用正交试验设计优化提取工艺条件。结果路线2降低尿微量白蛋白含量效果最好;优选的糖肾宁方水提部分最佳提取工艺为加10倍水提取3次,每次1.5 h。结论药效学试验确定了适宜的提取路线,优选的水提工艺条件稳定可行。

高效液相色谱法测定肾宁颗粒中黄芪甲苷的含量

目的:建立肾宁颗粒中黄芪甲苷的含量测定方法。方法:采用C18(4.6mm×250mm,5μm)柱,流动相为乙腈-水-冰醋酸(30:70:1),检测波长为202nm。结果:黄芪甲苷在15-300μg范围内线性关系良好,相关系数r=0.9995,平均回收率为97.95%,RSD为0.40%。结论:此测定方法准确,重现性好,可作为制剂的质量控制方法。

止消保肾宁颗粒的毒理学研究

目的:观察止消保肾宁颗粒对小鼠、大鼠的急性毒性和对大鼠的长期毒性。方法:给小鼠一次性灌胃不同剂量(33.0、29.8、26.9、24.3、21.9、19.8 g/kg)止消保肾宁颗粒,观察小鼠的一般情况及死亡数。给大鼠单次灌胃止消保肾宁颗粒13.2 g/kg,观察大鼠的急性毒性。在长期毒性实验中,给大鼠连续灌胃低、中、高剂量(3.1、6.2、12.4 g/kg)180 d,观察大鼠的体重、血液学指标、生化指标、脏器系数和组织病理学检查结果。结果:止消保肾宁颗粒对小鼠的LD50为26.0 g/kg。长期毒性实验中,第24～26周高剂量组大鼠体重增长较空白对照组明显减慢,第27周恢复。中、低剂量组大鼠的体重与空白对照组无显著性差异。高、中、低剂量组大鼠的血液学指标、生化指标、脏器系数与空白对照组无显著性差异。未发现与用药有关的组织病理学异常。结论:止消保肾宁颗粒的拟定临床剂量(190 mg/d)是安全的。

基于线粒体质量控制系统探讨肾必宁颗粒对IgA肾病大鼠的肾脏保护作用机制

目的基于线粒体质量控制系统,探讨肾必宁颗粒对免疫球蛋白A(IgA)肾病大鼠的肾脏保护作用机制。方法采用“牛血清白蛋白+四氯化碳+脂多糖”法建立IgA肾病模型,将模型大鼠随机分为模型组、醋酸泼尼松组(6.25mg/kg)、肾必宁等剂量组(4.1g/kg)和肾必宁高剂量组(20.5g/kg),另取正常大鼠作为正常对照组,每组12只。各组大鼠灌胃相应药物或蒸馏水,每天1次,连续4周。末次给药后,检测大鼠24 h尿蛋白总量(24 h-UTP)和尿液中红细胞计数,以及血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、白蛋白(ALB)、丙氨酸转氨酶(ALT)水平;观察肾组织病理变化和肾脏系膜区IgA沉积改变;检测肾组织中PTEN诱导假定激酶1(PINK1)、E3泛素连接酶(Parkin)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)mRNA及蛋白表达水平。结果与模型组比较,醋酸泼尼松组、肾必宁等剂量组和肾必宁高剂量组大鼠24h-UTP,尿红细胞计数,ALT、BUN、Scr水平,LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA比值和Drp1 mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);ALB水平,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值和PINK1、Parkin、Mfn2 mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);大鼠肾组织病理形态均明显改善,IgA沉积均明显减少。结论肾必宁颗粒可能通过激活PINK1/Parkin通路、增强线粒体自噬、纠正线粒体动力学紊乱来减轻IgA肾病大鼠肾损伤,从而保护肾功能。

基于NIK/IKKα信号通路探讨肾必宁颗粒改善IgA肾病大鼠肾损伤的作用机制

目的研究肾必宁颗粒对IgA肾病(IgAN)模型大鼠肾脏NF-κB诱导激酶/IκB激酶α(NIK/IKKα)信号通路的影响,评估其在改善肾脏损伤中的作用并探讨其潜在机制。方法将54只SPF级雄性SD大鼠适应性饲养1周后,随机取10只为对照组,其余44只采用联合牛血清白蛋白(BSA)灌胃、尾静脉注射脂多糖(LPS)、皮下注射四氯化碳(CCl_4)和蓖麻油综合措施诱导建立IgAN大鼠模型持续9周。确定造模成功后随机将其分为模型组10只、泼尼松(6.25mg·kg^(-1))组10只、中药低剂量(肾必宁颗粒,12.2g·kg^(-1))组12只、中药高剂量(肾必宁颗粒,24.4g·kg^(-1))组12只。对照组及模型组灌服生理盐水,治疗组分别给与对应剂量药物灌胃,每日1次,持续6周。实验结束时收集各组大鼠24 h尿液、血清和肾组织标本。生化检测各组大鼠尿红细胞计数(URBCC)、24 h尿蛋白定量(24 h-UTP)、尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、谷丙转氨酶(ALT)、血清白蛋白(ALB);苏木精-伊红(HE)染色法检测肾组织病理改变;蛋白免疫印迹法(WB)及实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)分别检测肾组织中NIK、IKKα蛋白及mRNA表达水平。结果与对照组比较,模型组大鼠ALT、BUN、SCr、24h-UTP、URBCC水平显著升高(P<0.01),ALB显著降低(P<0.01),HE染色显示肾脏病理损伤较重,同时肾组织NIK、IKKα蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,泼尼松组和中药组ALT、BUN、SCr、24h-UTP、URBCC含量显著降低(P<0.01),ALB显著升高(P<0.01),肾脏病理损伤较轻,同时肾组织NIK、IKKα蛋白及mRNA表达水平显著降低(P<0.01);不同剂量的中药组表现出一定的量效趋势。结论肾必宁颗粒能够改善IgAN模型大鼠的肾脏病理损伤,具有降低蛋白尿和保护肾功能的作用,其机制可能与其调节肾脏NIK/IKKα通路进而降低肾组织炎症水平有关。

肾必宁颗粒对IgA肾病大鼠肾脏保护及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的研究肾必宁颗粒对IgA肾病(Immunoglobulin A nephropathy,IgAN)大鼠肾脏保护及对肾组织Toll样受体4/髓样分化因子88/核转录因子-κB(TLR4/MyD88/NF-κB)表达的影响。方法将42只SD大鼠随机分为空白组、模型组、肾必宁低剂量组、肾必宁高剂量组、泼尼松组。除空白组外建立IgAN大鼠模型,从建模第4周开始,造模组接受相应药物或生理盐水灌胃,于第17周末麻醉后取材,全自动生化分析仪检测24小时尿蛋白定量(24hUTP)、尿红细胞计数(URBC)、血清白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN),光镜观察肾组织病理形态改变,免疫荧光观察系膜区IgA沉积情况;ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白介素-6(IL-6)的含量;Western blot、荧光定量PCR法分别检测肾脏组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白和mRNA表达。结果与空白组比较,模型组大鼠系膜细胞增生、大量肾小管扩张,小管上皮细胞坏死,IgA电子致密物沉积增多,呈不规则颗粒及团块状分布;ALB水平降低,24hUTP、URBC、ALT、Scr和BUN水平均升高(P<0.05或P<0.01);血清TNF-α及IL-6含量显著升高(P<0.01);肾组织中TLR4、MyD88和NF-κB蛋白及mRNA的表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,泼尼松组、肾必宁颗粒各组大鼠肾脏病理减轻,IgA电子致密物沉积减少;ALB水平升高,24hUTP、URBC、ALT、Scr和BUN水平均降低(P<0.05或P<0.01);血清TNF-α及IL-6含量显著降低(P<0.01);肾组织中TLR4、MyD88和NF-κB蛋白及mRNA的表达均显著降低(P<0.01)。结论肾必宁颗粒能有效改善IgAN肾脏损伤,可能通过调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制炎症因子释放发挥其治疗作用。

糖肾宁颗粒治疗糖尿病肾病多中心随机双盲对照临床试验

目的:客观评价糖肾宁颗粒治疗糖尿病肾病(DKD)临床疗效,并对其作用机制进行初步探讨。方法:采用多中心、随机、双盲、阳性药物平衡对照的试验设计方法,将符合诊断标准的早期DKD患者250例,随机分为治疗组和对照组,对照组在饮食控制、控制血糖基础上,口服氯沙坦,1片/d;治疗组在此基础上予口服糖肾宁颗粒8g,2次/d,疗程为12周。重点观察两组患者的中医临床症状、24h白蛋白排泄率(24h UAER)、估算肾小球滤过率(e GFR)、超氧化物歧化酶(SOD)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)等指标治疗前后变化。结果:治疗组总有效率为86.0%,对照组总有效率为58.8%,治疗组的疗效明显优于对照组(P<0.05);治疗组在降低患者的24h UAER和改善中医临床症状方面明显优于对照组(P<0.01)。治疗组患者血清SOD水平明显高于对照组(P<0.05),血清MDA、hs-CRP水平明显低于对照组(P<0.05);试验过程中未出现任何不良反应。结论:糖肾宁颗粒是治疗早期DKD安全有效的药物,其作用机制可能与改善机体微炎性反应状态及氧化应激状态有关。

星点设计-效应面法优选糖肾宁颗粒的成型工艺

目的:优选糖肾宁颗粒的成型工艺。方法:以成型性、溶解性、吸湿性及吸湿后外观为指标,通过单因素试验确定辅料种类,采用星点设计-效应面法优选辅料配合比例、用量、润湿剂浓度等成型工艺参数。结果:最佳成型工艺为提取物-糊精-甘露醇(4∶3∶3),加入75%乙醇制软材,干燥温度55℃。总评"归一值"(overall desirability,OD)平均值0.786,与模型方程理论预测值(0.78)的偏差0.8%。制备的颗粒剂合格收率88.44%,溶化时间<0.5 min,临界相对湿度约70%,休止角34.8度,堆密度0.49 g·m L-1。结论:优选的成型工艺稳定可行,制备的糖肾宁颗粒具有合格率高、溶化性好、抗吸湿性强的特征,为该制剂的大生产提供参考。

止消温肾宁颗粒对糖尿病肾病大鼠的治疗作用及机制研究

目的:探讨止消温肾宁颗粒对糖尿病肾病(DN)模型大鼠的治疗作用及其作用机制。方法:将180只SD大鼠随机分为假手术组(剥除左肾脂肪薄膜),模型组(单侧肾切联合腹腔注射链脲佐菌素),止消温肾宁低、中、高剂量组,渴络欣组与厄贝沙坦组。造模后第4周开始灌胃给药,连续给饲12周。取材后检测尿蛋白/尿肌酐的比值(ACR)、24 h尿蛋白、空腹血糖(FBG)、血清尿素氮(BUN)、糖化血清蛋白(GSP)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三脂(TG)及晚期糖基化终末产物(AGEs)的含量,肾组织病理状况及肾皮质结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达。结果:与模型组比较,止消温肾宁颗粒可降低ACR、24 h尿蛋白、FBG、BUN、GSP、LDL-C、TC及AGEs,并可抑制CTGF的过高表达,有效缓解肾小球及肾小管病变。结论:止消温肾宁颗粒对DN大鼠有较好的治疗作用,其机制可能与调节血清与尿液生化指标、缓解肾脏组织病变有关。

基于HPLC指纹图谱与多成分含量测定结合化学计量学的傣肾宁颗粒质量评价研究

目的:建立傣族经方傣肾宁颗粒的HPLC指纹图谱研究,并进行多成分含量测定。方法:采用Diamonsil C_(18)色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈-0.5%冰乙酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,建立傣肾宁颗粒的HPLC指纹图谱,利用化学计量法比较傣肾宁颗粒的质量一致性。采用HPLC法对丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、对香豆酸、迷迭香酸、丹酚酸B6个成分进行多成分含量测定。结果:11批傣肾宁颗粒共标定了32个共有峰,相似度均>0.98。并利用对照品指认了丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、对香豆酸、迷迭香酸、丹酚酸B6个共有峰。同步测定傣肾宁颗粒中6个成分的含量,其中迷迭香酸的含量最高,其次为丹参素和丹酚酸B。结论:建立的指纹图谱方法稳定可靠,多成分同步含量测定方法简便快捷,可用于傣肾宁颗粒的质量控制,为傣肾宁的后续研究奠定了坚实的基础。

中药肾毒宁颗粒对慢性肾衰大鼠肾保护作用及其机制的实验研究

目的观察肾毒宁方对5/6肾切除大鼠的肾保护的作用。方法将120只SD大鼠,随机分为假手术组20只和手术组100只,手术组行5/6肾切除术。术后2周,手术组随机分为模型组、肾毒宁低、中、高剂量组及西药科素亚阳性对照组,各组18只。各组于术后2周分别给予生理盐水、科素亚及相应剂量的肾毒宁颗粒灌胃。处死大鼠前留取大鼠尿标本。治疗12周后处死大鼠,腹主动脉采血,取肾组织应用免疫组化方法检测肾组织Ⅲ型胶原蛋白(C-Ⅲ)及纤维粘连蛋白(FN)表达,采用化学比色方法检测大鼠肾组织的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),并测定大鼠的血肌酐、血尿素氮变化情况,采用ELISA方法测定大鼠肾组织的MCP-1水平。结果与假手术组比较,模型组血肌酐、血尿素氮均显著增加,SOD显著下降,MDA显著上升,C-Ⅲ及FN表达明显(P<0.01);与模型组比较各治疗组肾功能显著改善,血肌酐、血尿素氮均显著下调,C-Ⅲ及FN表达减少(P<0.05),且呈剂量依赖关系;高剂量组与科素亚组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论肾毒宁能改善肾脏功能,抗肾纤维化,延缓肾脏病进展,其机理可能与通过抗氧化作用,下调肾脏C-Ⅲ及FN表达相关。

肾衰宁颗粒与中药保留灌肠治疗慢性肾衰的临床疗效对比

目的观察肾衰宁颗粒治疗慢性肾功能衰竭(CRF)的临床疗效。方法将64例慢性肾功衰竭的患者随机分为治疗组与对照组,观察肾衰宁颗粒对临床症状、体征和尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)的影响。结果治疗组总有效率明显高于对照组,治疗组临床疗效优于对照组(P<0.01)。两组BUN、SCr分别得到明显的改善,差异有显著性(P<0.05);治疗组疗效明显优于对照组(P<0.01)。结论肾衰宁颗粒可改善肾脏功能,延缓慢性肾衰的进展。

肾维宁颗粒对早中期糖尿病肾病患者血清TGF-β_1的影响

目的肾维宁颗粒对DN患者血清TGF-β1的影响;分析肾维宁颗粒防治早中期DN的作用机制。方法通过对41例早中期DN患者进行随机分组治疗,对照组20例,采用常规西药治疗。治疗组21例,在常规西药治疗基础上加用肾维宁颗粒,疗程8周。分别在治疗前、治疗后第8周检测患者血清TGF-β1水平的变化,同时观察BUN、SCr、24 h尿蛋白等指标。结果与治疗前比较,两组患者在治疗后的血清TGF-β1水平均有不同程度的下降;与对照组比较,治疗组血清TGF-β1水平的下降更为明显(p<0.05)。结论肾维宁颗粒可有效降低早中期DN患者血中TGF-β1的水平,有改善早中期糖尿病肾病患者肾功能、延缓DN进展的作用。

肾衰宁颗粒对不同分期糖尿病肾病患者肾功能影响研究

目的探讨肾衰宁颗粒对不同分期糖尿病肾病（DN）患者肾功能的影响.方法：选择我院2013年1月至2014年12月收治的80例DN早期、80例临床肾病期肾功能正常、80例临床肾病期肾功能不全作为研究对象,三个DN分期患者均按照随机数字表法分为替米沙坦组（n=40）和肾衰宁组（n=40）,在常规治疗的基础上替米沙坦组给予替米沙坦片治疗,肾衰宁组在替米沙坦组治疗的基础上加用肾衰宁颗粒治疗.治疗3个月后比较不同DN分期患者肾功能变化情况.结果：治疗后,各分期中肾衰宁组总有效率均显著高于替米沙坦组（P〈0.05）;DN早期及临床肾病期肾功能正常,肾衰宁组BUN、Scr、24hU-MA均明显降低,与替米沙坦组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;临床肾病期肾功能不全期,治疗后肾衰宁组BUN、Scr、24hU-MA均明显降低,与替米沙坦组比较,差异有统计学意义（p〈O.05）,替米沙坦组治疗前后Scr并无明显差异（JF）〉0.05）.结论：肾衰宁颗粒可明显改善不同分期DN患者的肾功能,且无严重不良反应发生,值得临床重视.