梓醇对急性肾损伤大鼠TLR4/NF-κB通路及肾小球内皮损伤的影响

目的:探究梓醇对急性肾损伤大鼠TLR4/NF-κB通路及肾小球内皮损伤的影响。方法:采用腹腔注射脂多糖的方法建立急性肾损伤大鼠模型,随机分为模型组、梓醇低(25 mg/kg)、中(50 mg/kg)、高(100 mg/kg)剂量组、地塞米松(5 mg/kg)组,每组12只,另取12只作为对照组,分组处理后,测定大鼠肾功能指标血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平;苏木精-伊红(HE)染色检测大鼠肾组织病理形态;以试剂盒检测大鼠血清TNF-α,IL-6水平及肾组织内皮细胞功能指标NO、内皮素1(ET-1)水平;蛋白免疫印迹法检测肾组织TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠肾组织明显水肿,可见炎症细胞浸润,肾小球严重皱缩,肾小管管腔变窄闭塞,细胞肿胀、空泡变性等病理损伤,血清Scr、BUN、TNF-α、IL-6水平、肾组织ET-1水平及TLR4、MyD88、核内NF-κB p65蛋白表达明显升高(P<0.05),肾组织NO水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,梓醇各剂量组及地塞米松组大鼠肾组织病理损伤减轻,血清Scr、BUN、TNF-α、IL-6水平、肾组织ET-1水平及TLR4、MyD88、核内NF-κB p65蛋白表达降低,肾组织NO水平升高,且梓醇各组之间呈剂量依赖性(P<0.05);梓醇高剂量组与地塞米松组相比,各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:梓醇可能通过抑制TLR4/NF-κB通路,抑制炎症反应,进而减轻肾组织及肾小球内皮损伤,改善急性肾损伤大鼠肾功能。

血小板微粒活化促进糖尿病肾病肾小球内皮细胞损伤

目的本研究拟探讨血小板微粒活化在糖尿病肾病早期肾小球内皮细胞损伤中的作用.方法8龄♂ SD大鼠随即分为3组：对照组（Control）、糖尿病组（DM）、糖尿病＋阿司匹林组（DM＋Aspirin）.糖尿病模型通过腹腔注射链脲佐菌素（STZ）60mg·kg^-1体重诱导,于8周处死老鼠,收集尿液、血浆、肾脏组织标本,提取血PMP.流式细胞仪检测血清血小板微粒（PMP）水平、电镜观察PMP形态.酶联免疫吸附（ELISA）测定各组大鼠尿微量白蛋白肌酐比（ACR）.蛋白芯片筛查各组PMP炎症因子的表达,并通过免疫组化及Westernblot观察炎症因子在肾脏中的表达.电镜观察肾小球内皮细胞表层（ESL）及窗孔的变化,麦胚凝集素染色观察ESL厚度,免疫荧光及Westernblot检测内皮细胞标志物、表面核心蛋白、细胞连接蛋白及细胞外基质的变化,以反映各组内皮细胞的损伤程度的差异.各组PMP水平及炎症因子表达与肾小球内皮损伤进行相关性分析,观察PMP对肾小球内皮细胞损伤的作用.结果与对照组比较,DM大鼠血清PMP水平明显增加,Aspirin减少糖尿病大鼠PMP的水平.同时,Aspirin明显降低了DM大鼠PMP、血清及肾脏中的炎症因子的表达.DM大鼠ACR明显高于对照组,Aspirin明显减少DM大鼠ACR的水平.DM组与对照组比较,肾小球内皮细胞ESL厚度减少、窗孔部分消失,内皮细胞特异性标志物、细胞连接蛋白及表面核心蛋白表达均明显减少,细胞外基质表达增加,而Aspirin可改善糖尿病大鼠的肾小球内皮细胞损伤.PMP水平及炎症因子的表达与肾小球内皮细胞损伤呈明显相关性.结论糖尿病肾病早期,血清PMP通过活化、释放炎症因子,诱导肾脏炎症反应,促进肾小球内皮细胞损伤,加速糖尿病肾病的进展.

抗中性粒细胞胞浆抗体相关抗原诱导人胎肾内皮细胞凋亡的研究

目的 探讨抗中性粒细胞胞浆抗体 (ANCA)相关抗原蛋白酶 3(PR 3)对体外培养人胎儿肾小球内皮细胞凋亡的影响及诱导机制。方法 采用ANCA阳性系统性红斑狼疮 (SLE)患儿外周血中性粒细胞分离纯化其细胞质中PR 3 ,并用该蛋白酶诱导培养人胎肾内皮细胞发生凋亡。观察不同剂量PR 3于不同时间点对内皮细胞存活情况及其形态学变化的影响。用碘化丙啶染色DNA以评价凋亡的发生率 ,观察核染色质固缩及DNA片段的形成。用琼脂糖凝胶电泳确定凋亡小体的形成和凋亡梯形。结果 ANCA阳性SLE患儿中性粒细胞胞浆蛋白酶PR 3以剂量、时间依赖性形式诱导人胎肾内皮细胞发生凋亡 [PR 3 10 μg·ml-1·2 4h-1细胞凋亡率为 (75 5± 2 6 5 ) % ],与阴性对照组 [(1 8± 1 2 ) % ]比较差异有显著性 (P <0 0 1)。凋亡的内皮细胞与培养基分离、悬浮、呈碘化丙啶强染的大小不等的碎片 ,核染色体固缩。DNA电泳提示凋亡核小体形成 ,出现凋亡梯形。结论 中性粒细胞胞浆蛋白酶PR 3可诱导胎肾内皮细胞凋亡 。