抵当汤含药血清对高糖诱导大鼠肾小球内皮细胞损伤的影响

目的观察抵当汤含药血清对高糖诱导损伤大鼠肾小球内皮细胞(RGECs)的保护作用。方法大鼠灌胃给予蒸馏水或抵当汤制备空白血清或抵当汤含药血清,CCK8法筛选葡萄糖造模浓度及含药血清给药浓度。将RGECs分为空白组、模型组、抵当汤组(10%抵当汤含药血清)、达格列净组(空白血清+2μmol/L达格列净)、抵当汤+达格列净组(10%抵当汤含药血清+2μmol/L达格列净),药物处理24 h后,RT-qPCR法和Western blot法检测细胞Nrf2、HO-1、NQO-1 mRNA和蛋白表达,免疫荧光法检测细胞Nrf2荧光表达,比色法检测细胞SOD活性及MDA水平。结果与空白组比较,模型组RGECs中Nrf2、HO-1、NQO-1 mRNA和蛋白表达以及SOD活性降低(P<0.01),MDA水平升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组Nrf2、HO-1、NQO-1 mRNA和蛋白表达以及SOD活性升高(P<0.05,P<0.01),MDA水平降低(P<0.01)。结论抵当汤含药血清可以通过激活Nrf2信号通路从而抑制氧化应激,对高糖损伤的RGECs起到保护作用。

毛兰素调节Slit2/Robo1信号通路对糖尿病肾病模型大鼠肾小球内皮细胞血管生成的影响

目的 探讨毛兰素对糖尿病肾病(DN)模型大鼠肾小球内皮细胞血管生成的影响及slit同源蛋白2(Slit2)/轴突导向受体蛋白1(Robo1)信号通路的作用。方法 采用高糖高脂饲料持续饲养雄性SD大鼠8周,ip给予链脲佐菌素35 mg·kg^(-1)制备DN大鼠模型。将DN模型大鼠分为模型组及模型+毛兰素10,20和40 mg·kg^(-1)组(ig给予毛兰素,持续8周),每组10只,同时设置正常对照组(ig给予0.5%羟甲基纤维素钠,持续8周)。尿蛋白定量试剂盒测定大鼠24 h尿蛋白水平,全自动生化分析仪检测血清空腹血糖(FPG)和血肌酐(Scr)水平,PAS染色观察大鼠肾组织病理变化,免疫荧光法检测肾组织血小板内皮细胞黏附分子31(CD31)和足细胞标志蛋白(PCX)表达水平,Western印迹法检测肾组织Slit2和Robo1蛋白表达。结果 与正常对照组比较,模型组大鼠FPG、Scr和24 h尿蛋白水平以及肾组织CD31、Slit2和Robo1蛋白表达显著升高(P<0.01);肾组织新增肾小球毛细血管,并出现肾小球肥大和系膜面积扩张,存在非管状CD31染色,缺少相邻PCX染色,以及部分CD31管状区域染色也缺乏相邻的PCX染色。与模型组比较,模型+毛兰素10,20和40 mg·kg^(-1)组大鼠FPG、Scr和24 h尿蛋白水平及肾组织CD31、Slit2和Robo1蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01);肾组织新增肾小球毛细血管、肾小球肥大和系膜面积扩张现象减轻,CD31管状区域染色与PCX足细胞区域染色基本相邻。结论 毛兰素可能通过抑制Slit2/Robo1信号通路而抑制DN模型大鼠肾小球内皮细胞血管生成。

流体剪切力通过激活Piezo 1蛋白促进肾小球内皮细胞凋亡

目的探讨流体剪切力(FS)对肾小球内皮细胞(GECs)凋亡的影响及Piezo 1蛋白在其中的作用。方法对SD大鼠肾小球内皮细胞进行培养,使用Flexcell-T5000拉力仪模拟流体剪切力刺激,使用流式细胞测量技术检测细胞凋亡水平,通过免疫荧光染色试验检测Piezo 1蛋白在GECs中的表达水平。使用Ca 2+指示剂(Cal-590 AM)观察流体剪切力对Piezo 1通道的激活作用。使用化学激动剂Yoda1、抑制剂GsMtx 4及慢病毒Lv-shPiezo 1调控Piezo 1蛋白功能或表达后,观察Piezo 1对GECs凋亡的影响。结果与对照组相比,剪切力组细胞凋亡率增高(P<0.05),且随着流体剪切力强度升高,细胞凋亡率增高;Piezo 1在GECs中普遍表达,且流体剪切力可以激活Piezo 1通道并增强其表达;激动剂Yoda 1可以促进GECs的凋亡,抑制剂GsMtx 4可以抑制流体剪切力诱导的凋亡;Lv-shPiezo 1敲低GECs中Piezo 1的表达,且敲低组GECs的凋亡率较对照组及Lv-Ctrl组降低(P<0.05)。结论流体剪切力通过激活Piezo 1蛋白及增强其表达促进GECs的凋亡。

芪地糖肾方调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导高糖刺激肾小球内皮细胞焦亡的研究

目的 探究芪地糖肾方通过NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1/消皮素D蛋白(NLRP3/Caspase-1/GSDMD)通路介导高糖刺激的肾小球内皮细胞焦亡的作用。方法 将肾小球内皮细胞分为正常组、高糖组、芪地糖肾方组,分别予完全培养基、30 mmol/L高糖培养基、30 mmol/L高糖培养基+芪地糖肾方100μg/mL培养48 h,采用细胞免疫荧光染色法观察细胞中NLRP3表达情况及细胞骨架情况,采用Western blot法检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、消皮素D蛋白(GSDMD)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)表达情况。结果 与正常组比较,高糖组细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC、IL-18、IL-1β蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),NLRP3荧光表达信号增强,细胞骨架损伤明显;与高糖组比较,芪地糖肾方组NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC、IL-18、IL-1β蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),NLRP3荧光表达信号减弱,细胞骨架损伤状态改善。结论 芪地糖肾方可通过抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡相关通路激活改善高糖诱导的肾小球内皮细胞损伤。

益肾胶囊对慢性肾小球肾炎患者血清血管内皮生长因子及细胞免疫的影响

目的:探讨益肾胶囊对慢性肾小球肾炎患者血清血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和细胞免疫的影响及疗效。方法:检测了30例健康查体者和83例患者治疗前后VEGF和T淋巴细胞亚群的改变。结果:慢性肾炎患者治疗前CD3,CD4,CD4/CD8降低,CD8和血清VEGF水平明显增高(P<0.05或P<0.01)。经过3个月的治疗其CD8和血清VEGF水平明显降低,CD4/CD8比例上升(P<0.05或P<0.01);其总有效率为90.4%。结论:益肾胶囊具有降低慢性肾小球肾炎患者尿蛋白、提高患者免疫功能,改善临床症状,从而起到延缓慢性肾小球硬化进程的作用。

血管内皮细胞生长因子对肾小球内皮细胞通透性的影响

目的 :观察血管内皮细胞生长因子 (VEGF)对肾小球内皮细胞通透性的影响 ,并与脐静脉内皮细胞进行比较分析。 方法 :采用二室弥散系统检测内皮细胞通透性。肾小球内皮细胞 (MGEC)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)接种于细胞培养嵌套的微孔滤膜 (孔径 0 4 5 μm)上 ,待细胞生长融合后 ,加入不同浓度的VEGF作为处理因素 ,以生物素标记的牛血清白蛋白 (biotin BSA)作为通透性指示剂 ,采用ELISA方法检测不同时间段biotin BSA通过细胞单层的百分数。 结果 :正常培养条件下 ,生长在滤膜上的MGEC和HUVEC单层的通透性没有明显差异。VEGF可显著增加MGEC和HUVEC的通透性 ,呈剂量和时间依赖性。 1μg/LVEGF作用 12h可使MGEC对白蛋白的通透率增加近 2 5 % (0 31± 0 0 3vs 0 2 5± 0 0 3) ;VEGF浓度达 10 μg/L始显著增加HUVEC通透性 (0 2 8± 0 0 7vs0 2 1± 0 0 4 ) ,且远小于MGEC通透性增加的幅度 (P <0 0 1) ;VEGF浓度达 5 0 μg/L时 ,其增加内皮细胞通透性的作用基本达到饱和。 5 0 μg/LVEGF作用 0 5h即可使MGEC和HUVEC的蛋白通透率分别增加 10 0 % (0 12± 0 0 2vs0 0 6± 0 0 1)和 6 0 % (0 0 8± 0 0 3vs0 0 5± 0 0 1) ,并至少持续到 12h。 结论

山奈酚对高糖条件下人肾小球内皮细胞氧化应激及凋亡的影响

目的观察山奈酚对高糖条件下人肾小球内皮细胞氧化应激及凋亡的影响。方法 2016年4月—2018年8月于陕西省人民医院中心实验室进行实验。培养人肾小球内皮细胞后分为5.5 mmol/L葡萄糖处理的对照组、30.0 mmol/L葡萄糖处理的高糖组、30.0 mmol/L葡萄糖+山奈酚50μmol/L处理的山奈酚组,测定活性氧(ROS)、凋亡率、氧化应激及凋亡基因的表达水平。结果高糖组的ROS含量、凋亡率及NOX2、NOX4、Nrf2、HO-1、Bax、VDAC1的mRNA表达水平均明显高于对照组(t/P=6.321/0.000、7.141/0.000、5.324/0.001、6.103/0.000、4.203/0.003、4.748/0.001、5.325/0.001、5.884/0.000),HK-II、Bcl-2的mRNA表达水平均明显低于对照组(t/P=7.125/0.000、6.718/0.000);山奈酚组的ROS含量、凋亡率及NOX2、NOX4、Bax、VDAC1的mRNA表达水平均明显低于高糖组(t/P=3.518/0.008、5.349/0.001、2.643/0.030、2.647/0.029、2.492/0.037、2.440/0.041),Nrf2、HO-1、HK-II、Bcl-2的mRNA表达水平均明显高于高糖组(t/P=3.308/0.011、2.833/0.022、4.828/0.001、3.923/0.000)。结论山奈酚对高糖条件下人肾小球内皮细胞氧化应激及凋亡具有抑制作用。

血管内皮生长因子、细胞间黏附分子1在糖尿病大鼠肾小球的表达

目的 探讨血管内皮生长因子 (VEGF)和细胞间黏附分子 1 (ICAM 1 )在糖尿病肾病 (DN)发生机理中的作用。方法 采用链脲佐菌素 (STZ)诱发糖尿病 (DM)大鼠模型 ,观察大鼠肾小球肥大、肾功能和 2 4h尿蛋白改变以及用免疫组织化学和计算机图像分析技术定位、半定量检测VEGF和ICAM 1在DM大鼠肾小球的表达。结果 VEGF和ICAM 1在糖尿病大鼠肾小球中均有不同程度表达 ,VEGF主要分布于肾小球脏层上皮细胞的胞浆之中 ,ICAM 1主要分布于肾小球内皮细胞和系膜细胞的胞浆中。VEGF、ICAM 1水平与蛋白尿和肾小球肥大呈正相关关系。结论 DM大鼠肾小球VEGF和ICAM 1的升高可能参与了DN的疾病发展过程 ,估计是糖尿病肾病发生机理之一。

高浓度的糖刺激人肾小球内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白-1的影响

目的 :探讨高浓度的糖对培养的人肾小球内皮细胞 (HUGEC)表达单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)的影响 ,以及HUGEC的条件培养基对单核细胞 (MC)的趋化作用及抗MCP 1抗体对MC迁移的影响。方法 :采用原位杂交技术和细胞ELISA法 ,观察MCP 1的表达 ;用改良的Boyden小室微孔滤膜法 ,测定高浓度的糖刺激HUGEC后的条件培养基 ,对MC的趋化作用 ,以及抗MCP 1抗体对MC迁移的影响。结果 :(1)在低浓度的糖(含 5 .5mmol/LD 葡萄糖 )条件下培养的HUGECMCP 1mRNA呈弱表达。高浓度的糖 (含 2 5mmol/LD 葡萄糖 )刺激后 ,8h即出现MCP 1表达增强 ,于 16h达高峰。(2 )高浓度的糖刺激HUGEC后的条件培养基 ,对MC具有明显的趋化作用 ;抗MCP 1抗体可抑制其作用。结论 :在高浓度的糖诱导下 ,人HUGECMCP 1的表达增强 ,其条件培养基对MC具有趋化作用 ,从而可能招引单核细胞迁入内皮下间隙。

高糖对培养肾小球内皮细胞细胞膜流动性影响的研究

目的 观察高糖状态下肾小球内皮细胞过氧化损伤与内皮细胞膜流动性改变的关系。方法 采用体外人肾小球内皮细胞培养 ,八木组织测量之TBA法测定脂质过氧化产物丙二醛 ,Prendergast法测定细胞膜流动性 ,Fura 2双波长荧光法检测细胞内钙离子含量的变化。结果 高糖对肾小球内皮细胞可致过氧化损伤 ,使细胞膜流动性明显增高 ,细胞内钙含量增加 ,随着培养时间的延长 ,糖浓度愈高 ,作用愈明显。结论 高糖致内皮细胞过氧化损伤影响细胞膜流动性改变 ,可能是糖尿病肾病发生的始动因素。

肾康注射液对肾小球内皮细胞增殖及自分泌FN效应的影响

目的：探讨肾康注射液阻抑肾小球硬化、防治慢性肾功能衰竭的部分作用机理，为其临床应用提供依据。方法：采用血清药理学方法，观察肾康注射液对体外培养人肾小球内皮细胞增殖及其自分泌ＦＮ水平的影响。结果：肾康注射液及其含药血清对肾小球内皮细胞增殖及其自分泌 ＦＮ有明显抑制作用（Ｐ＜０．０１），且呈量效依赖关系，肾康注射液与肝素合用，协同抑制肾小球内皮细胞增殖、自分泌 ＦＮ水平（ Ｐ＜ ０． ０５）。结论：肾康注射液对肾小球内皮细胞的抑制效应，显示其新的药理作用位点。对肾小球内皮细胞增殖的抑制效应是肾康注射液活血功效的具体形式之一，对肾小球内皮细胞自分泌ＴＮ的抑制效应是其泄浊功效的具体形式之一。

整合素αvβ3-RGDS位点相互作用介导纤维蛋白所致的肾小球内皮细胞表型变化

观察了体外培养的人类肾小球内皮细胞（ＧＥＣ）在纤维蛋白凝胶上的生长状态，以及在ＧＥＣ表面覆盖纤维蛋白凝胶对ＧＥＣ表型的影响，并进行了干预试验。结果发现，ＧＥＣ在纤维蛋白凝胶包被的细胞培养板上培养可以自发地形成典型的血管样结构。αｖβ３整合素单抗２３Ｃ６可以显著促进纤维蛋白介导的血管样结构的形成，而精氨酰－甘氨酰－天门冬氨酰－丝氨酸（ＲＧＤＳ）四肽、放线菌酮、放线菌素Ｄ对血管样结构的形成具有抑制作用（Ｐ＜０．００１）。在融合态ＧＥＣ细胞单层表面原位形成ｄｅｓ－ＡＡ－纤维蛋白或ｄｅｓ－ＡＡＢＢ－纤维蛋白凝胶均可引起ＧＥＣ单层结构破坏，肝素、放线菌酮、放线菌素Ｄ、非免疫小鼠ＩｇＧ以及精氨酰－甘氨酰－甘氨酰－丝氨酸（ＲＧＧＳ）四肽不能阻断纤维蛋白诱导的ＧＥＣ单层结构破坏，而２３Ｃ６、ＲＧＤＳ四肽可以完全阻断上述改变。说明αｖβ３整合素－ＲＧＤＳ位点相互作用介导了纤维蛋白所致ＧＥＣ单层结构破坏和血管样结构形成，ＲＧＤＳ四肽防治纤维蛋白所诱发的ＧＥＣ表型变化可能具有潜在的价值。

纤维蛋白对肾小球内皮细胞表达胞间粘附分子-1的影响及其机制探讨

观察体外培养的肾小球内皮细胞（ＧＥＣ）表面原位形成纤维蛋白凝胶对ＧＥＣ表达胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）的影响。结果：８５％～９３％在无血清ＲＰＭＩ１６４０培养液中培养的ＧＥＣ表达ＩＣＡＭ－１阳性。纤维蛋白显著促进ＧＥＣ表达ＩＣＡＭ－１（Ｐ＜０．０１），呈现明显的剂量、时间依赖关系。放线菌酮和放线菌素Ｄ均可阻断纤维蛋白诱导的ＩＣＡＭ－１表达增强，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交显示，纤维蛋白刺激ＧＥＣ４ｈ可诱导ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ的表达增强。立止血催化形成的ｄｅｓ－ＡＡ－纤维蛋白与凝血酶催化形成的ｄｅｓ－ＡＡＢＢ－纤维蛋白对ＧＥＣ表达ＩＣＡＭ－１的影响差异无显著性意义，而且肝素对纤维蛋白介导的ＩＣＡＭ－１表达增强没有阻抑作用。说明纤维蛋白促进ＧＥＣ表达Ｉ－ＣＡＭ－１呈时间－剂量依赖性，并与基因的转录和翻译有关。

参地颗粒对慢性肾炎脾肾亏虚证患者肾小球内皮细胞的干预作用

目的观察参地颗粒治疗慢性。肾小球肾炎（CGN）脾肾亏虚证患者的疗效及机制。方法采用前瞻性研究方法，选择安徽中医药大学第一附属医院2014年9月至2016年3月收治的CGN脾肾亏虚证患者70例，按随机数字表法分为西药对照组和参地颗粒组，每组35例；最后实际完成64例（西药对照组32例，参地颗粒组32例），选取同期本院体检的20例健康志愿者作为健康对照组。西药对照组给予缬沙坦80mg，每日1次；参地颗粒组服用参地颗粒，每次1袋（每袋10g），每日3次，疗程均为8周。观察参地颗粒组和西药对照组的临床疗效和中医证候疗效，于治疗前和治疗8周后观察患者24h尿蛋白定量及血清肾小球内皮细胞损害标志物血管性血友病因子（vWF）、可溶性血管内皮细胞蛋白C受体（sEPCR）水平的变化。结果参地颗粒组临床疗效总有效率【87．50％（28／32）比68．75％（22／32）]和中医证候疗效总有效率（90．62％（29／32）比62．50％（20／32）]均明显高于西药对照组（均P〈0．05）。参地颗粒组和西药对照组治疗后24h尿蛋白定量较治疗前降低，且参地颗粒组的降低程度较西药对照组更显著（g／24h：0．85±0．51比1．12±0．62，P〈0．05）；参地颗粒组和西药对照组治疗前vWF、sEPCR水平均高于健康对照组，但两组治疗后均较治疗前降低，且以参地颗粒组的降低程度更明显[vWF（μg／L）：99．35±11．14比120．14±12．03，sEPCR（μg／L）：112．35±11．62比134．76±12．14，均P〈0．05]。结论参地颗粒可改善CGN脾肾亏虚证患者的临床症状，减少尿蛋白，其作用机制可能与降低血清vwF、sEPCR水平有关。

低分子肝素和尿激酶对老年大鼠肾小球内皮细胞损伤保护作用的比较

目的探讨炎症状态下增龄对肾小球内皮损伤的影响,比较低分子肝素和尿激酶对损伤的保护作用。方法3月龄及27月龄雌性Wistar大鼠各40只,随机分为正常对照组(NC组)、脂多糖(LPS)组(L组)、LPS+氨甲环酸组(LT组)、LPS+氨甲环酸+低分子量肝素组(LTH组)及LPS+氨甲环酸+尿激酶组(LTU组)。采用直接免疫荧光检测肾小球纤维蛋白沉积,Western印迹法检测血管内皮血栓调节蛋白(TM),纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)蛋白质表达。结果(1)LPS刺激后纤维蛋白沉积增多(P<0.05),TM几乎无表达(P<0.01),PAI-1表达明显上调(P<0.05);(2)加用氨甲环酸后,PAI-1表达进一步上调(P<0.05);(3)应用低分子肝素和尿激酶后纤维蛋白沉积明显减轻(P<0.05),PAI-1表达与LT组比较明显下调(P<0.05),TM表达增多(P<0.05),两组之间无统计学差异。(4)老年大鼠各组肾小球纤维蛋白沉积均比相同干预组的青年大鼠明显,PAI-1的表达均较青年大鼠相同干预组显著增多,TM表达则显著减少,差别均有统计学意义(P<0.05)。结论增龄可加重LPS诱导的肾小球内皮损伤;低分子肝素与尿激酶均能有效保护老年大鼠肾小球血管内皮损伤,两者无明显差别,但增龄可减弱低分子肝素和尿激酶对血管内皮的保护作用。

高糖环境下肾小球系膜细胞和内皮细胞相互作用对活性氧产生的影响以及茶多酚的干预作用

目的 :探讨在高糖环境下肾小球系膜细胞与内皮细胞相互作用对活性氧产生的影响和茶多酚的干预作用。方法 :系膜细胞和内皮细胞单独分别培养和共同培养 ,分正常对照组、高糖组及茶多酚干预组 ,培养 0、12、3 6h后 ,用分光光度法检测培养液中丙二醛 (MDA)含量及超氧化物歧化酶 (SOD)活性。结果 :高糖共同培养时SOD活性比两者分别单独培养时更低(P <0 .0 1) ;共同培养时茶多酚干预组的SOD活性显著高于高糖组 (P <0 .0 1)。高糖共同培养时MDA含量较两种细胞单独培养明显增高 ,高于两种细胞单独培养的总和 (P <0 .0 1) ;共同培养时茶多酚干预组MDA含量低于高糖组 (P <0 .0 1)。结论 :( 1)高糖环境下 ,系膜细胞和内皮细胞存在相互作用 ,这种作用能促进肾细胞活性氧的产生 ;( 2 )

MCP-1对培养的人肾小球内皮细胞表达ICAM-1的影响

目的研究单核细胞趋化蛋白 - 1(MCP- 1)对培养的人肾小球内皮细胞 (HU GEC)表达细胞间粘附分子 - 1(ICAM- 1)的影响。方法采用细胞 EL ISA法。结果 1培养的 HU GEC表面有少量 ICAM- 1表达 ,在 10 ng/ m L MCP- 1刺激后 ICAM- 1表达量增多 (P<0 .0 5 ) ,6 h即有 ICAM- 1表达增强 ,12 h达高峰 ,不同浓度的 MCP- 1(10、2 0、40 ng/ m L)刺激HU GEC18h后 ,ICAM- 1表达与对照组比较差异显著 (P<0 .0 1) ;2加入抗 MCP- 1抗体后 ,ICAM- 1表达量下降 ,与对照组比较无差异 (P>0 .0 5 )。结论 MCP- 1可刺激 HU GEC表达 ICAM- 1增加。

参地颗粒对系膜增生性肾小球肾炎大鼠内皮细胞的干预作用

目的观察参地颗粒对系膜增生性肾小球肾炎(Ms PGN)模型大鼠血管性血友病因子(v WF)和可溶性血管内皮蛋白C受体(s EPCR)水平的影响,探讨参地颗粒对Ms PGN大鼠内皮细胞的保护机制。方法采用改良慢性血清病法复制Ms PGN模型,将45只SD大鼠随机分为正常组(n=10)、模型组(n=11)、参地颗粒组(n=12)和缬沙坦组(n=12)。参地颗粒组按0.4 g/(100 g·d)灌胃,缬沙坦组按1.03 mg/(100 g·d)剂量灌胃,正常组及模型组给予等量温水灌胃,疗程为12周。检测各组大鼠24 h尿蛋白定量(U-Pro/24 h)、肾组织病理、血清v WF和s EPCR水平及肾组织中v WF蛋白含有量的表达情况。结果模型组大鼠U-Pro/24 h、血清v WF和s EPCR水平及肾组织中v WF蛋白含有量均高于正常组(P<0.05),治疗后参地颗粒组、缬沙坦组均低于模型组(P<0.05),参地颗粒组优于缬沙坦组(P<0.05)。肾组织病理示参地颗粒组、缬沙坦组肾小球系膜细胞和系膜外基质聚集均较治疗前减少,参地颗粒组优于缬沙坦组。结论参地颗粒可以降低Ms PGN大鼠尿蛋白定量,减轻肾脏病理损害,其机理可能与降低内皮细胞损伤标志物v WF及s EPCR有关。

内皮祖细胞移植对延缓大鼠进展性局灶节段性肾小球硬化的实验研究

目的骨髓来源的内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)对阿霉素诱导的局灶节段性肾小球硬化模型进行干预,研究EPC的治疗作用。方法雄性大鼠骨髓的单个核细胞贴壁法培养6d,经鉴定为EPC。雌性SD大鼠分为正常对照组、阿霉素肾病组和EPC移植组。肾病组、EPC组单肾切除,术后1周和2周分别尾静脉注射阿霉素,对照组假手术并在相同时间注射生理盐水。EPC组于第二次注射后1周,5GyX线全身照射后静脉移植1×106的EPCs,对照组和肾病组仅行同等剂量的照射和生理盐水注射。在切肾前(0周)和切肾后的第4(即EPC移植后1周)、8、12、16周测大鼠体重、尿蛋白定量,眼球取血测血清肌酐(Scr)、白蛋白(ALB),原位杂交观察肾组织中Y染色体阳性细胞整合情况;观察肾脏超微结构和组织学变化,图像分析计算肾小球硬化指数、肾小球毛细血管管腔开放程度及毛细血管襻截面积。结果第4周和16周,肾组织中均可见Y染色体的阳性表达,主要位于肾小球和肾小管上皮细胞。16周时肾病组肾小球轻度至中度系膜细胞增生,基质中度至重度增生并呈弥漫性分布,肾小球节段性或球性硬化;EPC组部分肾小球系膜细胞及系膜基质呈局灶性轻度增生,硬化的肾小球数量少,间质纤维组织较肾病组轻;电镜结果显示EPC组病变较肾病组轻微,足细胞修复出现早;图像分析显示,肾小球硬化指数肾病组显著高于EPC组,毛细血管腔开放程度与毛细血管襻截面积EPC组显著高于肾病组,但仍低于对照组。结论EPC移植可以减轻肾脏病理损害,具有延缓阿霉素诱导的肾小球硬化的作用。

大鼠肾小球内皮细胞培养及高糖对其分泌NO的影响

目的进行大鼠肾小球内皮细胞体外培养和鉴定,并观察高糖对其分泌一氧化氮(nitricoxide,NO)的影响。方法利用不同目数的筛网从大鼠肾皮质分离肾小球,Ⅳ型胶原酶消化后用内皮细胞培养液培养。待细胞自肾小球内长出,以套环或挑克隆的方法纯化,在倒置显微镜下观察细胞形态,分别用Ⅷ因子相关抗原抗体和CD31荧光抗体对纯化后的细胞进行鉴定。不同浓度的高糖作用于培养的肾小球内皮细胞,Griess法检测各时相点培养液中NO的含量。结果倒置显微镜下观察纯化后的细胞为单层排列,似鹅卵石状,Ⅷ因子相关抗原抗体免疫组化染色和CD31荧光抗体染色阳性。高糖可以引起肾小球内皮细胞NO分泌减少,并呈浓度和时间依赖性。结论利用过筛法分离肾小球并在特定条件下进行培养、纯化,成功培养大鼠肾小球内皮细胞。高糖可以导致肾小球内皮细胞NO释放减少,这可能与糖尿病肾病的发生有关。