IgA肾病肾小球系膜区Ⅳ型胶原的表达及定量研究

探讨肾小球系膜区Ⅳ型胶原的含量与IgA肾病(IgAN)肾小球硬化的关系。方法 应用标记的链亲和素-生物素(LSAB)免疫组化技术,检测了46例IgAN肾小球系膜区Ⅳ型胶原的阳性表达及分布情况,并应用HPIAS系列高清晰度彩色病理图像分析系统对Ⅳ型胶原进行了定量研究和分析。结果 IgAN的Ⅳ型胶原在肾小球系膜区的含量显著增加,并随着病理变化的加重,其阳性表达强度及面积也相应增加。结论 肾小球系膜区Ⅳ型胶原含量的增加是IgAN肾小球硬化的重要标志之一。根据其含量的多少,可间接反映病情活动、病变进展及预后,具有较高的临床实用价值。

咪唑立宾对急性肾炎大鼠肾小球系膜区Ⅳ型胶原的影响

目的探讨咪唑立宾对急性Thy1肾炎大鼠肾小球系膜区Ⅳ型胶原(COL4)的影响。方法将81只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和咪唑立宾组,每组27只。第5天,比较3组大鼠24 h尿蛋白定量,采用PAS染色评估3组大鼠肾小球系膜区细胞外基质(ECM)增殖情况,采用PCR检测3组大鼠肾小球系膜区COL4 mRNA表达水平,采用Western blot检测3组大鼠肾小球系膜区COL4蛋白表达水平。结果对照组大鼠平均24 h尿蛋白定量、肾小球系膜区基质与肾小球面积比值(ECM/GA)、系膜区COL4 mRNA表达水平、系膜区COL4蛋白表达水平均低于模型组和咪唑立宾组,咪唑立宾组以上各指标均低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论咪唑立宾抑制系膜增生的机制可能是下调COL4 mRNA及蛋白的表达。

IgA肾病伴系膜区Ⅲ型胶原沉积2例

型胶原(typeⅢcollagen,ColⅢ)作为间质胶原在正常肾小球内无分布,但Ⅲ型胶原肾病时大量胶原沉积于肾小球系膜区及内皮下。IgA肾病合并Ⅲ型胶原沉积极为罕见。本文报道了2例IgA肾病合并Ⅲ型胶原沉积的患者,经过免疫抑制治疗或中药汤剂治疗后,肾功能稳定且尿蛋白水平均明显下降。

虫草多糖含药血清对TGF-β_1诱导的肾小球系膜细胞增殖及Ⅳ型胶原表达的影响

目的观察虫草多糖(CP)含药血清对TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞增殖及Ⅳ型胶原表达的影响,探讨CP治疗慢性肾衰肾小球纤维化的机制。方法结合血清药理学方法制备CP含药血清样品,用TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞增殖,试验分空白对照组、对照组、高、中、低浓度5组,MTT法检测HMC的增殖及抑制率,ELISA法检测正常人肾小球系膜细胞株(HMC)中Ⅳ型胶原表达。结果CP含药血清均可明显抑制TGF-β1诱导的HMC增殖,含药血清可明显抑制TGF-β1诱导的HMC中Ⅳ型胶原的表达,以高、中浓度组最显著(P<0.01)。结论CP含药血清可明显抑制TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞增殖及Ⅳ型胶原表达,这可能是CP治疗慢性肾衰的机理之一。

Ⅳ型胶原和金属蛋白酶组织抑制剂-1在肾小球系膜细胞中的表达及福辛普利干预的意义

目的探讨Ⅳ型胶原(ColⅣ)及金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)在脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)中的表达及血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)福辛普利(FOS)干预的意义。方法建立体外培养的大鼠GMC,鉴定后3～10代用于实验。实验分为5组。对照组:仅加正常培养液;LPS组:加正常培养液及10μg/LLPS;FOS高、中、低剂量组:除正常培养液及10μg/LLPS外,分别加FOS1×10-4mol/L(FOS1组)、1×10-6mol/L(FOS2组)、1×10-8mol/L(FOS3组)。各组细胞培养6、12和24h后采用ELISA法测定细胞培养上清液中ColⅣ和TIMP-1蛋白表达量,收集细胞提取RNA,采用实时荧光定量RT-PCR法检测其TIMP-1mRNA表达的变化。结果1.正常培养的大鼠GMC均有一定量的ColⅣ和TIMP-1蛋白表达;LPS组在各时间点ColⅣ和TIMP-1蛋白分泌均高于对照组(Pa<0.01),而FOS各组ColⅣ和TIMP-1蛋白分泌均低于LPS组(Pa<0.01)。2.正常培养的大鼠GMC可表达一定量TIMP-1mRNA,LPS组在各时间点TIMP-1mRNA表达量均高于对照组,FOS各组表达量均低于LPS组。结论FOS抑制LPS诱导的GMC分泌ColⅣ,从蛋白和mRNA水平抑制LPS诱导的大鼠TIMP-1表达,而TIMP-1是调节ColⅣ降解的重要因子,为FOS的肾脏保护作用机制提供理论依据。

百令胶囊对大鼠肾小球系膜细胞增殖、Ⅳ型胶原及TGF-β_1 mRNA表达的影响

目的:观察百令胶囊对高糖刺激后系膜细胞增殖、Ⅳ型胶原(typeⅣCollagen,ⅣC)、转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达的影响。方法:培养正常SD大鼠系膜细胞,高浓度葡萄糖刺激系膜细胞,加入百令胶囊、苯那普利含药血清后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)光吸收法观察肾小球系膜细胞增殖;酶联免疫吸附法(ELISA)测量培养细胞上清液中ⅣC的含量;实时荧光逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)测定TGF-β1mRNA的表达。结果:百令胶囊、苯那普利含药血清在24 h可抑制高糖对大鼠肾小球系膜细胞的促增殖作用,72 h最为明显(P<0.01);高糖刺激后ⅣC、TGF-β1mRNA在肾小球系膜细胞内表达增多(P<0.01),百令胶囊、苯那普利含药血清能明显抑制肾小球系膜细胞增殖(P<0.01)、ⅣC分泌及TGF-β1mRNA的高表达(P<0.05)。百令胶囊与苯那普利组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:百令胶囊可降低高糖致系膜细胞增殖,抑制高糖所致ⅣC分泌,抑制高糖引起的TGF-β1mRNA过度表达,这可能是其防治糖尿病肾病的作用机制。

虫草肾茶胶囊对肾小球系膜细胞增殖及分泌Ⅳ型胶原的影响

目的:研究虫草肾茶胶囊对培养在高糖条件下系膜细胞(HMC)增殖及细胞上清液中胶原纤维(Col-IV)的表达影响,探讨其在糖尿病肾病(DN)防治中的意义。方法:利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法动态观察各种处理因素的作用下各组HMC增殖情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定经体外培养的人肾小球系膜细胞在各种处理因素的作用下上清液中IV型胶原的表达情况,并以福辛普利为对照。结果:高糖能明显刺激体外培养的HMC增殖,同时促进HMC分泌Col-IV(P<0.05或P<0.01)。而虫草肾茶胶囊能抑制HMC增殖及HMC分泌Col-IV,并呈一定量效关系(P<0.05或P<0.01),且某些方面明显优于福辛普利。结论:高糖可促进HMC增殖及Col-IV分泌,虫草肾茶胶囊能明显抑制高糖条件下HMC增殖及其分泌Col-IV,从而发挥预防肾小球纤维化及硬化的发生、发展,进而延缓DN的进展。

单宁酸对高糖及AGEs引起肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原生成的影响

目的观察单宁酸(tannic acid,TA)对高糖及糖化终产物(AGEs)引起的肾小球系膜细胞(GMC)增殖和Ⅳ型胶原生成的影响。方法体外培养肾小球系膜细胞,分别用高浓度葡萄糖(30 mmol/L)、不同浓度AGEs(25、50、100、200及400 mg/L)处理,同时用不同浓度单宁酸(10、20、40及80μmol/L)进行干预,设立相应对照组,于不同时间段(24、48 h)用MTT法检测肾小球系膜细胞的增殖情况,ELISA法检测培养48 h后条件培养基中Ⅳ型胶原的含量。结果葡萄糖及AGEs均能明显促进系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的生成,与对照组比较具有显著差别。单宁酸可明显抑制高糖或AGEs引起的系膜细胞增殖,能减少Ⅳ型胶原的生成,并呈一定浓度依赖关系。结论单宁酸能抑制高糖或AGEs引起的GMC增殖,并能减少Ⅳ型胶原生成。

川芎嗪对转化生长因子β_1诱导的人肾小球系膜细胞增殖及Ⅳ型胶原分泌的影响

目的观察川芎嗪对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肾小球系膜细胞增殖及Ⅳ型胶原分泌的影响。方法采用TGF-β1诱导肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原表达以模拟肾脏疾病中的细胞纤维化,实验分为5组:空白组,对照组,川芎嗪高、中、低剂量(终浓度分别为100、30、10μg/ml)组。MTT法检测肾小球系膜细胞的增殖抑制率,ELISA法检测肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原的表达。结果川芎嗪高剂量(100μg/ml)能够抑制TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞增殖(P<0.01);川芎嗪可抑制TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞中Ⅳ型胶原的表达,以高剂量组(100μg/ml)效果最为显著(P<0.01)。结论川芎嗪可抑制TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞增殖及Ⅳ型胶原分泌。

SOCS2基因转染对人肾小球系膜细胞TGF-β、Ⅳ型胶原蛋白、纤维连接蛋白表达的影响

目的观察过表达细胞因子信号转导抑制因子(SOCS2)对人肾小球系膜细胞(HMCs)中转化生长因子β(TGF-β)、Ⅳ型胶原蛋白(CollagenⅣ)、纤维连接蛋白(FN)表达的影响,并探讨其可能机制。方法体外培养HMCs,分为A、B、C、D、E、F组,A、B组分别加入Ad-SOCS2病毒液(含SOCS2的腺病毒病毒液)、Ad-null病毒液(只含腺病毒的病毒液),24 h后将培养液更换成高糖培养液;C组加入30 mmol/L的D-葡萄糖;D、E组分别加入Ad-SOCS2病毒液、Ad-null病毒液,24 h后将培养液更换成常规培养液;F组加入5.5 mmol/L的D-葡萄糖+24.5mmol的D-甘露醇。Western blotting法检测各组TGF-β、CollagenⅣ、FN及贾纳斯激酶2(JAK2)、信号传导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化贾纳斯激酶2(p-JAK2)、磷酸化信号传导及转录激活因子3(p-STAT3)。结果与F组比较,A、B、C组TGF-β、CollagenⅣ、FN、p-JAK2、p-STAT3的相对表达量升高;与C组比较,A组TGF-β、CollagenⅣ、FN、p-JAK2、p-STAT3的相对表达量降低;P均<0.01。结论 SOCS2通过抑制JAK/STAT信号通路来下调HMCs中TGF-β、CollagenⅣ、FN表达。

苯那普利对系膜增生性肾小球肾炎患者血清层粘蛋白及Ⅳ型胶原的影响

目的 探讨苯那普利对系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)患者细胞外基质(ECM)成分的抑制作用。 方法 60例MsPGN患者分成一般治疗组和苯那普利治疗组 ,治疗前后采用放射免疫法检测血清层粘蛋白(Laminin,LN)和Ⅳ型胶原(CollagenⅣ,ColⅣ)水平并比较各组差异。结果 MsPGN患者血清LN、ColⅣ水平高于正常对照组(均P<0.01)。苯那普利能下调MsPGN患者血清LN和ColⅣ水平(治疗前后比较均P<0.01) ,而一般治疗组治疗前后血清LN、ColⅣ水平差别均无显著性意义 (均P>0.05)。结论 苯那普利可能具有通过减少LN、ColⅣ的产生或促进其降解而抑制ECM沉积的作用。

系膜增生性肾小球肾炎患者尿Ⅳ型胶原、层粘连蛋白水平的变化及意义

目的探讨系膜增生性肾小球肾炎（ＭｓＰＧＮ）患者尿Ⅳ型胶原（Ｃ－Ⅳ）、层粘连蛋白（ＬＮ）的变化及其与病理改变 的关系和作用。方法采用放射免疫分析法对４２例肾功能正常的轻、中度系膜增生及合并肾小管病变患者及７８例正常人 尿 Ｃ－Ⅳ、ＬＮ水平进行检测。结果 ＭｓＰＧＮ患者尿 Ｃ－Ⅳ、ＬＮ水平［（４２．８７±５．１２） ｕ ｇ／Ｌ，（９２．３４±２９．１８） ｎｇ／Ｌ］明显高于正常对 照组［（１０．８３±１．６５） ｕｇ／Ｌ， （１．４５±５．２）ｎｇ／Ｌ］（Ｐ＜０．００１）；随着系膜增生程度的增加尿Ｃ－Ⅳ、ＬＮ水平递增，在伴有肾小管病 变患者尿Ｃ－Ⅳ、ＬＮ水平增高最为明显。结论ＭｓＰＧＮ存在胶原代谢的异常，尿Ｃ－Ⅳ、ＬＮ水平随肾脏病理损害的严重程度 而增高，尿Ｃ－Ⅳ、ＬＮ可作为评估ＭＳＰＧＮ肾功能的早期指标。

肾纤康汤对系膜增生性肾小球肾炎患者血清层粘连蛋白及Ⅳ型胶原的影响

目的 :探讨经验方肾纤康汤对系膜增生性肾小球肾炎 (MesangialProliferativeGlomerulonephritisMsPGN)患者血清细胞外基质 (ExtracelluarMatrixECM )成分的抑制作用。方法 :6 0例MsPGN患者随机分成肾炎对照组、苯那普利组和肾纤康组 ,治疗前后采用放射免疫法检测血清层粘连蛋白 (LamininLN)和Ⅳ型胶原 (CollagenⅣCol-Ⅳ )并观察各组差异。结果 :MsPGN患者血清LN、Col-Ⅳ水平显著高于健康对照组 (P <0 .0 1)。肾纤康汤能明显下调MsPGN患者血清LN和Col-Ⅳ水平 (P <0 .0 1) ,其作用强度与苯那普利相近 (P >0 .0 5 )。结论 :肾纤康汤能减少MsPGN患者血清LN、Col-Ⅳ的水平 。

尿Ⅳ型胶原检测在系膜增殖性肾小球疾病中的应用

目的 评价双抗体夹心ELISA法检测尿Ⅳ型胶原(Ⅳ-c)对肾脏疾病患者系膜细胞增殖、细胞外基质分泌和肾小球硬化的意义。方法 比较分析该方法测定15名正常人和51名肾病患者的尿Ⅳ-c。结果 双抗体夹心ELISA法的灵敏度为1.2ng/ml;检测范围3.2～200ng/ml。原发性系膜增殖性肾小球肾炎(MsPGN)组和非MsPGN组尿Ⅳ-c、尿白蛋白(Alb)显著高于正常对照组(P<0.01),MsPGN组尿Ⅳ-c显著高于非MsPGN组(P<0.01)。MsPGN、糖尿病肾病和IgA肾病患者的尿Ⅳ-c明显高于正常对照和其它肾病患者(P<0.05,P<0.01)。结论 双抗体夹心FLISA法检测尿Ⅳ-c简便、灵敏。

茶多酚对高糖所致人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成的影响

目的 :探讨高糖对人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成的影响及茶多酚的干预作用。方法 :应用放射免疫法检测高糖条件下体外培养的系膜细胞上清液中Ⅳ型胶原含量及茶多酚干预后其含量的改变 ;应用免疫细胞化学法检测高糖条件下系膜细胞内Ⅳ型胶原的表达以及茶多酚干预后的变化。结果 :高糖可增加系膜细胞上清液及细胞内Ⅳ型胶原的含量 ;茶多酚可抑制高糖条件下上清液中及细胞内Ⅳ型胶原的增加。结论 :高糖可导致人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成增加 ,而茶多酚可有效干预此过程。

滋肾解毒中药对Ⅳ型狼疮肾炎血清诱导肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原核酸表达的影响

目的:观察滋肾解毒中药对Ⅳ型狼疮性肾炎(LN)血清干预下肾小球系膜细胞(GMC)中Ⅳ型胶原(ColⅣ)mRNA表达的影响,从细胞分子生物学水平探讨滋肾解毒中药治疗LN的机制。方法:结合血清药理学方法,分空白对照组、对照组血清+15%LN血清组、低、中、高浓度含药血清+15%LN血清组5组观察,RT-PCR检测GMC中ColⅣ mRNA的表达。结果:含药血清可明显抑制GMC中ColⅣ mRNA的表达,以高浓度组最显著。结论:滋肾解毒中药的含药血清在15%Ⅳ型LN患者血清诱导下可明显抑制ColⅣ mRNA的表达,从而抑制GMC增殖和细胞外基质积聚,这可能是滋肾解毒中药治疗LN的分子机理。

肾舒胶囊对系膜细胞增殖及转化生长因子-β_1和Ⅳ型胶原表达的影响

目的 研究肾舒胶囊对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )刺激的大鼠系膜细胞 (MC)增殖及转化生长因子 - β1 (TGF β1 )、Ⅳ型胶原 (Col Ⅳ )mRNA表达的影响。方法 采用血清药理学方法 ,制备肾舒胶囊含药血清 ,用苯那普利作为阳性对照药 ;将肾舒胶囊含药血清加入AngⅡ刺激的大鼠MC中 ,MTT法测定MC增殖情况 ,半定量RT PCR检测TGF β1 、Col Ⅳ的mRNA表达。结果 肾舒胶囊含药血清可明显抑制AngⅡ诱导的大鼠MC增殖及TGF β1 、Col ⅣmRNA表达 ,其作用效果与苯那普利相当。结论 肾舒胶囊可能通过抑制MC增殖及分泌TGF β1 等生长因子 ,减少细胞外基质积聚 ,防治肾小球硬化。

茶多酚对高糖所致人肾系膜细胞活性氧、Ⅳ型胶原合成的影响

目的:探讨高糖对人肾小球系膜细胞活性氧、Ⅳ型胶原合成的影响及其茶多酚的干预作用。方法:系膜细胞在高糖(35mmol/LD-糖)条件下加入或不加入茶多酚(20μg/ml)培养至36h,运用化学比色法、放射免疫法检测高糖作用后培养系膜细胞上清液中活性氧(SOD和MDA)、Ⅳ型胶原的含量以及加入茶多酚后其含量的改变;应用免疫细胞化学法检测高糖作用后系膜细胞内Ⅳ型胶原的表达以及加入茶多酚后其表达的改变。结果:高糖使系膜细胞上清液中SOD含量减少,MDA含量增加,使培养的系膜细胞上清液中及细胞内Ⅳ型胶原含量增加;茶多酚可提高上清液中SOD活性,降低MDA含量,抑制系膜细胞合成和分泌Ⅳ型胶原。结论:高糖致人肾小球系膜细胞活性氧产生增加,促进Ⅳ型胶原合成和分泌,茶多酚可有效干预高糖的作用。