TRPC促进肾小球系膜细胞外基质沉积的机制研究

目的探讨瞬时受体电位阳离子通道(transient receptor potential canonical,TRPC)促进大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)细胞外基质(extracellular matrix,ECM)沉积的作用机制。方法免疫荧光染色方法观察TRPC1和TRPC6在HBZY-1细胞上的定位及表达;给予AngⅡ干预HBZY-1细胞后,应用qRT-PCR和Western blotting方法检测Gαq/PLCβ4/TRPC信号通路关键蛋白和ECM沉积指标[α-SMA、CollagenⅢ(ColⅢ)和Fibronectin(Fn)]的mRNA和蛋白表达;siRNA技术沉默TRPC1和TRPC6表达后,检测ECM沉积指标的表达;Fluo-4AM Ca^(2+)成像技术测定细胞内Ca^(2+)内流的变化情况。结果TRPC1和TRPC6在HBZY-1细胞中均有表达,主要定位在细胞膜和胞质。AngⅡ刺激后,可以激活Gαq/PLCβ4/TRPC信号通路,表现为Gαq、PLCβ4、TRPC1和TRPC6的mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05)。细胞内的Ca^(2+)内流增加(P<0.01),ECM沉积指标α-SMA、ColⅢ和Fn的mRNA和蛋白表达上调(P<0.05)。RNA干扰技术沉默TRPC1和TRPC6表达后,导致胞内Ca^(2+)内流减少(P<0.05),HBZY-1细胞ECM沉积指标的mRNA和蛋白表达均下调(P<0.05)。结果表明,沉默TRPC表达可以抑制AngⅡ诱导的HBZY-1细胞ECM沉积,且可能与减少[Ca^(2+)]i内流有关。结论TRPC可能是肾脏纤维化新的治疗靶点。

miR-218慢病毒干扰对糖尿病肾病大鼠肾小球系膜细胞外基质增生及Nrf2信号通路的作用机制

目的探究miR-218慢病毒干扰对糖尿病肾病(ND)大鼠肾小球系膜细胞外基质增生及(Nrf)2信号通路的作用机制。方法把40只大鼠随机分为正常组(NC组)、模型组(DN组)、空载慢病毒组(Vector组)和慢病毒组(miR-218组)各10只,分别对大鼠肾小球细胞的增殖情况、大鼠组织中miR-218表达情况进行比较;观察各组DN指标24 h蛋白尿、肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)含量、肾组织病理改变、细胞外基质增生及蛋白表达水平的差异性[Nrf2和(HO)-1蛋白]。结果和NC组相比,DN组肾组织中miR-218显著高表达,肾小球系膜细胞活性明显增加(P<0.05);干预后的miR-218组肾小球系膜细胞增殖活性较DN组和Vector组明显降低,且细胞增殖受到了明显的抑制(P<0.05)。与NC组相比,DN组和Vevtor组Upro/24 h含量明显增加,血清中Scr和BUN含量均显著增加(P<0.05);干预后的miR-218组Upro/24 h含量及血清中Scr和BUN含量较DN组均明显降低(P<0.05)。与NC组比较,DN组细胞外基质增生明显增加(P<0.05);miR-218组细胞外基质增生较DN组明显减少(P<0.05)。Nrf2和HO-1蛋白在DN组中低表达(P<0.05);低表达miR-218干预后发现Nrf2和HO-1蛋白得到明显促进(P<0.05)。结论低表达miR-218可抑制DN大鼠肾小球系膜细胞增殖活性,减少外基质增生,有效调控Nrf2/HO-1信号通路,进而改善大鼠DN。

真武汤合桃核承气汤对人胎肾小球系膜细胞外基质不同影响的实验研究

探讨真武汤和桃核承气汤及二者合方对人胎肾小球系膜细胞外基质 (ECM)不同成分的影响 ,并比较合方组与两个单方组的作用优劣。方法 :采用血清药理学方法 ,开展中药复方对 ECM的细胞生物学方面的实验研究。结果 :真武汤和桃核承气汤合方具有明显抑制 ECM成分中纤维连结蛋白 (FN)、层粘连蛋白 (L N)和 型胶原(CO1 )的作用 ,真武汤、桃核承气汤也有一定的抑制作用 ,但不及合方组明显。结论 :真武汤和桃核承气汤合方对ECM的增殖有明显的抑制作用 。

真桃汤和苯那普利对人胎肾小球系膜细胞外基质影响的比较研究

目的 :探讨真桃汤 (真武汤与桃核承气汤合方 )和苯那普利对人胎肾小球系膜细胞外基质 (ECM)不同成分的影响 ,并比较二者作用的优劣。方法 :采用血清药理学方法 ,开展真桃汤和苯那普利对 ECM影响的细胞生物学方面的实验研究。结果 :真桃汤具有明显抑制 ECM成分中纤维连结蛋白 (FN )、层粘连蛋白 (L N)和 型胶原(Col )的作用。结论 :真桃汤对 ECM的增殖有明显的抑制作用 。

桃核承气汤对人胎肾小球系膜细胞外基质作用的实验研究

目的探讨桃核承气汤对人胎肾小球系膜细胞外基质 (ECM)不同成分含量的影响。方法采用中药方剂对 ECM的细胞生物学方面的实验研究。结果桃核承气汤具有明显降低 ECM成分中纤维连结蛋白 (FN)、层粘连蛋白 (LN)和 型胶原 (COl )含量的作用。结论桃核承气汤对

肾康注射液与苯那普利对肾小球系膜细胞外基质抑制作用的血清学对比研究

目的 :探讨肾康注射液与苯那普利对人肾小球系膜细胞外基质 (ECM )不同成分的抑制作用强度。方法 :采用体外培养的人肾小球系膜细胞 (MC)技术和血清药理学方法 ,观察具有降逆泄浊、益气活血作用的中药肾康注射液及苯那普利对ECM不同成分的影响。结果 :肾康注射液与苯那普利对ECM中纤维连接蛋白 (FN)、层粘连蛋白(LN)和Ⅳ型胶原 (ColⅣ )均具有一定的抑制作用 ,但在等效剂量浓度下 ,肾康注射液对MC的抑制作用优于苯那普利。结论 :MC是肾康注射液发挥治疗作用的重要靶细胞之一 ,抑制ECM聚积可能是该方延缓肾小球硬化的重要作用机制之一。

真武汤对人胎肾小球系膜细胞外基质作用的实验研究

采用血清药理学方法,探讨真武汤对人胎肾小球系膜细胞外基质(ECM)不同成分的作用,为真武汤防治肾小球硬化的临床应用提供实验依据。结果真武汤能够明显降低ECM成分中层粘连蛋白(LN)和Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)的含量。表明真武汤对ECM的增殖具有明显的抑制作用。

降糖通脉片对人肾小球系膜细胞外基质影响的拆方研究

目的探讨降糖通脉片中清化瘀热与滋阴补气两法不同组成部分对人肾小球系膜细胞外基质(ECM)的影响。方法采用体外培养的人肾小球系膜细胞技术和血清药理学方法,观察降糖通脉片清化瘀热与滋阴补气不同组分对ECM的影响。结果降糖通脉片中清化瘀热及滋阴补气两法均具有抑制ECM成分中纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)含量的作用,但清化瘀热法的作用更为明显。结论清化瘀热法与滋阴补气法相比,前者在阻抑肾小球硬化方面发挥着更为重要的作用。

益肾蠲湿合剂对肾小球系膜细胞外基质影响的研究

目的观察中药复方益肾蠲湿合剂对肾小球系膜细胞(GMC)分泌细胞外基质的抑制作用。方法将含低、中、高剂量益肾蠲湿合剂的药物血清和10%血清-DMEM培养液共同培养GMC 24,48和72 h,分别收集细胞培养上清,用Elisa法检测培养上清中纤维连结蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)及Ⅳ型胶原(ColⅣ)含量。结果益肾蠲湿合剂的药物血清可抑制体外培养的GMC分泌FN、LN和ColⅣ,其抑制程度与药物浓度有一定的量效关系,即随药物浓度的增加对GMC分泌FN、LN和ColⅣ的抑制率也相应增加。结论中药复方益肾蠲湿合剂对体外培养的GMC分泌FN、LN和ColⅣ有明显的抑制作用,提示抑制GMC分泌细胞外基质是本复方治疗慢性肾炎的重要机制之一。

回回甘松饮含药血清对高糖诱导的肾小球系膜细胞外基质堆积的影响

目的探讨回回甘松饮(Hui-hui Gan-song Yin,HGY)含药血清对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells,MCs)外基质堆积的影响。方法健康雄性SD大鼠40只随机分为正常对照组(蒸馏水)、格列喹酮组(10 mg/kg)、HGY(5、10 g/kg)组,每组各10只,每天给药2次,连续3 d后制备含药血清用于体外培养大鼠MCs,分为正常对照组(10%正常对照组大鼠血清)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清)、格列喹酮组(30 mmol/L葡萄糖+10%格列喹酮组大鼠血清)、HGY高剂量组(30 mmol/L葡萄糖+10%HCY高剂量组大鼠血清)、HGY低剂量组(30 mmol/L葡萄糖+10%HCY低剂量组大鼠血清)。细胞培养结束后,采用Western blot方法检测纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)及Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)含量。结果与空白对照组比较,高糖组FN、ColⅠ及ColⅣ表达量上调(P<0.01);HGY含药血清可降低在高糖诱导的MCs中FN、ColⅠ及ColⅣ表达量(P<0.05)。结论 HGY含药血清可降低MCs在高糖环境下的FN、ColⅠ及ColⅣ蛋白表达水平,从而减少了ECM堆积,保护肾小球,延缓糖尿病肾病进程。

高糖条件对大鼠肾小球系膜细胞外基质表达的影响

目的观察高糖环境对大鼠肾小球系膜细胞分泌细胞外基质成分中透明质酸、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原表达的影响,为临床治疗糖尿病肾病提供一定的实验依据.方法(1)采用酶联免疫吸附试验测定经体外不同浓度高糖条件下培养的大鼠肾小球系膜细胞HA、LN、Ⅳ型胶原的表达;(2)利用四甲基偶氮唑蓝比色法动态观察不同葡萄糖浓度对GMC增殖的作用.结果高糖浓度抑制GMC增殖,此抑制作用和糖浓度成正相关.在高糖环境下48～72h GMC分泌HA、LN、Ⅳ型胶原活性明显增加,其分泌表现为逐渐升高的趋势,并在1W内维持较高水平,各组间差异显著.证实ECM的增加不依赖于细胞增殖状态,对照组则处于一个较稳定的状态,说明高糖对GMC分泌ECM有明显的促进作用.结论细胞外高葡萄糖环境抑制GMC增殖,且呈浓度依赖性,高糖环境中GMC产生ECM的含量明显增加,所以ECM过度积聚可能参与肾小球硬化的发生.

保肾通络方对高糖培养下肾小球系膜细胞外基质增生及外泌体miR-192表达的影响

目的观察保肾通络方对高糖培养下肾小球系膜细胞外基质增生及外泌体miR-192表达的影响,探讨其防治糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法将20只SD大鼠随机分为正常对照组、保肾通络方低剂量组、保肾通络方中剂量组及保肾通络方高剂量组,每组5只。保肾通络方低、中、高剂量组大鼠分别予浓度为0.5、1.0、2.0 g/mL的保肾通络方颗粒剂药液灌胃,正常对照组大鼠予等容积蒸馏水灌胃。各组大鼠均连续灌胃7 d,通过腹主动脉取血并分离出含药血清。将永生化小鼠肾小球系膜细胞分为正常对照组、高糖对照组、保肾通络方低剂量组、保肾通络方中剂量组及保肾通络方高剂量组。正常对照组肾小球系膜细胞予DMEM低糖培养基+正常对照组大鼠血清培养,高糖对照组肾小球系膜细胞予含30 mmol/L葡萄糖的高糖培养基+正常对照组大鼠血清培养,保肾通络方低、中、高剂量组肾小球系膜细胞分别予高糖培养基+10%的保肾通络方低、中、高剂量含药血清培养。培养24 h后,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性情况,免疫荧光法检测细胞外基质蛋白胶原蛋白Ⅳ(CollagenⅣ)及纤维连接蛋白(FN)表达情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达情况。结果高糖对照组培养后肾小球系膜细胞增殖活性与正常对照组比较明显升高(P<0.05),保肾通络方低、中、高剂量组培养后肾小球系膜细胞增殖活性与高糖对照组比较明显降低(P<0.05),但保肾通络低、中、高剂量组细胞增殖活性组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。高糖对照组培养后CollagenⅣ及FN灰度值与正常对照组比较均升高(P<0.05),保肾通络方低、中、高剂量组培养后CollagenⅣ及FN灰度值与高糖对照组比较均降低(P<0.05),但保肾通络方低、中、高剂量组CollagenⅣ及FN灰度值组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。高糖对照组培养后CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达与正常对照组相比均明显上调(P<0.05),保肾通络方低、中、高剂量组培养后CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达与高糖对照组比较均明显下调(P<0.05),但保肾通络方各剂量组CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论保肾通络方可以降低DN肾小球系膜细胞增殖活性,抑制细胞外基质增生,减少CollagenⅣ及FN蛋白的表达,并能够下调CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达,从多途径对DN进行干预治疗。

五味子多糖对TGF-β1诱导的人肾小球系膜细胞炎症因子和细胞外基质FN和COLⅠ表达的影响

目的:探讨五味子多糖(SCP)对TGF-β1诱导的人肾小球系膜细胞炎症因子和细胞基质(ECM)表达的影响。方法:体外培养人肾小球系膜细胞,采用4 ng/ml TGF-β1诱导人肾小球系膜细胞构建系膜增生性肾炎细胞模型,分为正常对照(Con)组、模型(TGF-β1)组、SCP低、中、高浓度(SCP-L、SCP-M、SCP-H)组,MTT检测细胞增殖活性,ELISA检测炎症细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)含量,qRT-PCR和Western blot分析纤连蛋白(FN)和Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)表达,Western blot评估TLR4/NF-κB信号传导途径关键蛋白表达。结果:与Con组相比,TGF-β1组细胞增殖活性明显升高,IL-6、IL-1β、TNF-α和MCP-1含量明显升高,FN、COLⅠ、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子(MyD88)和磷酸化核因子-κB p65(p-NF-κB p65)表达明显上调(P<0.05);与TGF-β1组相比,不同浓度SCP干预均能够抑制细胞增殖活性,降低IL-6、IL-1β、TNF-α和MCP-1含量,下调FN、COLⅠ、TLR4,MyD88和p-NF-κB p65表达(P<0.05)。结论:SCP能够抑制TGF-β1诱导的人肾小球系膜细胞炎症因子表达及细胞外基质FN和COLⅠ积累,其作用机制可能与阻断TLR4/NF-κB通路有关。

柴胡皂苷-d对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

目的探讨柴胡皂苷-d(saikosaponin-d,SSd)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)作用后肾小球系膜细胞(mesangial cell,MC)增殖及细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的异常增生的影响,为肾小球硬化的防治提供实验依据。方法体外培养、鉴定大鼠肾小球MC。利用MTT、LDH释放实验、流式细胞技术观察SSd对LPS刺激后MC增殖的作用,ELISA法检测细胞外基质Ⅳ型胶原(type Ⅳcollagen,Col Ⅳ)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)及转化生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)。细胞免疫化学法检测细胞素依赖性蛋白激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)、c-Jun、c-Fos。结果SSd对MC增殖有抑制作用,可使G0/G1期细胞增多,并诱导细胞凋亡;SSd可抑制MC分泌Col Ⅳ、FN、TGF-β1,并抑制了CDK4、c-Jun、c-Fos的表达。结论SSd对肾小球硬化(glomerulosclerosis,GS)的抑制作用是通过抑制CDK4、c-Jun、c-Fos的表达实现的。

多球壳菌素对高糖诱导肾小球系膜细胞肥大及细胞外基质合成的影响

目的 观察高糖对大鼠肾小球系膜细胞（GMC）大小及分泌细胞外基质（ECM）成分的影响及从冬虫夏草中提取的免疫抑制活性成分——多球壳菌素（ISP-1）的干预效应。方法正常糖（5．6mmol／LD-glucose）及高糖（25.2mmol／LD-glucose）条件下培养GMC，并设高糖加ISF1（100mg／L）组。采用流式细胞仪测各组GMC体积[前向角散射光（FSC）平均强度表示细胞大小。ELISA检测高糖条件下不同时间点（0、24、48、72h）细胞培养上清液中纤维连接蛋白（FN）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）、Ⅲ型前胶原（PoolⅢ）、透明质酸（HA）及层黏连蛋白（LN）含量及ISP-1干预后分泌水平变化。结果同正常糖组比较。高糖可使GMC发生肥大，同时高糖环境下GMC分泌的Col、ColⅣ、FN、PcolⅢ、HA及LN明显增加（P〈0．05），48-72h更明显；ISPd能有效抑制高糖的上述作用（P〈0．05）。结论高糖可致GMC肥大和ECM合成增加,ISP-1对高糖所致GMC肥大和ECM合成增加有抑制作用，有望用于糖尿病肾病防治。

内皮素受体拮抗剂阿魏酸钠对人肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质的影响

目的 :探讨内皮素受体拮抗剂阿魏酸钠对人肾小球球内系膜细胞增殖与细胞外基质的影响。方法 :采用人肾小球系膜细胞 (MC)体外培养技术和血清药理学方法 ,观察内皮素受体拮抗剂阿魏酸钠对MC增殖和细胞外基质 (ECM)不同成分的影响。结果 :阿魏酸钠对MC增殖和ECM合成均具有显著的抑制作用 ,在等效剂量浓度下 ,抑制效应优于苯那普利。结论 :MC是阿魏酸钠发挥治疗作用的重要靶细胞 ,抑制MC增殖和ECM合成是阿魏酸钠延缓肾小球硬化的重要作用机制之一。

红参发酵产物对高糖下大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质降解的影响

目的:探讨红参发酵产物(FRGE)对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)增殖和细胞外基质(ECM)降解的影响,阐明FRGE对糖尿病肾病(DN)的防治作用及可能机制。方法:将GMCs分为正常对照(NG)组、高糖(HG)组、高糖+不同浓度(3.75、7.50和15.00 mg·L^(-1))FRGE组。四甲基偶氮唑盐(MTT)光吸收法观察各组GMCs的增殖率,酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养细胞上清中Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)的水平,蛋白免疫印迹技术(Western blotting)检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶组织抑制物2(TIMP-2)蛋白表达水平。结果:与NG组比较,HG组GMCs增殖率升高(P<0.01),ColⅣ水平升高(P<0.01),TIMP-2蛋白表达水平上调(P<0.01),MMP-2蛋白表达水平下调(P<0.01);与HG组比较,高糖+不同浓度FRGE组GMCs增殖率均降低(P<0.01),ColⅣ水平降低(P<0.01),TIMP-2蛋白表达水平下调(P<0.01),MMP-2蛋白表达水平上调(P<0.01)。结论:FRGE可通过抑制高糖诱导的大鼠GMCs增殖,促进ECM的降解,延缓DN的发生发展。

丹酚酸B对高糖诱导的肾小球系膜细胞表型转化及细胞外基质分泌的影响

目的:研究丹酚酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞表型转化及细胞外基质分泌的影响及其机制。方法:培养人肾小球系膜细胞(HGMCs),随机分为正常对照组、高糖组及高糖+丹酚酸B高、中、低剂量组,高糖组和丹酚酸B各组用含高浓度(33.3 mmol/L)葡萄糖的培养基培养72 h,丹酚酸B各组同时加人相应浓度丹酚酸B共同孵育。Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平,ELISA法检测细胞Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)、纤维连接蛋白(FN)和层粘连蛋白(LN)的分泌水平,Western blot法检测转化生长因子β1(TGF-β1)的表达及Smad2和p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的磷酸化水平。结果:高糖孵育72 h后,肾小球系膜细胞α-SMA的蛋白表达水平明显升高,ColⅠ、ColⅢ、FN及LN蛋白的分泌水平显著增加(P <0.01),TGF-β1的表达及Smad2、p38 MAPK的磷酸化水平也明显升高(P <0.01);与丹酚酸B共同孵育可明显降低α-SMA蛋白的表达水平,ColⅠ、ColⅢ、FN和LN的分泌明显减少,TGF-β1的表达及Smad2、p38 MAPK的磷酸化水平显著下降(P <0.01或P <0.05)。结论:丹酚酸B可明显抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞表型转化,减少ColⅠ和ColⅢ等细胞外基质分泌,其机制与抑制TGF-β1/Smad信号通路及p38 MAPK活化有关。

脂多糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖和分泌细胞外基质的研究

目的观察脂多糖(LPS)对大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及分泌细胞外基质(ECM)的作用。方法建立体外培养的大鼠GMC,鉴定后用于实验。实验分为两组:对照组和LPS诱导组。甲基噻唑基四唑(MTT)比色法测定24h和48h两个时点两组系膜细胞的增殖情况;ELISA法测定6h、12h和24h系膜细胞培养上清液中ECM蛋白含量;荧光半定量反转录PCR(RT-PCR)法检测ECM中层黏连蛋白(LN)β2 mRNA表达的变化。结果(1)LPS组和对照组GMC增殖情况间差别有显著性意义(P<0.05);(2)正常培养的大鼠GMC可分泌一定量的ECM,LPS组在各时点分泌ECM量与对照组间差别有显著性意义(P<0.01);(3)正常培养的大鼠GMC有微量LNβ2 mRNA表达,LPS组在各时点LNβ2 mRNA表达量与对照组间差别均有显著性意义(P<0.01)。结论从蛋白和 mRNA两个水平同时观察到ECM成分(如FN、LN和ColⅣ)的增加,说明在系膜增殖性肾炎中ECM明显增加并起主要作用。

醛固酮可通过钠氢交换子1诱导肾小球系膜细胞外基质增生

目的探讨醛固酮能否在肾小球系膜细胞(GMC)激活钠氢交换子1(NHE1),以及能否通过NHE1诱导GMC细胞外基质增生。方法体外培养大鼠GMC,并按如下分组:对照组(Con,普通培养液);醛固酮组(Aldo,10-7mol／L);醛固酮+安体舒通组(Aldo+Spir 10-9 mol／L);醛固酮+NHE1抑制剂DMA组(Aldo+DMA 25μmol／L)。24 h后收集培养上清液和各组细胞,抽提总RNA。用酸负荷后钠依赖的pHi(细胞内pH值)的变化来检测NHE1活性,同时采用实时PCR以及流式细胞术检测NHE1基因和蛋白的表达。采用实时PCR和ELISA方法检测纤连蛋白(FN)基因和蛋白的表达。结果与对照组比较,Aldo组肾小球系膜细胞NHE1的活性(△pHi／100S)显著增高[Con(4．48±0．25)％,Aldo(5．29±0．11)％,P<0．05]。加入安体舒通和DMA后,上述NHE1活性均有所降低[Aldo+Spir(4．92±0．35)％,Aldo+DMA(4．07±0．23)％,与Aldo组比较,P<0．05]。实时PCR结果显示Aldo组NHE1 mRNA水平有所增高,是对照组的1．16倍(P<0．05),而Aldo+Spir组NHE1 mRNA水平明显下降,是Aldo组的81．9％(P<0．05)。流式细胞术结果显示Aldo组NHE1蛋白水平显著增高,是对照组的2．9倍(P<0．01),而Aldo+Spir组NHE1蛋白水平明显下降,仅为Aldo组的52．3％(P<0．05),安体舒通本身对NHE1的基因和蛋白表达没有显著影响。实时PCR结果显示Aldo组FN mRNA水平有所增高,是对照组的1．03倍(P<0．05); Aldo+Spir组和Aldo+DMA组FN mRNA水平有所下降,分别是Aldo组的91．21％(P<0．01)和92．30％(P<0．01)。ELISA结果显示培养上清液中分泌的FN(ng／ml)也表现为相同的趋势[Con(17．84±3．77),Aldo(51．66±1．40),P<0．01;Aldo+Spir(29．60±1．99),Aldo+DMA(25．75±4．66),与Aldo组比较,P<0．01]。结论醛固酮能够刺激肾小球系膜细胞分泌细胞外基质成分FN,其作用可能是由于醛固酮激活系膜细胞NHE1活性、上调其基因和蛋白表达所致。