Apelin-13对高糖诱导肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化的影响

目的观察Apelin-13对高糖诱导肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响并探讨其可能机制。方法用Apelin-13(10^(-8)、10^(-7)和10^(-6)mol/L)预处理HK-2细胞30 min后,用含D-葡萄糖(30 mmol/L)的培养基培养HK-2细胞48 h。免疫荧光检测HK-2细胞中间充质细胞的标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,透射电镜观察HK-2细胞的超微结构,Western-Blot检测上皮细胞的标志物E-钙粘蛋白(E-cadherin)、α-SMA及自噬相关蛋白表达。结果与对照组比较,高糖组的细胞呈现长梭形,细胞间隙明显增宽,E-cadherin蛋白表达显著性下调(t=4.751,P=0.011),而α-SMA蛋白表达显著上调(t=3.846,P=0.016),自噬体数量明显增多,Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值均显著增加(t_1=5.271,t_2=4.695,t_3=6.753,P_1=0.009,P_2=0.012,P3=0.002),p62表达显著降低(t=4.562,P=0.012)。与高糖组比较,Apelin-13(10^(-7)和10^(-6)mol/L)+高糖与高糖组比较,明显抑制了细胞形态的变化,细胞形态大多数呈椭圆型,E-cadherin蛋白表达显著上调(t_1=3.495,t_2=4.124,P_1=0.019,P_2=0.013),而α-SMA蛋白表达显著下调(t_1=4.014,t_2=4.283,P_1=0.014,P_2=0.012),自噬体数量明显增多,Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值均显著增加(t_1=3.487,t_2=4.059,t_3=5.342,t_4=4.271,t_5=5.360,t_6=5.851,P_1=0.018,P_2=0.014,P_3=0.009,P_4=0.011,P_5=0.005,P_6=0.004),p62表达显著降低(t_1=4.342,t_2=3.557,P_1=0.012,P_2=0.019)。结论 Apelin-13抑制了高糖诱导的肾小管EMT,其机制可能与Apelin-13诱导肾小管上皮细胞自噬有关。

吡格列酮对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化的影响及机制研究

目的:探讨吡格列酮(PIO)对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化(EMT)的影响及可能机制,为防治糖尿病肾病提供理论依据及新靶点。方法:将大鼠肾小管细胞NRK-52E随机分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、PIO干预组(30 mmol/L葡萄糖+5.0μmol/L PIO)、GW9662干预组(30 mmol/L葡萄糖+5.0μmol/L PIO+5.0μmol/L特异性拮抗剂GW9662)。前3组细胞分别在培养6、12、24、48 h时进行动态检测,GW9662干预组细胞在培养48 h时进行检测。采用Realtime PCR法检测细胞中第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)mRNA的表达水平;采用Western blotting法检测细胞中PTEN、PPARγ、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)的表达以及磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的变化。结果:随培养时间的延长,与正常组比较,高糖组细胞中PPARγ、PTEN mRNA及蛋白(除PPARγ6 h外)表达水平均显著降低,α-SMA、p-AKT^(Thr308)蛋白表达水平均显著升高,E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P<0.05),且呈时间依赖趋势;与高糖组比较,PIO组细胞中PPARγ(除6 h时的蛋白表达外)、PTEN的mRNA及蛋白表达水平均显著升高,α-SMA、p-AKT^(Thr308)(除6 h外)蛋白表达水平均显著降低,E-cadherin蛋白表达水平显著增高(P<0.05),且呈时间依赖趋势。与高糖组比较,GW9662干预组细胞PTEN、PPARγmRNA及蛋白表达水平,α-SMA、E-cadherin、p-AKT^(Thr308)蛋白表达水平的差异均无统计学意义,PIO的作用效应被PPARγ拮抗剂GW9662阻断。结论:在高糖条件下PIO可能是通过激活PPARγ而实现对PTEN表达的调控,使PI3K/AKT信号通路受到抑制,进而抑制肾小管上皮细胞EMT的发生。

虫草素对氯化镉诱导肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化及其TGF-β;/Smad信号通路的影响

目的:探讨虫草素对氯化镉所致肾小管上皮细胞NRK-52E转分化及肾间质纤维化中的影响。方法:(1)体外培养NRK-52E细胞;(2)不同浓度氯化镉(5、10、50、100μmol/L)作用于NRK-52E细胞72 h;(3)不同浓度虫草素(5、20、80μg/ml)+10μmol/L氯化镉溶液共同作用于NRK-52E细胞72 h。通过CCK8检测细胞活力,Western blot方法检测NRK-52E细胞纤维化相关因子TGF-β;和CTGF、α-SMA以及肾小管上皮细胞表面主要标记蛋白E-cadherin、细胞信号转导因子Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达情况。结果:与对照组相比,持续的镉作用会影响大鼠肾小管上皮细胞的生长状态,且浓度越高,细胞活性下降明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,氯化镉组中NRK-52E细胞纤维化相关因子TGF-β;和CTGF、α-SMA表达增加,E-cadherin表达下降,细胞信号转导因子Smad2/3、p-Smad2/3表达均升高。随着虫草素加入的量的升高,TGF-β;和CTGF、α-SMA表达逐渐下降,E-cadherin表达升高,细胞信号转导因子p-Smad2/3、Smad2/3表达均逐渐下降,虫草素与TGF-β;键合良好。结论:本实验证实镉对肾小管上皮细胞生长状态的抑制作用,可能通过TGF-β;/Smad信号通路启动并调节肾小管上皮细胞转分化。而虫草素能够抑制这一过程,从而抑制肾小管间质纤维化。

肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化与肾间质纤维化的关系研究

肾脏疾病发展到一定阶段会引起患者肾间质纤维化,肾间质纤维化与患者病情的严重程度有着密切的联系,而肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化(EMT)与肾间质纤维化具有一定的关系,研究表明肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化受转化生长因子诱导。

法舒地尔调控Klotho抑制甲状旁腺激素诱导的肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化研究

目的研究法舒地尔在调控Klotho抑制甲状旁腺激素(PTH)诱导的肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化(EMT)中的作用。方法采用第3代人肾小管上皮细胞,分为5组,经不同浓度法舒地尔进行处理,用倒置显微镜观察细胞形态变化,采用蛋白免疫印迹法(Western-blot)测定细胞中Klotho蛋白的表达情况,实时定量PCR法(RT-PCR)测定Klotho mRNA、间充质细胞标志物α-SMA mRNA和上皮细胞标志物E-cadherin mRNA表达情况,并观察量效关系。结果正常肾小管上皮细胞经PTH刺激后呈不同程度的拉长,变为长梭形或不规则形,胞间连接变松散,Klotho mRNA和蛋白表达明显减少,E-cadherin mRNA表达减少,α-SMA mRNA表达增多,差异均有统计学意义(P<0.05),标志着肾小管上皮细胞向间充质细胞转化。而在法舒地尔的干预下,上皮细胞发生EMT的数量减少,E-cadherin mRNA表达增多,α-SMA mRNA表达减少,Klotho mRNA和蛋白表达均明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05),其中法舒地尔在20μmol/L时抑制作用最显著。结论法舒地尔可以通过上调肾小管上皮细胞内Klotho表达,减轻PTH诱导的肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化,为法舒地尔在临床预防和治疗肾脏纤维化中的应用提供实验数据。

保肾通络方对糖尿病肾病小鼠肾小管间质纤维化及上皮细胞间充质转分化的影响

目的:观察保肾通络方对糖尿病肾病(DN)小鼠肾小管间质纤维化及上皮细胞间充质转分化(EMT)的影响。方法:选用KK-Ay小鼠作为DN模型小鼠,随机分为模型组、保肾通络方组及缬沙坦组,正常对照组小鼠选用C57BL/6J小鼠。保肾通络方组小鼠给予保肾通络方灌胃治疗,缬沙坦组小鼠给予缬沙坦灌胃治疗,模型组、正常对照组小鼠给予剂量相同的蒸馏水灌胃治疗;灌胃给药12周后检测各组血清肌酐、尿素氮水平,HE、PAS、Masson染色观察肾组织病理改变,同时进行细胞外基质蛋白CollagenⅠ、FN及肾小管EMT标志蛋白α-SMA、E-cadherin表达检测。结果:模型组小鼠血清肌酐、尿素氮水平较正常对照组明显升高(均P<0.05),保肾通络方组及缬沙坦组小鼠血清肌酐、尿素氮水平较模型组明显降低(均P<0.05)。与正常对照组相比,模型组小鼠肾小管出现明显的间质纤维化及上皮细胞脱落、空泡变性,而保肾通络方组及缬沙坦组小鼠上述病理改变均明显减轻。模型组小鼠肾小管CollagenⅠ、FN蛋白及mRNA表达较正常对照组明显上调(均P<0.05),保肾通络方组及缬沙坦组小鼠肾小管CollagenⅠ、FN蛋白及mRNA表达较模型组明显下调(均P<0.05)。与正常对照组相比,模型组小鼠肾小管上皮细胞α-SMA蛋白及mRNA表达明显上调,E-cadherin蛋白及mRNA表达明显下调(均P<0.05);与模型组相比,保肾通络方组及缬沙坦组小鼠α-SMA蛋白及mRNA表达明显下调,E-cadherin蛋白及mRNA表达明显上调(均P<0.05)。结论:保肾通络方能够改善DN小鼠肾小管间质纤维化,减轻肾小管EMT。

肝细胞生长因子下调Smurf2拮抗肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化

目的通过观察肝细胞生长因子（HGF）对正常大鼠肾上皮细胞（NRK-52E）转化生长因子p1（TGF—B1）诱导的Smad泛素化调节因子2（Smurf2）表达的影响，探讨HGF拮抗肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化（EMT）的分子机制。方法以NRK。52E细胞为研究对象，给予TGF—B1（5μg/L）处理0～24h；或部分细胞经HGF（20μg／L）预处理30min后，再予TGF-β1（5μg，L）处理1h或48h；另外部分细胞予以Smurf2质粒表达载体或Smurf2siRNA转染24h后，再予HGF处理24h。应用Western印迹及间接免疫荧光染色方法检测Smurf2、SnoN、E钙黏蛋白（E—cadherin）、α平滑肌肌动蛋白（d—SMA）和纤连蛋白（FN）的表达。结果与对照组相比，TGF—β1处理后迅速上调NRK-52E细胞中Smurf2蛋白表达（P〈0．01）；同时显著诱导FN和α—SMA蛋白表达，并下调E-cadherin表达。而予HGF预处理细胞后，可快速抑制TGF—β1诱导的Smurf2表达上调（P〈0．01）；并逆转TGF-β1介导的SnoN（P〈0．01）、E-cadherin（P〈0．05）、α-SMA（P〈0．01）和FN（P〈0．01）表达变化。此外，在NRK-52E细胞中过表达Smurf2蛋白可部分抑制HGF诱导的SnoN蛋白上调；而抑制Smurf2表达则可进一步促进HGF诱导的SnoN蛋白表达。结论在肾小管上皮细胞中，HGF可能通过下调Smurf2表达抑制SnoN蛋白发生泛素-蛋白酶体依赖性降解，进而拮抗TGF-β1介导EMT形成。

Wnt-7a蛋白通过wnt/β-catenin通路抑制单侧输尿管梗阻小鼠肾脏上皮细胞-间充质细胞转分化

目的:观察Wnt-7a蛋白对单侧输尿管梗阻模型小鼠肾脏纤维化的拮抗作用及其可能机制。方法:雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、UUO模型组和Wnt-7a蛋白治疗组,术后7 d行Masson染色观察肾间质纤维化程度,免疫组化染色检测肾组织E-钙黏素、α-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白的表达,免疫印迹法测定肾皮质中E-钙黏素、α-平滑肌肌动蛋白及β-连环蛋白(β-catenin)的蛋白质表达。结果:与模型组相比,治疗组肾组织间质纤维化相对面积显著减少,α-平滑肌肌动蛋白及波形蛋白的表达显著减少,E-钙黏素表达显著增多(P<0.05)。同时,治疗组肾组织中β-catenin表达较模型组显著减少(P<0.05)。结论:Wnt-7a蛋白可以抑制肾脏上皮细胞-间充质细胞转分化的发生而减轻肾脏纤维化,其可能是通过抑制经典的wnt/β-catenin通路。

桃红四物汤加味颗粒对糖尿病肾病模型大鼠足细胞上皮-间充质转化及肾脏纤维化的影响

目的 探讨桃红四物汤加味颗粒对糖尿病肾病(DKD)模型大鼠足细胞上皮-间充质转化(EMT)及肾脏纤维化的影响。方法随机选取8只大鼠为正常组(予普通饲料),其余大鼠采用高糖高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素(35 mg/kg)建立DKD模型。将模型大鼠分为模型组、厄贝沙坦组[阳性对照,13.5 mg/(kg·d)]、桃红四物汤加味组[6.48 g/(kg·d)],每组最终纳入8只。各组大鼠灌胃相应药物,每日1次,连续干预16周。干预第4、8、12、16周末检测各组大鼠24 h尿蛋白(24 h UTP),末次给药后检测各组大鼠体重、饮水量、饮食量、尿量、空腹血糖、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和肾组织中P-钙黏素(P-cadherin)、足细胞裂孔膜蛋白(nephrin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、肾母细胞瘤蛋白1(WT1)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)m RNA及蛋白的表达情况,观察肾组织病理形态学变化并测量肾小球基底膜厚度。结果 与模型组比较,桃红四物汤加味组大鼠从第8周末开始24 h UTP显著降低,体重显著增长,饮水量、尿量均显著减少,Scr、BUN水平和α-SMA mRNA以及TGF-β1、Col-ⅣmRNA及蛋白表达水平均显著降低,P-cadherin、nephrin、WT1 mRNA表达水平均显著升高(P<0.05);α-SMA蛋白沉积减少,P-cadherin、nephrin、WT1蛋白沉积均增多;大鼠肾组织病理损伤及纤维化程度减轻,肾小球基底膜厚度显著减小(P<0.05)。结论 桃红四物汤加味颗粒可通过抑制DKD模型大鼠足细胞EMT,减轻肾组织病理损伤及足细胞损伤,从而保护肾功能、延缓肾脏纤维化进展。

基于足细胞上皮-间充质转化探讨中医药对慢性肾脏疾病作用机制及研究进展

足细胞作为肾脏高能量需求的高度特化上皮细胞,对维持肾小球滤过屏障的完整性至关重要。上皮-间质转分化作为足细胞损伤的重要形式,易导致肾小球滤过功能障碍影响多种慢性肾脏疾病的发生和进展。因此未来针对足细胞上皮-间充质转化是治疗慢性肾脏疾病的重要研究方向。黄芪、雷公藤、三七、蝉花等中药可通过作用TGF-β1/Smad、Wnt/β-catenin、Notch等信号通路抑制足细胞上皮-间充质转化,从而起到保护肾脏的作用。因此,本研究拟从足细胞上皮-间充质转化角度对中医药治疗慢性肾脏疾病作用机制及研究进展进行综述,以期为中医药在慢性肾脏疾病临床治疗中的应用提供科学依据。

基于上皮细胞-间充质转化的搜风愈喘方调控哮喘大鼠气道重塑的机制研究

目的探讨搜风愈喘方通过调控上皮细胞-间充质转化(EMT)抑制哮喘气道重塑的作用机制。方法将60只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松组及搜风愈喘方高、中、低剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组均采用卵清白蛋白(OVA)注射和雾化复制哮喘大鼠模型。各组大鼠给予相应药物灌胃21 d后处死大鼠,苏木素-伊红(HE)染色,观察肺组织病理形态学变化;透射电镜观察大鼠肺组织中上皮细胞超微结构情况;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中的转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素17(IL-17)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测肺组织匀浆中TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)的mRNA表达。蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测肺组织中TGF-β1、α-SMA、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型对照组大鼠血清中TGF-β1、IL-17含量明显升高(P<0.01),肺组织中TGF-β1、α-SMA和N-cadherin mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.01),E-cadherin mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.01);HE染色显示气道壁及肺泡壁增厚,视野内可见大量炎症细胞浸润,炎症评分明显升高(P<0.01);透射电镜显示肺组织中上皮细胞水肿程度严重,胞内基质局部溶解、变淡,细胞器肿胀明显。与模型对照组比较,地塞米松组和搜风愈喘方各剂量组大鼠血清中TGF-β1、IL-17含量明显降低(P<0.05,P<0.01),TGF-β1、α-SMA和N-cadherin mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),E-cadherin mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.05,P<0.01);肺组织炎症细胞浸润减轻,支气管壁及肺泡壁增厚程度减轻,地塞米松组和搜风愈喘方高剂量组炎症评分降低(P<0.05);超微结构显示上皮细胞水肿程度明显减轻,细胞膜完整,胞内基质均匀,细胞器大多轻微肿胀。结论搜风愈喘方可降低TGF-β1水平,从而改善肺组织EMT,达到防治哮喘气道重塑的目的。

Renalase对肾小管上皮细胞-间充质转分化影响的研究

目的本研究旨在探讨Renalase是否可以延缓肾脏纤维化。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞,给予TGF-β1和(或)不同浓度的Renalase与细胞共同孵育,观察细胞形态的变化,应用免疫荧光观察E-cadherin、α-SMA的分布和表达情况;应用Western blot(WB)法和RT-PCR检测细胞中E-cadherin、α-SMA的蛋白和mRNA表达,应用WB检测FN和Col-Ⅰ蛋白表达,并检测细胞内信号分子p-Smad-2/3、p-ERK1/2、p-p38水平的变化,探讨其可能的分子生物学机制。结果给予TGF-β1刺激后,E-cadherin表达下调、α-SMA、FN、Col-Ⅰ表达增加。应用不同浓度Renalase与TGF-β1共孵育细胞,上述现象改善,且呈剂量依赖性。同时,与单独TGF-β1刺激相比,添加Renalase共孵育后,细胞内p-smad 2/3和p-p38表达无明显变化,但p-ERK 1/2表达明显下调,差异有统计学意义。而应用质粒转染过表达ERK信号通路后,Renalase抑制TGF-β1诱导的EMT和纤维化的作用被抵消。结论本研究首次证实Renalase可以减轻TGF-β1所致的肾小管上皮细胞间充质转分化和纤维化,其机制可能与抑制ERK 1/2信号通路的激活相关,为临床延缓CKD进展提供新的治疗靶点和理论依据。

足细胞上皮-间充质转分化与肾小球疾病

目的足细胞对于维持肾小球滤过屏障的稳定性极为重要。足细胞的损伤可导致肾小球滤过功能障碍和相关肾脏疾病的发生。上皮-间质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是足细胞损伤的一种表现形式,也是多种肾小球疾病的始动因素之一。本文主要针对足细胞EMT的定义、具体表现、诱导因素、发生机制及相关肾小球疾病及其防治进行综述,以期阐明足细胞EMT最近研究进展,为相关肾脏疾病的治疗提供参考。

苦参素对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞-间质转分化的影响

目的探讨苦参素对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞-间质转分化的影响及可能机制。方法大鼠行单侧输尿管结扎(UUO)建立肾小管间质纤维化模型。实验分为假手术、UUO及苦参素治疗组。治疗组在UUO的基础上每天以苦参素100mg/kg腹腔注射。各组于术后第7、14、21天分别处死5只大鼠,分别检测大鼠血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)及24h尿蛋白定量。用PAS及Masson染色法观察肾脏病理改变。用免疫组织化学法观察转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原(ColⅠ)的表达。用RT-PCR法测定肾组织TGF-β1及α-SMA mRNA水平。结果与UUO组比较,苦参素治疗组肾脏TGF-β1、Smad3、α-SMA及ColⅠ的表达明显减少,肾小管损害和肾间质纤维化的程度也明显减轻。治疗组TGF-β1 mRNA及α-SMA mRNA表达显著低于对应时间点的UUO组。结论苦参素可下调TGF-β1、ColⅠ的表达,抑制肾小管上皮细胞转分化及肌成纤维细胞的活化与增殖,其作用途径可能是通过下调Smad3的表达,从而干预Smad3介导的细胞内信号转导,最终减轻肾间质纤维化。

肾小管上皮-间质细胞转分化模型的建立

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)在人肾小管上皮细胞转分化中的作用,建立肾小管上皮-间质细胞转分化(TEMT)模型。方法实验分为正常对照组和TGF-β1处理组,利用TGF-β1处理人肾小管上皮细胞(HK-2)24 h,分别应用Western blot和免疫荧光方法检测上皮细胞和间质细胞分子标记的表达变化;应用划痕和Transwell assay方法检测细胞迁移及侵袭能力。结果与正常对照组比较,TGF-β1处理组HK-2细胞呈梭形,上皮细胞标记分子E-cadherin表达减弱,差异有统计学意义(P<0.01),间质细胞标记分子骨架蛋白Vimentin和β-catenin表达增强,差异有统计学意义(P<0.01);细胞的迁移及侵袭能力亦明显增强。结论 TGF-β1刺激后HK-2细胞促进上皮细胞转化为间质细胞。

RNA干扰抑制Snail表达对A549细胞上皮-间充质转分化及体外侵袭的影响

目的:研究用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制转录因子Snail表达后,对人肺腺癌A549细胞上皮-间充质转分化表型和体外侵袭能力的影响。方法:构建能表达针对Snail的小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)的RNA干扰载体(Snail siRNA vector)和表达不针对任何已知mRNA的siRNA的阴性对照RNA干扰载体(control siRNA vector),分别转染A549细胞,新霉素抗性筛选得到Snail表达受抑制的A549-siSnail细胞和Snail表达未受影响的A549-siControl细胞。针对非转染(A549-nontransfection)、A549-siSnail、A549-siControl三组细胞,分别采用RT-PCR和Western blot技术检测Snail、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙粘素表达,用Boyden chamber模型检测细胞侵袭能力。结果:A549-nontransfection组:Snail和α-SMA表达强阳性,E-钙粘素表达弱阳性;A549-siSnail组:和A549-nontransfection组相比,Snail和α-SMA表达显著减弱(P<0.01),E-钙粘素表达显著增强(P<0.01),Boyden chamber穿膜细胞数显著减少(P<0.01);A549-siControl组:Snail、α-SMA和E-钙粘素表达,及Boyden chamber穿膜细胞数皆和A549-nontransfection组无显著差异(P>0.05)。结论:通过RNA干扰阻滞Snail表达能有效地抑制A549细胞上皮-间充质转分化及体外侵袭能力。Snail可能在肺腺癌上皮-间充质转分化及侵袭过程中扮演重要角色,抑制Snail表达可能成肺腺癌治疗的可行策略。

泽泻醇B抑制C3a介导的人肾小管上皮细胞间充质转分化的实验研究

目的探讨泽泻醇B能否抑制C3a介导的肾小管上皮细胞间充质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)分别用5ng/mL转化生长因子β(transfor-ming growth factor-β,TGF-β)、0.1μmolC3a和0.1μmolC3a加10μmol泽泻醇B进行干预。分别采用RT-PCR、Western blot和细胞免疫荧光法检测HK-2细胞C3、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和上皮钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA及蛋白表达。结果经C3a刺激后,HK-2细胞C3mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.01),α-SMA mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.01),E-cadherin mRNA及蛋白表达明显减少(P<0.01)。与经外源性C3a干预组比较,经泽泻醇B干预后,HK-2细胞α-SMA mRNA及蛋白表达明显减少(P<0.01),E-cad-herin mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论外源性C3a能诱导肾小管上皮细胞发生EMT,泽泻醇B可抑制C3a诱导的EMT。

血管内皮生长因子对肾小管上皮-间充质细胞转化的作用及其与骨形成蛋白-7、分化抑制因子表达的关系

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)对肾小管上皮-间充质细胞转化(EMT)的作用及其与骨形成蛋白-7(BMP-7)、分化抑制因子(Id)2、Id3表达的关系。方法体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)经转化生长因子-β1(TGF-β1,5ng/ml)与不同浓度VEGF165(0.1、1、10、100ng/ml)共同作用,或TGF-β1(5ng/ml)与血管内皮生长因子受体-1(VEGFR1)抗体(10μg/ml)共同作用48h后,免疫组织化学双染方法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素表达,实时荧光定量PCR法、Westernblot法检测细胞α-SMA、BMP-7、Id2和Id3的表达。TGF-β1(5ng/ml)、VEGF165(100ng/ml)与激活素受体样激酶-6/Fc嵌合体(Alk6/FcChimera)(2μg/ml,中和内源性BMP-7)共同作用48h后,Westernblot法检测细胞α-SMA、Id2的表达情况。结果TGF-β1作用后,α-SMA表达比正常对照显著增强(P<0.05),E-钙黏素、BMP-7、Id2及Id3的mRNA及蛋白质表达均显著减弱(P<0.05)。VEGF165以浓度依赖方式增强BMP-7及Id2蛋白表达,而显著降低TGF-β1上调α-SMA表达的作用(P<0.05)。加入VEGFR1抗体(10μg/ml)后,TGF-β1上调α-SMA表达的作用显著增强(P<0.05),而E-钙黏素、BMP-7、Id2表达显著减弱(P<0.05)。TGF-β1+VEGF165+Alk6/FcChimera共同作用后α-SMA蛋白表达比TGF-β1+VEGF165共同作用后显著增强(P<0.05),而Id2表达差异无显著性。结论VEGF165可抑制TGF-β1诱导HK-2细胞发生EMT;其机制可能与BMP-7和Id2表达上调有关,而与Id3表达变化无关。Id2表达增强可能与VEGF165的直接作用有关,而与BMP-7无关。

TGF-β1/Smad信号通路在大黄素干预人肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的:探讨大黄素干预白蛋白诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)发生转分化过程中是否涉及对TGF-β1/Smad信号通路的调控。方法:用5mg/mL人白蛋白刺激体外培养的HK-2细胞,观察细胞形态变化,RT-PCR法检测α-SMA、E-cadherin、TGF-β1、Smad2 mRNA的表达水平。结果:白蛋白呈时间依赖性诱导α-SMA、TGF-β1、Smad2 mRNA的表达上调,E-cadherin mRNA的表达下调。使用一定浓度的大黄素干预后,明显抑制了白蛋白诱导的上述效应。相关性分析显示:TGF-β1、Smad2 mRNA的表达与α-SMAmRNA的表达呈正相关,与E-cadherin mRNA的表达呈负相关。结论:大黄素抑制人白蛋白诱导的HK-2细胞转分化过程中,TGF-β1/Smad信号通路发挥了重要作用。

黄芪甲苷对TGF-β1诱导下肾小管上皮细胞间充质转分化的保护作用及机制

目的:探讨黄芪甲苷(AS-IV)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)的保护作用及可能机制。方法:将大鼠近端肾小管上皮细胞分为三组:正常对照组、TGF-β1刺激组(5 ng/ml,48h)及AS-IV干预组(TGF-β1刺激的同时加用AS-IV 100 μmol/l)。采用萤火虫荧光素酶法检测细胞内三磷酸腺苷(ATP)含量以评价线粒体功能。采用Western Blot法检测线粒体生物合成及EMT相关指标的表达。结果:TGF-β1刺激下肾小管上皮细胞ATP合成减少,线粒体生物合成相关蛋白下调(P<0.05)。TGF-β1刺激可诱导EMT,表现为纤连蛋白及I型胶原蛋白表达增加、E-钙粘素表达减少(P<0.05)。而AS-IV干预后可显著提高细胞ATP含量、增加线粒体生物合成并改善EMT(P<0.05)。结论:黄芪甲苷可保护TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞间充质转分化,其机制可能与增加线粒体生物合成有关。