保肾通络方对糖尿病肾病小鼠肾小管间质纤维化及上皮细胞间充质转分化的影响

目的:观察保肾通络方对糖尿病肾病(DN)小鼠肾小管间质纤维化及上皮细胞间充质转分化(EMT)的影响。方法:选用KK-Ay小鼠作为DN模型小鼠,随机分为模型组、保肾通络方组及缬沙坦组,正常对照组小鼠选用C57BL/6J小鼠。保肾通络方组小鼠给予保肾通络方灌胃治疗,缬沙坦组小鼠给予缬沙坦灌胃治疗,模型组、正常对照组小鼠给予剂量相同的蒸馏水灌胃治疗;灌胃给药12周后检测各组血清肌酐、尿素氮水平,HE、PAS、Masson染色观察肾组织病理改变,同时进行细胞外基质蛋白CollagenⅠ、FN及肾小管EMT标志蛋白α-SMA、E-cadherin表达检测。结果:模型组小鼠血清肌酐、尿素氮水平较正常对照组明显升高(均P<0.05),保肾通络方组及缬沙坦组小鼠血清肌酐、尿素氮水平较模型组明显降低(均P<0.05)。与正常对照组相比,模型组小鼠肾小管出现明显的间质纤维化及上皮细胞脱落、空泡变性,而保肾通络方组及缬沙坦组小鼠上述病理改变均明显减轻。模型组小鼠肾小管CollagenⅠ、FN蛋白及mRNA表达较正常对照组明显上调(均P<0.05),保肾通络方组及缬沙坦组小鼠肾小管CollagenⅠ、FN蛋白及mRNA表达较模型组明显下调(均P<0.05)。与正常对照组相比,模型组小鼠肾小管上皮细胞α-SMA蛋白及mRNA表达明显上调,E-cadherin蛋白及mRNA表达明显下调(均P<0.05);与模型组相比,保肾通络方组及缬沙坦组小鼠α-SMA蛋白及mRNA表达明显下调,E-cadherin蛋白及mRNA表达明显上调(均P<0.05)。结论:保肾通络方能够改善DN小鼠肾小管间质纤维化,减轻肾小管EMT。

天麻素注射液对高糖诱导的足细胞增殖、迁移和上皮-间质转化的影响及分子机制研究

目的 探讨天麻素注射液(GI)对高糖(HG)诱导的糖尿病肾病(DN)人肾小球足细胞(HGPC)增殖、迁移及上皮-间质转化(EMT)进程的影响,以及分析GI是否通过调控蛋白Janus激酶(JAK)2/信号转导和转录激活因子(STAT)3信号通路而发挥作用。方法 通过含30 mmol/L D-葡萄糖的培养基刺激HGPC建立HG损伤模型作为HG组,同时将体外培养的HGPC细胞分为对照组(Con组,不做干预),不同浓度GI组(10、20、30、40μmol/L GI组)进行预实验,通过细胞活力实验筛出最佳作用浓度作为GI组进行后续实验。后续实验将细胞分为6组,分别是Con组(不做干预)、HG组(加入30 mmol/L D-葡萄糖处理)、GI组(加入最佳作用浓度的GI处理)、JAK2/STAT3信号通路抑制剂(AG490)组(加入30 mmol/L D-葡萄糖+40μmol/L AG490处理)、GI+AG490组(加入30 mmol/L D-葡萄糖+最佳作用浓度的GI+40μmol/L AG490处理)、GI+JAK2/STAT3信号通路激活剂(C-A1)组(加入30 mmol/L D-葡萄糖+最佳作用浓度的GI+20μmol/L C-A1),每组干预时间均为24 h。采用细胞计数试剂盒检测HGPC活力;采用5-乙炔基-2′-脱氧尿苷法检测HGPC增殖能力;通过Transwell小室实验检测HGPC迁移能力;采用蛋白免疫印迹法检测HGPC中EMT相关蛋白及JAK2/STAT3信号通路相关蛋白水平。结果 20μmol/L GI组、30μmol/L GI组、40μmol/L GI组细胞活力均高于HG组(P<0.05),且20μmol/L GI组效果最好,因此后续实验选用20μmol/L作为GI的最佳作用浓度。与Con组相比,HG组细胞迁移数和p-JAK2、p-STAT3、波形蛋白(Vimentin)、纤连蛋白(FN)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白水平均明显升高(P<0.05),细胞增殖率和上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白水平均降低(P<0.05);GI组、AG490组细胞迁移数和p-JAK2、p-STAT3、Vimentin、FN、N-cadherin蛋白水平均低于HG组(P<0.05),细胞增殖率和E-cadherin蛋白水平均高于HG组(P<0.05);与GI组相比,GI+AG490组细胞迁移数和p-JAK2、p-STAT3、Vimentin、FN、N-cadherin蛋白水平均降低(P<0.05),细胞增殖率和E-cadherin蛋白水平均升高(P<0.05);与GI组相比,GI+C-A1组细胞迁移数和p-JAK2、p-STAT3、Vimentin、FN、N-cadherin蛋白水平均升高(P<0.05),细胞增殖率和E-cadherin蛋白水平均降低(P<0.05)。结论 GI可以通过抑制JAK2/STAT3的磷酸化来抑制HGPC的迁移及EMT进程,促进细胞增殖。

归肾丸调控TGF-β/Snail信号通路介导上皮间质转化抑制宫腔粘连的研究

目的研究归肾丸对原代子宫内膜上皮细胞(Primary endometrial epithelial cells,PEEC)纤维化及对TGF-β/Snail信号通路介导上皮间质转化(Epithelial mesenchymal transition,EMT)的调控作用,以阐明其对宫腔粘连(Intrauterine adhesions,IUA)的潜在治疗作用及分子机制。方法利用TGF-β1体外诱导PEEC 48 h以发生EMT,再使用归肾丸含药血清处理PEEC 24 h,通过定量PCR(Quantitative polymerase chain reaction,qPCR)和蛋白质印迹(Western Blot,WB)分别检测TGF-β1下游基因Snail,EMT标志物Vimentin、E-cadherin、N-cadherin,细胞纤维化标志物α-SMA的mRNA水平和蛋白水平的表达。结果归肾丸含药血清经验证无细胞毒性。TGF-β1成功诱导了PEEC发生EMT,表现为Snail、Vimentin、N-cadherin和α-SMA的表达升高,及E-cadherin的表达降低。归肾丸血清抑制了PEEC的EMT并降低了PEEC的纤维化水平,表现为Snail、Vimentin、N-cadherin和α-SMA的表达降低,及E-cadherin的表达升高。结论归肾丸可通过抑制TGF-β/Snail信号通路介导的EMT降低PEEC纤维化水平以治疗宫腔粘连。

百令胶囊对肾小管间质纤维化大鼠肾小管上皮-间质转分化的干预作用(英文)

目的探讨百令胶囊对小管间质纤维化大鼠小管上皮-间质转分化的干预作用。方法利用腺嘌呤诱导建立肾小管间质纤维化大鼠模型,实验SD大鼠随机分为模型组、干预组、对照组各30只,分别于实验第7周、12周、17周收获动物各10只,进行功能学和肾脏组织病理学检测和观察。利用免疫组织化学对骨形态发生蛋白-7(BMP-7)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(-αSMA)在肾小管间质纤维化大鼠中的表达变化进行动态观察及百令胶囊的干预影响。结果实验第7周模型组大鼠即表现出大量蛋白尿、小管损伤、间质的轻度纤维化和炎症细胞浸润(P<0.01);随病程进展,上述病变呈进行性加重(P<0.01)。百令胶囊干预组动物在实验第7周、12周功能学组织学的改善同实验组相比有明显差异(P<0.01),17周后二者无显著差异。免疫组织化学显示百令胶囊12周前能显著上调BMP-7的表达和降低-αSMA和TGF-β1在肾脏小管间质中的表达(P<0.01),12周后这种变化无差异。结论百令胶囊在发病早期通过有效干预上皮-间质转分化达到改善肾脏纤维化的作用,随着肾小管间质纤维化程度的加重,百令胶囊逐渐失去其阻断作用。

锌指蛋白281抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞上皮间质转化和细胞外基质合成

目的探讨锌指蛋白281(ZNF281)在高糖(HG)诱导的肾小管上皮细胞(RTECs)上皮间质转化(EMT)和细胞外基质(ECM)合成中的作用及机制。方法使用HG诱导RTECs以构建糖尿病肾病模型,分为Control组、HG组和Mannitol组,使用CCK-8检测细胞增殖活力。使用小干扰RNA(siRNA)在HG诱导的RTECs中敲低ZNF281的表达水平,分为Control组、HG组、HG+ZNF281 siRNA组和HG+ZNF281 vector组。使用腺苷单磷酸活化蛋白激酶(AMPK)激动剂阿卡地新(AICAR)活化AMPK,分为Control组、HG组、HG+AICAR组和HG+二甲基亚砜组。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测ZNF281、EMT和ECM合成相关指标表达水平。结果与Control组相比,HG组ZNF281、波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)和Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)的蛋白和mRNA表达水平升高,E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平降低;与HG组相比,HG+ZNF281 siRNA组和HG+AICAR组的EMT和ECM合成相关指标的蛋白和mRNA表达水平发生明显变化,同时HG+AICAR组ZNF281的蛋白和mRNA表达水平较HG组降低;在使用AICAR和转染ZNF281过表达质粒共处理的细胞中,AICAR+ZNF281组vimentin、α-SMA、FN、ColⅠ的表达水平较空载组升高,E-cadherin表达水平降低。结论AMPK通过负向调控ZNF281的表达水平进而抑制HG诱导的RTECs中EMT和ECM合成。

苦参素对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞-间质转分化的影响

目的探讨苦参素对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞-间质转分化的影响及可能机制。方法大鼠行单侧输尿管结扎(UUO)建立肾小管间质纤维化模型。实验分为假手术、UUO及苦参素治疗组。治疗组在UUO的基础上每天以苦参素100mg/kg腹腔注射。各组于术后第7、14、21天分别处死5只大鼠,分别检测大鼠血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)及24h尿蛋白定量。用PAS及Masson染色法观察肾脏病理改变。用免疫组织化学法观察转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原(ColⅠ)的表达。用RT-PCR法测定肾组织TGF-β1及α-SMA mRNA水平。结果与UUO组比较,苦参素治疗组肾脏TGF-β1、Smad3、α-SMA及ColⅠ的表达明显减少,肾小管损害和肾间质纤维化的程度也明显减轻。治疗组TGF-β1 mRNA及α-SMA mRNA表达显著低于对应时间点的UUO组。结论苦参素可下调TGF-β1、ColⅠ的表达,抑制肾小管上皮细胞转分化及肌成纤维细胞的活化与增殖,其作用途径可能是通过下调Smad3的表达,从而干预Smad3介导的细胞内信号转导,最终减轻肾间质纤维化。

肾小管上皮-间质细胞转分化模型的建立

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)在人肾小管上皮细胞转分化中的作用,建立肾小管上皮-间质细胞转分化(TEMT)模型。方法实验分为正常对照组和TGF-β1处理组,利用TGF-β1处理人肾小管上皮细胞(HK-2)24 h,分别应用Western blot和免疫荧光方法检测上皮细胞和间质细胞分子标记的表达变化;应用划痕和Transwell assay方法检测细胞迁移及侵袭能力。结果与正常对照组比较,TGF-β1处理组HK-2细胞呈梭形,上皮细胞标记分子E-cadherin表达减弱,差异有统计学意义(P<0.01),间质细胞标记分子骨架蛋白Vimentin和β-catenin表达增强,差异有统计学意义(P<0.01);细胞的迁移及侵袭能力亦明显增强。结论 TGF-β1刺激后HK-2细胞促进上皮细胞转化为间质细胞。

去甲斑蝥素抑制单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮-间充质转分化的实验研究

目的:利用单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型,观察去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对肾小管上皮细胞间质转分化的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(UUO组)和UUO+NCTD治疗组(NCTD组),每组6只。采用单侧(左)输尿管结扎方法,建立梗阻性肾小管间质纤维化大鼠模型,Sham组只游离输尿管而不结扎。术后14d处死动物,取结扎侧肾脏,同时处死Sham组大鼠,取出肾组织。采用免疫组化、Western Blot及RT-PCR检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cadherin)与转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白的mRNA表达的变化。结果:免疫组化、Western Blot及RT-PCR均显示,与Sham组比较,UUO组肾组织α-SMA和TGF-β1的mRNA表达升高、E-cadherin蛋白和mRNA表达降低(P<0.05);NCTD能抑制UUO大鼠肾组织α-SMA和TGF-β1表达的上调,上调E-cadherin的表达(P<0.05)。结论:NCTD具有抑制UUO大鼠肾小管上皮-间充质转化的作用,该作用可能与抑制TGF-β1的过表达有关。

血清反应因子参与单侧输尿管结扎大鼠肾小管上皮间充质转分化

目的:探讨血清反应因子(SRF)在肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)过程中的作用和可能机制。方法:将54只清洁级(SPF级)SD大鼠中36只行单侧输尿管结扎(UUO组),另外18只为假手术组(Sham组)。在UUO术后3 d和14 d分别处死18只大鼠并留取肾脏组织,应用免疫组织化学方法检测肾小管上皮细胞中SRF、E-cadherin、α-SMA和Snail的表达变化。结果:UUO组3 d和14 d的肾组织中SRF、α-SMA和Snail表达显著增高(P<0.05),其中SRF在3 d和14 d的阳性率分别为83.3%、94.4%,假手术组为5.56%;E-cadherin表达显著下降(P<0.05)。结论:SRF可能参与了单侧输尿管结扎大鼠肾小管上皮间充质细胞转分化的过程。

泽泻醇B抑制C3a介导的人肾小管上皮细胞间充质转分化的实验研究

目的探讨泽泻醇B能否抑制C3a介导的肾小管上皮细胞间充质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)分别用5ng/mL转化生长因子β(transfor-ming growth factor-β,TGF-β)、0.1μmolC3a和0.1μmolC3a加10μmol泽泻醇B进行干预。分别采用RT-PCR、Western blot和细胞免疫荧光法检测HK-2细胞C3、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和上皮钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA及蛋白表达。结果经C3a刺激后,HK-2细胞C3mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.01),α-SMA mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.01),E-cadherin mRNA及蛋白表达明显减少(P<0.01)。与经外源性C3a干预组比较,经泽泻醇B干预后,HK-2细胞α-SMA mRNA及蛋白表达明显减少(P<0.01),E-cad-herin mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论外源性C3a能诱导肾小管上皮细胞发生EMT,泽泻醇B可抑制C3a诱导的EMT。

去甲斑蝥素对TGF-β_1诱导的人近端肾小管细胞上皮间质转分化以及转录因子Snail1表达的影响

目的:探讨去甲斑蝥素对体外人源性肾小管细胞株(HK-2)上皮间质转分化以及转录因子Snail1的影响。方法:常规培养HK-2细胞,分为对照组、TGF-β1组、去甲斑蝥素组(NCTD组)。对照组为无血清DMEM培养,TGF-β1组为TGF-β15ng/ml诱导,NCTD组为不同浓度NCTD(0.5、1.0、2.5μg/ml)与TGF-β1(5ng/ml)共同作用,各组作用时间48h。采用RT-PCR、Western blot分别检测α-SMA、E-cadherin与Snail1表达水平的变化。结果:与对照组相比,TGF-β1组α-SMA mRNA和蛋白表达上调(P<0.05),E-cadherin mRNA和蛋白表达下调(P<0.05);与TGF-β1组相比,NCTD干预组α-SMA mRNA和蛋白表达下调(P<0.05),而E-cadherin mRNA和蛋白表达上调(P<0.05),且均呈剂量依赖性。与对照组相比,TGF-β1组Snail1 mRNA和蛋白表达上调(P<0.05);与TGF-β1组比较,NCTD干预组Snail1 mRNA和蛋白表达下调(P<0.05),具有一定的剂量依赖关系。结论:去甲斑蝥素具有抑制肾小管上皮细胞EMT的作用,该作用可能与下调转录因子Snail1的表达有关。

miR-21对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞间质转分化的影响

目的:观察miR-21在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)上皮间质转分化(EMT)中的作用,并探讨miR-21参与调控HK-2细胞EMT的可能靶点。方法:体外培养的HK-2细胞分为6组:正常对照组、转化生长因子β1(TGF-β1)模型组、miR-21 mimic阴性组、miR-21 mimic组、miR-21 inhibitor阴性组和miR-21 inhibitor组。细胞经4 ng/ml TGF-β1处理建立EMT模型,检测miR-21和EMT相关指标的表达变化,利用基因转染技术,将miR-21 mimic质粒或miR-21 inhibitor质粒转染经TGF-β1处理的HK-2细胞,使细胞过表达或抑制表达miR-21,在此基础上观察细胞EMT相关指标的变化以及磷酸酯酶(PTEN)基因的影响。结果:(1)与正常组相比,模型组的miR-21含量显著升高(P<0.05),上皮表型标志物E-cadherin的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),间质表型标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白水平也显著升高(P<0.05,P<0.01);(2)转染miR-21 mimic后,与miR-21 mimic阴性对照组相比,miR-21含量显著升高(P<0.01),PTEN、E-cadherin的mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05,P<0.01),α-SMA mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.05,P<0.01);转染miR-21 inhibitor后,与miR-21 inhibitor阴性对照组相比,miR-21含量显著降低(P<0.01),PTEN、E-cadherin的mRNA和蛋白含量显著升高(P<0.05,P<0.01),α-SMA mRNA、蛋白水平显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:miR-21在TGF-β1诱导的HK-2细胞EMT发生中具有重要作用,并且可能通过靶基因PTEN参与EMT相关分子的表达调控。

Wnt-7a蛋白通过wnt/β-catenin通路抑制单侧输尿管梗阻小鼠肾脏上皮细胞-间充质细胞转分化

目的:观察Wnt-7a蛋白对单侧输尿管梗阻模型小鼠肾脏纤维化的拮抗作用及其可能机制。方法:雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、UUO模型组和Wnt-7a蛋白治疗组,术后7 d行Masson染色观察肾间质纤维化程度,免疫组化染色检测肾组织E-钙黏素、α-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白的表达,免疫印迹法测定肾皮质中E-钙黏素、α-平滑肌肌动蛋白及β-连环蛋白(β-catenin)的蛋白质表达。结果:与模型组相比,治疗组肾组织间质纤维化相对面积显著减少,α-平滑肌肌动蛋白及波形蛋白的表达显著减少,E-钙黏素表达显著增多(P<0.05)。同时,治疗组肾组织中β-catenin表达较模型组显著减少(P<0.05)。结论:Wnt-7a蛋白可以抑制肾脏上皮细胞-间充质细胞转分化的发生而减轻肾脏纤维化,其可能是通过抑制经典的wnt/β-catenin通路。

中药抗肾小管上皮细胞间充质转分化的研究进展

肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis,RIF）是各种慢性肾脏疾病发展到终末期肾衰竭的共同途径,以细胞外基质（extracellular matrix,ECM）在肾间质的过度积聚与沉积,以及成纤维细胞的增生为特征,是多种细胞、生长因子、细胞因子,共同参与、相互作用，最终导致ECM合成增多，降解减少，过度沉积的结果。

SOCS2在1型糖尿病肾病肾小管上皮细胞间质转分化中的作用

目的:研究细胞因子信号传导抑制因子(SOCS)2在1型糖尿病肾病(T1DN)肾小管上皮细胞间质转分化(EMT)的作用。方法:28只雄性C57/BL6小鼠随机分为对照组(n=7)和T1D组(n=21)。T1D组单次空腹腹腔注射链脲佐菌素(STZ)100 mg/kg,48 h后随机血糖测定结果≥16.7 mmol/L,确诊为1型糖尿病(T1D)。建模成功后,将21只T1D小鼠随机分为3组:T1DN组(n=7)、联合组(贝那普利联合胰岛素用药,n=7)、胰岛素组(胰岛素单独用药,Insulin,n=7)。持续给药8周后处死小鼠,收集血清、尿和肾组织,分别进行生化、病理和相关蛋白与mRNA的检测。结果:与对照组[(3.81±0.24)mmol/L,(32±4.68)μg/24 h]相比,T1DN组血糖、尿蛋白[(21.70±2.26)mmol/L,(286±42.41)μg/24 h]均明显增高(P<0.001),联合组血糖、尿蛋白[(11.84±0.69)mmol/L,(173±17.83)μg/24 h]均明显下降(P<0.001),而Insulin组[(13.05±0.81)mmol/L]血糖明显下降(P<0.001),但对尿蛋白[(262±34.40)μg/24 h]作用不明显。天狼星红染色结果显示对照组肾组织结构完整,肾间质未见胶原纤维沉积;T1DN组肾组织结构破坏,间质胶原纤维沉积明显增多(P<0.001);联合组上述病变明显减轻(P<0.001),Insulin组减轻效果不明显。T1DN组肾组织中FN和SOCS2表达明显增加,E-cadherin表达明显减少(P<0.001);联合组E-cadherin表达明显增加,FN和SOCS2表达明显减少(P<0.001);Insulin组的效果不明显。Pearson相关性分析显示,T1DN小鼠肾组织中SOCS2的表达水平与肾组织胶原纤维沉积量和FN呈正相关,与E-cadherin呈负相关。结论:SOCS2在T1DN肾组织的EMT过程中发挥重要作用。

配对盒基因2对正常肾小管上皮细胞间充质转分化的诱导作用

目的:观察体外转染配对盒基因2(PAX2)对肾小管上皮细胞表型标志物的影响,探讨PAX2诱导转分化的作用,为肾纤维化治疗提供依据。方法:正常肾小管上皮细胞株NRK52E分为对照组、空载组(转染pGC-Fu空质粒)和转染组(采用脂质体转染法将pGC-FU-GFP-PAX2质粒转染至细胞中)。转染72h后应用倒置相差显微镜观察各组细胞形态,应用Western blotting法和Real-time PCR法检测PAX2蛋白和mRNA表达水平;转染72h后应用免疫组织化学法、Western blotting法和Real-time PCR法检测各组细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-肌动蛋白(α-SMA)及其mRNA表达水平。结果:pGC-FU-GFP-PAX2转染72h后,转染组细胞绿色荧光强度较对照组明显增强,且肾小管上皮细胞的形态伸长;Western blotting法检测,转染组PAX2蛋白表达水平明显高于空载组和对照组(P<0.05);Real-time PCR检测,转染组细胞的PAX2mRNA表达水平明显高于空载组和对照组(P<0.05);转染组细胞中的E-cadherin染色较空载组和对照组明显减弱;α-SMA染色较空载组和对照组明显增强。Western blotting法检测,转染组细胞中E-cadherin表达水平明显低于空载组和对照组(P<0.05);α-SMA表达水平明显高于空载组和对照组(P<0.05);Real-time PCR检测,转染组细胞中E-cadherin mRNA表达水平明显低于空载组和对照组(P<0.05);α-SMA mRNA表达水平明显高于空载组和对照组(P<0.05)。结论:PAX2转染正常肾小管上皮细胞后E-cadherin表达减少,α-SMA表达增加,PAX2可能在体外诱导正常肾小管上皮细胞间充质转分化。

慢性马兜铃酸肾病大鼠肾小管上皮细胞转分化与肾间质纤维化的关系

目的:研究慢性马兜铃酸肾病(CAAN)大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(TEMT)与肾间质纤维化之间关系。方法:雄性SD大鼠随机分为2组,每组12只。模型组予关木通浸膏水溶液灌胃制成CAAN模型,对照组予自来水灌胃。于第4周和第16周末分批处死大鼠,取肾组织切片做免疫组化Ⅰ型胶原(ColⅠ)染色、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)染色、α-SMA及增殖细胞核抗原(PCNA)双染,然后进行图像分析。结果:与对照组比较,模型组中α-SMA+肾小管百分数、α-SMA+PCNA+肾小管上皮细胞(TEC)数、肾间质α-SMA+细胞数及肾间质ColⅠ相对阳性面积均显著增加(P<0.01),其中前二者分别与后二者呈显著正相关(P<0.05或P<0.01)。在模型组的肾组织中观察到部分α-SMA+TEC失去正常形态,其相邻肾小管基底膜断裂,α-SMA+TEC出现于裂孔中,正向间质迁移。结论:CAAN大鼠TEC再生时即可发生TEMT,而此TEMT与肾间质纤维化密切相关。

转化生长因子β1和上皮细胞间充质转分化在糖尿病肾脏疾病中的作用

在美国糖尿病。肾脏疾病（diabetic kidney disease，DKD）的发病率在近十年内升高近2倍，有近50％的患者走向终末期肾脏疾病（end stage renal disease，ESRD）。DKD已经成为导致患者肾脏代替治疗的常见肾脏病之一。高血糖引起的结构损伤包括基底膜肥厚、肾小管萎缩及肾间质纤维化，这些改变导致了肾小球滤过率增加、蛋白尿、高血压及肾功能的减退。在组织学上，

微小RNA-29b在肾小管上皮细胞的表达及调节上皮间质转分化的作用机制

目的研究血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)对大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)中微小核糖核酸(miRNA)-29b(miR-29b)表达的影响,以及miR-29b在细胞间质转分化中的作用,为研究肾间质纤维化机制提供新思路。方法体外培养NRK-52E,将不加入AngⅡ的细胞作为对照组,加入AngⅡ的细胞为实验组,按加入不同浓度的AngⅡ(10^(-9)mol/L、10^(-7)mol/L)及AngⅡ刺激时间(12 h、24 h、48 h)的长短又分为实验亚组,同时设立miR-29b mimic转染组及阴性对照组。显微镜下观察对照组与实验组细胞的形态学改变,运用实时荧光定量聚合酶链反应检测rniR-29b表达,蛋白质免疫印迹试验检测Snail、E钙黏附素(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白表达。两两比较用t检验。结果实验组中AngⅡ刺激12 h后,细胞形态呈梭形改变;随着AngⅡ刺激浓度的增加,α-SMA、Snail蛋白表达显著升高,E-cadherin表达量显著下降,与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组中随着AngⅡ刺激时间的延长,细胞α-SMA、Snail和E-cadherin的表达呈时间依赖性,α-SMA、Snail的表达显著增加,E-cadherin表达量显著降低,与对照组相比,P<0.05。同时AngⅡ呈浓度和时间依赖性下调NRK-52E细胞中miR-29b表达,与对照组相比,P<0.05。此外,miR-29b mimic转染组和阴性对照组相比,α-SMA、Snail蛋白表达显著降低(P<0.05),E-cadherin表达量显著升高(P<0.05)。结论 AngⅡ可诱导NRK-52E细胞发生间质转分化,且miR-29b可抑制AngⅡ诱导的NRK-52E细胞发生间质转分化。