儿童1p与16q共缺失相关性肾母细胞瘤1例

患者女性,2岁6个月,2021年11月检查发现右侧腹部肿块就诊。B超示:右后腹膜探及一低回声包块,大小14.8 cm×11.8 cm×11.7 cm,边界清,形态不规则,内回声不均匀,内见少量细小钙化斑及散在细小无回声区,与右肾关系密切,包块左下切缘可见残余肾组织,包块上缘紧贴肝右叶,与肝脏分界尚清,肝脏受压向左移位。包块后缘紧贴脊柱,左侧缘紧贴腹腔干及肠系膜上动脉,血管受压向左移位。包块边缘可见多枚低回声结节,皮髓质分界不清。下腔静脉局部受压变窄。

青蒿琥酯调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路对肾母细胞瘤细胞增殖、凋亡和自噬的影响

目的探讨青蒿琥酯对肾母细胞瘤细胞增殖、凋亡和自噬的作用及其分子机制。方法体外培养人肾母细胞瘤细胞株SK-NEP-1并以0、12.5、25.0、50.0、100.0、150.0μmol/L浓度的青蒿琥酯处理,采用CCK-8法测定各组细胞活力并筛选出青蒿琥酯最佳作用浓度。将SK-NEP-1细胞随机分为对照组、青蒿琥酯(100.0μmol/L)组、AMPK抑制剂Dorsomorphin(10.0μmol/L)组、青蒿琥酯(100.0μmol/L)+Dorsomorphin(10.0μmol/L)组,以青蒿琥酯和Dorsomorphin单独或联合处理各组细胞后,采用CCK-8法检测各组细胞活力,采用平板克隆形成实验检测各组细胞的集落形成情况;采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况;采用MDC荧光染色法检测各组细胞的自噬情况;采用蛋白免疫印迹法检测各组细胞中凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、cleaved多聚ADP核糖聚合酶(PARP)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]、自噬相关蛋白[轻链3(LC3)Ⅱ、LC3Ⅰ、Beclin-1]及AMPK/mTOR/ULK1信号通路相关蛋白的表达情况。结果不同浓度青蒿琥酯均可抑制SK-NEP-1细胞的活力(均P<0.05),且随浓度升高其抑制作用增强。用100.0μmol/L青蒿琥酯和10.0μmol/L Dorsomorphin分别处理SK-NEP-1细胞后,与对照组相比,青蒿琥酯组细胞的凋亡率、自噬空泡相对量及Bax、cleaved PARP、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1蛋白表达水平均升高(均P<0.05),细胞活力、集落形成率及Bcl-2、p-mTOR/mTOR蛋白表达水平均降低(均P<0.05);Dorsomorphin组细胞凋亡率、自噬空泡相对量及Bax、cleaved PARP、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1蛋白表达水平均降低(均P<0.05),细胞活力、集落形成率及Bcl-2、p-mTOR/mTOR蛋白表达水平均升高(均P<0.05)。青蒿琥酯和Dorsomorphin联合干预SK-NEP-1细胞逆转了青蒿琥酯的抗肿瘤作用。结论青蒿琥酯可能通过激活AMPK/mTOR/ULK1信号通路增强肾母细胞瘤细胞自噬,进而抑制其增殖并促进其凋亡。

下调上皮内膜蛋白1抑制胶质母细胞瘤恶性生物学行为的实验研究

目的研究下调上皮内膜蛋白1(EMP1)对胶质母细胞瘤U251与U87细胞系增殖、侵袭、迁移、凋亡及U87细胞系荷瘤小鼠肿瘤体积及免疫组化指标的影响。方法采用siRNA干扰技术下调胶质母细胞瘤细胞系U87与U251中EMP1的表达。RT-qPCR和Western blot检测EMP1mRNA和蛋白的表达;CCK8和Transwell实验检测EMP1下调后肿瘤细胞增殖迁移及侵袭能力;流式细胞术检测EMP1下调后肿瘤细胞凋亡表达水平;构建U87细胞系裸鼠荷瘤模型,免疫组化法检测Ki-67和MMP2的表达。结果RT-qPCR和Western blot结果显示siRNA-EMP1导致EMP1的表达降低(P<0.05),CCK8和Transewll实验显示下调EMP1后肿瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力被显著抑制(P<0.05);流式细胞术结果显示下调EMP1后肿瘤细胞的凋亡能力明显增强(P<0.05);U87细胞系裸鼠荷瘤模型中下调EMP1后肿瘤细胞生长延缓,Ki-67及MMP2的表达降低。结论EMP1的表达下调可以抑制胶质母细胞瘤的增殖、迁移及侵袭,促进凋亡,延缓荷瘤小鼠肿瘤的生长与侵袭,从而抑制胶质母细胞瘤的恶性生物学行为。

肾母细胞瘤组织中ras癌基因P^(21)蛋白和表皮细胞生长因子受体的观察

应用免疫组化方法观察了30例肾母细胞瘤组织中ras癌基因P^21蛋白和表皮细胞生长因子受体(EGFr),发现P^21蛋白主要在间叶细胞表达。EGFr阳性细胞在间叶细胞和肾小管上皮型细胞中多见,且以上皮型细胞呈强阳性染色。结果提示肾母细胞瘤组织细胞学和基因蛋白水平表达的多样性。

核纤层蛋白基因在胶质母细胞瘤恶性生物学行为中的作用

目的:研究核纤层蛋白基因(LMNA)在人类胶质母细胞瘤中的表达特点及该基因在胶质母细胞瘤发病过程中的作用机制。方法:分析公共数据库TCGA中LMNA基因在胶质母细胞瘤中的表达及其与患者预后的关系。构建LMNA基因的敲减慢病毒,构建胶质母细胞瘤细胞系U87的LMNA基因稳定敲减株;进一步对U87的LMNA基因敲减株及其对照细胞株进行克隆形成实验和细胞3D成球实验,检测LMNA基因对细胞增殖与成球能力的影响;通过替莫唑胺加药实验检测LMNA基因敲减细胞株对替莫唑胺的耐药性;最后经裸鼠颅内种瘤实验检测LMNA基因敲减在体内对胶质母细胞瘤生长的抑制作用。结果:TCGA数据显示,LMNA基因在胶质母细胞瘤组织中的表达程度显著高于正常组织,且与患者生存预后呈负相关,与肿瘤细胞恶性程度呈正相关。LMNA基因敲减显著降低了U87细胞株的克隆生成及细胞成球能力,显著增加了U87细胞株对替莫唑胺的敏感性;裸鼠颅内种瘤实验显示,LMNA基因敲减的U87细胞株在裸鼠脑内生成的肿瘤体积显著减小,且小鼠存活时间延长。结论:LMNA基因在胶质母细胞瘤中表达增高,与患者生存呈负相关,LMNA基因敲减可抑制U87胶质母细胞瘤细胞株的增殖,并增加对替莫唑胺的敏感性,是胶质母细胞瘤治疗的潜在靶点。

山奈酚靶向B细胞淋巴瘤2相关蛋白A1抑制肾透明细胞癌细胞生物行为

目的 探讨山奈酚(Kaempferol)靶向B淋巴细胞瘤2相关蛋白(BCL2)A1抑制肾透明细胞癌(ccRCC)细胞的作用机制。方法 将ccRCC细胞(ACHN和769-P)分成Vector组(转染空载质粒)或Control组(正常培养)、Kaempferol组(Kaempferol处理细胞)和Kaempferol+BCL2A1组(转染BCL2A1并用Kaempferol处理)。生物信息学预测Kaempferol靶点并分析其与临床不良表型之间关系。噻唑蓝(MTT)检测不同浓度Kaempferol处理细胞的活力。CCK-8试剂盒和克隆形成检测细胞增殖能力。Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力。裸鼠移植瘤实验检测Kaempferol体内抑制细胞增殖能力。免疫组化检测增殖细胞抗原Ki67。Western印迹检测BCL2A1及上皮细胞间质转化(EMT)相关蛋白表达。结果 生物信息学数据库和软件分析显示,Kaempferol靶向BCL2A1,BCL2A1在ccRCC组织中表达上调且与临床不良表型有关。Kaempferol浓度和时间依赖性明显抑制ccRCC细胞BCL2A1蛋白表达(P<0.05)。以120或150μmol/L浓度分别作用ACHN、769-P细胞后,细胞活力明显下降(P<0.05)。以相应浓度Kaempferol作用细胞后,ccRCC细胞增殖、迁移和侵袭能力明显下降(P<0.05)。Kaempferol组移植瘤体积、重量、Ki67相对表达量和BCL2A1蛋白表达明显小于Control组(P<0.05)。与Vector组相比,BCL2A1组中BCL2A1蛋白表达明显增加(P<0.05)。与Control组相比,Kaempferol组中BCL2A1蛋白表达、增殖细胞、克隆细胞、迁移和侵袭细胞数明显减少(P<0.05);与Kaempferol组相比,Kaempferol+BCL2A1组上述指标明显增多(P<0.05)。细胞经Kaempferol干预后,E-cadherin蛋白表达明显增加,N-cadherin和Vimentin蛋白表达明显减少,而BCL2A1可明显逆转Kaempferol对EMT相关蛋白表达的影响(P<0.05)。结论 Kaempferol可抑制细胞增殖、迁移和侵袭能力,其可能是通过靶向调节BCL2A1蛋白表达,影响EMT相关蛋白表达实现的。

p53基因突变对胶质母细胞瘤细胞Connexin45蛋白表达影响

目的探究p53基因突变对胶质母细胞瘤细胞连接蛋白45(Connexin45)表达的影响。方法培养胶质母细胞瘤细胞U87细胞(p53野生型)和U251细胞(p53突变型),使用免疫印迹法检测两种细胞P53和Con-nexin45蛋白的表达。结果与U87细胞相比,U251细胞中P53蛋白和Connexin45蛋白的表达均明显降低,差异均有统计学意义(t=6.054、4.199,P<0.05)。结论p53突变可能会引起胶质母细胞瘤细胞Connexin45蛋白的表达降低。

用免疫组化法检测肾母细胞瘤过度表达基因蛋白在大鼠中枢神经系统的分布

为探讨肾母细胞瘤过度表达基因（ＮＯＶ）在中枢神经系统发育和分化过程中的作用，用免疫组织化学ＡＢＣ方法辅以微波抗原修复技术研究ＮＯＶ原癌基因蛋白的分布和定位。结果发现，ＮＯＶ蛋白在成年大鼠的中枢神经系统中有较为广泛的存在，其分布区域包括大脑皮质、海马、丘脑和下丘脑的部分核团、脑桥及脊髓前角。结果提示：ＮＯＶ基因在中枢神经系统的功能活动中可能起重要作用。

血清VEGF、MIP-1α、MVD在不同病理特征肾母细胞瘤患儿中的表达水平

目的:分析血清血管内皮生长因子(VEGF)、巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)、微血管密度(MVD)在不同病理特征肾母细胞瘤患儿中的表达水平。方法:选取2015年1月至2023年5月该院收治的89例肾母细胞瘤患儿设为观察组,另选取同期该院89名健康体检儿童设为健康组。比较两组及不同病理特征肾母细胞瘤患儿血清VEGF、MIP-1α、MVD水平。结果:观察组血清VEGF、MIP-1α、MVD水平均高于健康组,差异有统计学意义(P<0.05);不同病理特征肾母细胞瘤患儿血清VEGF、MIP-1α、MVD水平比较,Ⅲ~Ⅳ期>I~Ⅱ期,肿瘤破裂>肿瘤未破裂,淋巴结转移>淋巴结未转移,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:肾母细胞瘤患儿血清VEGF、MIP-1α和MVD水平较高且与病理分期、肿瘤破裂情况、淋巴结转移情况等病理特征存在相关性。

肾母细胞瘤中CyclinD1蛋白的表达及其意义

目的探讨CyclinD1蛋白在肾母细胞瘤中表达及其意义。方法将28例肾母细胞瘤和19例瘤旁肾组织制作组织芯片,并用免疫组织化学方法检测其中CyclinD1蛋白及p53蛋白的表达。结果CyclinD1和p53蛋白在肾母细胞瘤和瘤旁肾组织标本中的阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05),在肾母细胞瘤不同分化程度组差异亦有统计学意义(P<0.05)。CyclinD1蛋白表达与p53蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论CyclinD1及p53可作为判断肾母细胞瘤分化程度的标志物,CyclinD1蛋白异常表达及p53突变可能在肾母细胞瘤发生中发挥重要作用。

肾母细胞瘤抑制基因影响足细胞结构及功能的研究进展

足细胞是肾小球滤过屏障的重要组成部分,足细胞损伤是肾小球硬化的初始事件,可导致蛋白尿、肾病综合征等。在儿童早发型激素耐药型肾病综合征(steroidresistant nephrotic syndrome,SRNS)患者中,肾母细胞瘤抑制基因(Wilms’tumor suppressor gene,WT1)突变引起的比例仅次于NPHS1、NPHS2,居第3位[1-2]。肾母细胞瘤蛋白1(Wilms’tumor 1,WT1)是调节足细胞基因表达最上游的转录因子之一,可调控几乎所有已知对维持肾小球滤过屏障至关重要的基因[3],在WT1基因敲除小鼠中,足细胞凋亡增加。然而,WT1基因对足细胞功能影响的具体机制仍处于探索阶段,本文综述了WT1基因对足细胞结构及功能影响的研究进展。

肾母细胞瘤基因1对鼻咽癌细胞-2表皮生长因子受体的靶向作用研究

目的探讨肾母细胞瘤基因1(WT1)对鼻咽癌细胞(CNE)-2表皮生长因子受体(EGFR)的靶向作用,证实WT1对CNE-2免疫活性的影响。方法采用WT1对CNE-2进行处理,借助蛋白质免疫印迹法(Western blot)对EGFR的蛋白表达情况进行检测,借助CKK-8观察CNE-2增殖能力情况,借助流式细胞术观察CNE-2凋亡情况,借助基质胶侵袭试验(Transwell)测定CNE-2侵袭情况。结果 Western blot测定结果显示,采用WT1组信号强度明显低于二甲亚砜(DMSO)组和空白组,差异均有统计学意义(P<0.05);WT1组检测灰度值为0.358±0.148,DMSO组为1.370±0.068,空白组为1.390±0.077,WT1组检测灰度值明显低于DMSO组和空白组,差异均有统计学意义(P<0.05)。CKK-8检测结果显示,采用WT1进行处理后3、6、9、12h,抑制值表现为逐渐增大,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,空白组细胞凋亡率为(0.832±0.207)%,DMSO组为(2.081±1.221)%,WT1组为(20.731±1.104)%,WT1组细胞凋亡率高于空白组和DMSO组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Transwell测定结果显示,DMSO组穿透细胞数量为67.21±2.17,WT1组为20.13±2.25,WT1组穿透细胞数量低于DMSO组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 WT1抗原能够作为CNE-2EGFR的靶向基因,可较好地实现对CNE-2EGFR免疫活性的抑制。

骨髓增生异常综合征患者外周血单个核细胞中视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指结构基因1的表达

目的探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血单个核细胞(PBMC)中视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指结构基因1(RIZ1)的表达及其临床意义。方法选取2012年7月至2015年7月于新乡医学院第一附属医院收治的MDS患者86例为研究对象(MDS组),并选取同期体检健康者90例作为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot法检测PBMC中RIZ1蛋白及其mRNA表达水平,并分析RIZ1表达与MDS患者临床病理特征的关系。结果对照组和MDS组受试者PBMC中RIZ1 mRNA表达水平分别为1.73±0.41和0.47±0.18,MDS组患者PBMC中RIZ1 mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05)。对照组和MDS组受试者PBMC中RIZ1蛋白表达水平分别为1.32±0.36和0.35±0.22,MDS组患者PBMC中RIZ1蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.05)。RIZ1蛋白表达与MDS患者的年龄、性别、白细胞计数、血红蛋白水平及血小板计数无关(P>0.05),而与骨髓原始细胞比例、世界卫生组织(WHO)分型及染色体核型有关(P<0.05)。结论 RIZ1在MDS患者PBMC中呈低水平表达,并与患者的骨髓原始细胞比例、WHO分型及染色体核型显著相关,这为MDS的早期诊断和靶向治疗提供了新的思路。

维吾尔族成人急性髓系白血病(非急性早幼粒细胞白血病)骨髓肾母细胞瘤基因1和转录因子ETS-1表达与预后的关系

目的检测维吾尔族成人急性髓系白血病(非急性早幼粒细胞白血病)[AML(非M3)]病人骨髓肾母细胞瘤基因1(WT1)和转录因子ETS-1表达水平,并探讨二者与AML(非M3)预后的关系。方法选取2015年6月至2018年10月喀什地区第一人民医院血液科收住的105例维吾尔族初诊AML(非M3)病人为观察组。选取同期于该院100例健康体检者为对照组A,及在该院治疗的100例汉族初诊AML(非M3)病人为对照组B。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测病人骨髓WT1基因和转录因子ETS-1的表达水平;多因素logistic回归分析AML的影响因素;采用Kaplan-Meier法描述生存曲线。结果观察组和对照组B白细胞计数明显高于对照组A(P<0.05),血小板计数及血红蛋白明显低于对照组A(P<0.05);观察组和对照组B病人白细胞计数、血小板计数、血红蛋白比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组骨髓WT1、ETS-1表达水平分别为0.83±0.15、0.92(0.22,1.23),明显高于对照组B的0.35±0.14、0.48(0.24,1.01)和对照组A的0.01±0.01、0.02(0.01,0.03)(P<0.05),对照组B骨髓WT1、ETS-1表达水平明显高于对照组A(P<0.05)。logistic回归分析显示,WT1、ETS-1均是AML的危险因素;以AML(非M3)病人WT1、ETS-1中位数为界分为低表达组与高表达组,K-M显示WT1、ETS-1低表达组生存率高于高表达组(P<0.05)。结论维吾尔族成人AML(非M3)病人骨髓WT1和ETS-1水平呈高表达,且WT1和ETS-1高表达与疾病的发生及病人预后不良有关。

Vimentin及Cyclin D_1蛋白在肾母细胞瘤中的表达及临床意义

目的:探讨Vimentin及CyclinD1蛋白在肾母细胞瘤中的表达及临床意义。方法:使用免疫组化ABC法测定肾母细胞瘤和正常对照组中Vimentin及CyclinD1蛋白的表达。结果:Vimentin的表达仅在肾母细胞瘤组和正常对照组的上皮分化区中对比有显著差异(P<0.05),其阳性表达率分别为93.9%(31/33)和40.0%(4/10)。Vimentin强表达与肾母细胞瘤的组织学分级相关,低分化组强阳性率72.2%(13/18),比中度分化组37.5%(3/8)和高分化组14.3%(1/7)明显高;且Vimentin强表达与肿瘤预后密切相关,转移、复发组与无转移、复发组Vimentin强阳性率分别为76.5%(13/17)和25.0%(4/16),差异有显著性(P<0.05)。CyclinD1蛋白在肾母细胞瘤组的上皮分化区中表达率为75.8%(25/33),而在正常对照组的相应表达率为40.0%(4/10),有显著性差异(P<0.05),但二者在间叶分化区的阳性表达率无统计学意义(P>0.05),且其表达与肿瘤组织学分级无关,同时CyclinD1在转移、复发组和无转移、复发组中的强阳性表达率分别为58.8%(10/17)和18.8%(3/16),有显著性差异(P<0.05)。结论:Vimentin及CyclinD1蛋白与肾母细胞瘤的发生有关,且Vimentin高表达与肿瘤分级程度及复发、转移等因素有关,此二者均可作为评估肾母细胞瘤预后的指标。

肾母细胞瘤中cyclinD1和P16蛋白的表达研究

目的:探讨cyclinD1和P16蛋白在肾母细胞瘤发生发展中的作用及其与临床病理特征的关系。方法:应用免疫组化法测定36例肾母细胞瘤和8例正常肾脏组织中cyclinD1和P16蛋白的表达。结果:(1)肾母细胞瘤中cyclinD1及P16蛋白的表达阳性率分别为55.56%(20/36)、61.11%(22/36);肾母细胞瘤组cyclinD1蛋白表达与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05),瘤组织P16蛋白表达与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)肾母细胞瘤的组织分型、临床分期和有无淋巴结转移对cyclinD1和P16蛋白表达的影响无显著性差异(P>0.05)。(3)cyclinD1蛋白与P16蛋白的表达无明显相关性(P>0.05)。结论:(1)cyclinD1蛋白的高表达与肾母细胞瘤的发生密切相关。(2)cyclinD1和P16蛋白的浆型表达与该肿瘤的发生密切相关。

细胞周期蛋白D1(cyclinD1)及p16蛋白在肾母细胞瘤中的表达

目的 探讨细胞周期蛋白D1(cyclinD1)和p16蛋白在肾母细胞瘤中的表达、相关性及其意义。方法 应用免疫组织化学方法检测 4 2例肾母细胞瘤患者组织中cyclinD1和 p16蛋白的表达情况。结果 4 2例中cyclinD1蛋白过表达率为 4 5 .2 3% ,p16蛋白表达缺失率为 6 9.0 4 % ,p16阳性表达与病理组织类型、患儿预后明显相关 (P <0 .0 1)阳性表达者预后好。结论 (1) p16 -cyclinD1- pRb通路异常与肾母细胞瘤的发病机制密切相关 ,(2 )cyclinD1过表达是肿瘤发生的早期事件 ,(3) p16蛋白表达可作为判断肾母细胞瘤预后的一项指标。

肾母细胞瘤WT_1基因缺失

目的 对 30例散发性肾母细胞瘤WT1基因缺失进行检测 ,并分析其与组织类型的关系。方法 采用Southern印迹分子杂交技术。结果 2例WT1基因内缺失为间质优势型肾母细胞瘤。结论 肾母细胞瘤的病因学十分复杂 ,WT1基因缺失可能与间质优势型肾母细胞瘤的发生有关。

肾母细胞瘤组织WT1、P53基因缺失检测

目的:对肾母细胞瘤组织WT1、P53基因缺失情况进行检测。方法:30例散发性肾母细胞瘤组织,其中上皮优势型6例,母细胞优势型14例,间质优势型10例,采用Southern印迹分子杂交技术检测肾母细胞瘤组织WT1、P53基因缺失,并分析其与组织类型的关系。结果:2例WT1基因的缺失为间质优势型肾母细胞瘤,1例P53等位基因缺失为间变型肾母细胞瘤。结论:WT1基因缺失可能与间质优势型肾母细胞瘤的发生有关,P53基因缺失可能与间变型肾母细胞瘤的发生有关。

p16和p53抑癌基因在肾母细胞瘤中的表达及与预后关系

目的 探讨p16、p5 3抑癌基因在肾母细胞瘤中的表达及与临床预后的关系。 方法 应用免疫组织化学方法S -P和ABC法检测p16和 p5 3基因的表达。 结果 2 0例肾母细胞瘤标本p16蛋白染色阳性 7例 ,阳性率为35 %;其中上皮型 10例 ,阳性 4例 (占 40 %) ;间叶型 5例 ,阳性 1例 (占 2 0 %) ;胚胎型 3例 ,阳性 1例 (占 33%) ;混合型 2例 ,阳性 1例 (占 5 0 %)。p5 3蛋白阳性染色 5例 ,阳性率为 2 5 %。其中上皮型及混合型 12例中 ,p5 3阳性 2例 (占 16 .7%) ;而间叶型及胚胎型 8例中 ,阳性 3例 (占 37.5 %)。结论 对肾母细胞瘤患者同时进行p16和 p5 3检测更能准确地判断其病理性质和预后。