肾母细胞瘤过度表达基因mRNA在大鼠中枢神经系统的原位杂交定位

为了了解肾母细胞瘤过度表达基因（ＮＯＶ）ｍＲＮＡ在中枢神经系统的定位，用地高辛标记的ｃＲＮＡ探针原位杂交组织化学方法，研究了ＮＯＶ原癌基因ｍＲＮＡ在成年大鼠中枢神经系统的分布。结果显示，在颞叶、听区、梨状前皮质、纹状皮质、海马复合体、杏仁基内侧核、杏仁皮质核、杏仁内侧核、杏仁外侧核、丘脑腹后内侧核、丘脑腹后外侧核、丘脑外侧背核、下丘脑腹内侧核、下丘脑背侧核、下丘脑背内侧核、下丘脑弓状核、脑桥面神经核、脑桥网状结构、前庭神经外侧核、前庭神经上核、脊髓前角均有较多ＮＯＶｍＲＮＡ阳性神经元分布。

大鼠中枢神经系统肾母细胞瘤过度表达基因mRNA神经元的发育——原位杂交与RT-PCR研究

目的研究大鼠ＣＮＳ肾母细胞瘤过度表达基因（ｎｏｖ）ｍＲＮＡ神经元的发育。方法原位杂交组织化学和逆转录ＰＣＲ。结果Ｐ０～Ｐ４：原位杂交方法最早检测到ｎｏｖｍＲＮＡ神经元是Ｐ０，Ｐ０～Ｐ４阳性信号均较弱，分布于脑桥和脊髓等。Ｐ５：丘脑部分核团和海马锥体细胞层观察到阳性神经元。Ｐ８：ｎｏｖｍＲＮＡ神经元数目增多，边缘系统及丘脑明显阳性；大脑皮质和下丘脑阳性较弱。Ｐ１５：丘脑、下丘脑和大脑皮质ｎｏｖｍＲＮＡ神经元增多，其余核团稳定在Ｐ８水平。Ｐ３０：在脑干观察到强烈的阳性信号，大脑皮质强阳性，海马、丘脑和下丘脑标记较强。Ｐ６０：脑桥和延髓的标记仍然很强，大脑皮质、丘脑和下丘脑的阳性信号稳定在Ｐ３０水平。Ｐ３００：ｎｏｖｍＲＮＡ神经元显著减少，阳性信号明显减弱。逆转录ＰＣＲ检测结果与原位杂交所得结果基本相符，在出生前２ｄ检测到ｎｏｖｍＲ－ＮＡ，其表达高峰出现在Ｐ３０～Ｐ６０之间，随之下降，Ｐ１５０和Ｐ３００表达弱。结论ｎｏｖ基因与其他早期反应基因不同，其表达高峰不是在胚胎发育早期，而是在近性成熟时期，提示ｎｏｖ基因主要在神经系统发育、分化及功能活动中起作用。

用免疫组化法检测肾母细胞瘤过度表达基因蛋白在大鼠中枢神经系统的分布

为探讨肾母细胞瘤过度表达基因（ＮＯＶ）在中枢神经系统发育和分化过程中的作用，用免疫组织化学ＡＢＣ方法辅以微波抗原修复技术研究ＮＯＶ原癌基因蛋白的分布和定位。结果发现，ＮＯＶ蛋白在成年大鼠的中枢神经系统中有较为广泛的存在，其分布区域包括大脑皮质、海马、丘脑和下丘脑的部分核团、脑桥及脊髓前角。结果提示：ＮＯＶ基因在中枢神经系统的功能活动中可能起重要作用。

肾母细胞瘤过度表达基因CCN3和肿瘤转化因子β1在妊娠期糖尿病胎盘上的表达

目的探讨肾母细胞瘤过度表达蛋白（NOV，CCN3）和肿瘤转化因子p1（TGFβ1）在妊娠期糖尿病（GDM）胎盘组织中的表达变化及其意义。方法应用免疫组织化学方法检测GDM和正常足月妊娠分娩胎盘组织中CCN3和TGFβ1表达情况。结果CCN3和TGF-β1表达阳性率，正常足月妊娠分娩组分别为18％和52％，GDM组分别为40％和100％，差异有统计学意义。结论CCN3和TGFβ1可能在GDM病理过程中起重要作用。

肾母细胞瘤过度表达基因对大鼠肝星状细胞生物学行为的影响

目的:构建能表达靶向肾母细胞瘤过度表达基因(NOV)的小干扰RNA(siRNA)的重组质粒,研究NOV对大鼠肝星状细胞(HSC)活化、增殖、凋亡、分泌细胞外基质(ECM)的影响方法:以NOV为目的基因,以质粒psiRNA- hHlneo为载体,构建能在真核细胞中表达的靶向NOV的siRNA的重组质粒psiRNA (psiRNA1,2,3)和阴性对照重组质粒pconsiRNA.限制性酶切和测序鉴定构建成功后,脂质体介导重组质粒转染HSC,依据转染质粒的不同将HSC分为psiRNA1组、psiRNA2组、psiRNA3组、阴性对照pconsiRNA组,并以未转染重组质粒的HSC为空白对照组.半定量RT-PCR检测HSC的NOV、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达情况,Western blot检测α-SMA蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞凋亡.结果:限制性酶切和测序鉴定表明成功构建了NOVsiRNA表达质粒:与阴性对照组相比,转染外源重组质粒psiRNA2的HSC内NOV、α-SMA的mRNA表达水平下降(73.0% vs 23.2%,51.4% vs 15.1%,均P<0.05),Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达水平明显下降(59.8% vs 17.0%,37.1% vs 6.6%,P<0.05),α-SMA蛋白表达水平下降.与空白对照组相比,转染外源重组质粒psiRNA2的HSC内HSC增殖活性显著降低(24 h:0.172±0.005 vs 0.318±0.018.P<0.05:48 h:0.296±0.004 vs 0.472±0.029,P<0.05:72 h:0.432±0.024 vs 0.672±0.050,P<0.05).psiRNA1组、psiRNA3组的HSC内NOV mRNA、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达及HSC增殖活性均无明显下降(均P>0.05).结论:NOV可促进HSC增殖、活化及分泌细胞外基质,提示NOV可以作为肝纤维化基因治疗的一个新的靶位点.

肾母细胞瘤过度表达基因对大鼠肝星状细胞MMP-1和TIMP-1表达的作用研究

目的构建能表达靶向肾母细胞瘤过度表达基因(NOV)的小干扰RNA(siRNA)的重组质粒,研究NOV对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响。方法以NOV为目的基因,以质粒psiRNA-hH1neo为载体,构建能在真核细胞中表达的靶向NOV的siRNA的重组质粒psiRNA(psiRNA1、2、3)和阴性对照重组质粒pconsiRNA。限制性酶切和测序鉴定构建成功后,脂质体介导重组质粒转染HSC,依据转染质粒的不同将HSC分为psiRNA1组、psiRNA2组、psiRNA3组、阴性对照pconsiRNA组,并以未转染重组质粒的HSC为空白对照组。半定量RT-PCR检测HSC的NOV、MMP-1、TIMP-1 mRNA表达情况,MTT法检测细胞增殖。结果限制性酶切和测序鉴定表明成功构建了NOV siRNA表达质粒;与阴性对照组相比,转染外源重组质粒psiRNA2的HSC内NOV的mRNA表达水平下降(P<0.05),MMP-1 mRNA表达水平下降不明显(P>0.05),而TIMP-1 mRNA表达水平明显下降(P<0.05)。与空白对照组相比,转染外源重组质粒psiRNA2的HSC增殖活性显著降低(P<0.05)。psiRNA1组、psiRNA3组的HSC内NOV、MMP-1和TIMP-1 mRNA的表达及HSC增殖活性均无明显下降(P均>0.05)。结论NOV可促进HSC增殖及表达TIMP-1增加,而对MMP-1表达影响不大,提示NOV可以作为肝纤维化基因治疗的一个新的靶位点。

肾母细胞瘤组织中Par-4基因表达量检测及其与肿瘤增殖、侵袭的关系研究

目的:探讨肾母细胞瘤组织中Par-4基因表达量检测及其与肿瘤增殖、侵袭的相关关系。方法:选取确诊肾母细胞瘤的患者60例,活检留取肾母细胞瘤组织、瘤旁组织,采用荧光定量PCR检测其中Par-4基因,增殖相关基因IGF-Ⅱ、IRS-2、TGF-β、PTEN及侵袭相关基因Axin、Ecad、Ki-67表达量的差异;采用Pearson检验评估肾母细胞瘤组织中Par-4基因表达量与增殖、侵袭相关基因表达量的相关关系。结果:肾母细胞瘤组织中Par-4基因表达量低于瘤旁组织;增殖相关基因IGF-Ⅱ、IRS-2、TGF-βmRNA的表达量高于瘤旁组织,PTEN mRNA的表达量低于瘤旁组织;侵袭相关基因Axin、E-cad mRNA的表达量低于瘤旁组织,Ki-67mRNA的表达量高于瘤旁组织。Pearson检验发现,肾母细胞瘤组织中Par-4基因表达量与IGF-Ⅱ、IRS-2、TGF-β、Ki-67表达量呈负相关,与PTEN、Axin、E-cad表达量呈正相关。结论:肾母细胞瘤组织中Par-4基因表达异常降低并且与增殖、侵袭基因表达的改变存在相关性。

肾母细胞瘤过表达基因(NOV)mRNA含量与骨肉瘤组织中细胞生长、迁移相关基因表达的相关性

目的:探讨肾母细胞瘤过表达基因(NOV)mRNA含量与骨肉瘤组织中细胞生长、迁移相关基因表达的相关性。方法:收集在本院接受手术治疗的骨肉瘤患者78例,取骨肉瘤组织及癌旁组织。经荧光定量PCR法测定其中NOV及促增殖/抗增殖基因、侵袭基因的mRNA表达量,进一步经Pearson检验评估NOV mRNA表达量与骨肉瘤细胞生长、迁移活性的相关关系。结果:骨肉瘤组织中NOV mRNA的表达量显著低于癌旁组织,FoxM1、STIM1、Orai1的mRNA表达量显著高于癌旁组织,抗增殖基因RanBP9、Tap73、Caspase-3、PTEN、P53的mRNA表达量显著低于癌旁组织,侵袭基因EFEMP1、Notch1、Id1、Src的mRNA表达量显著高于癌旁组织(P<0.05)。经Pearson检验发现,骨肉瘤组织中NOV mRNA表达量与促增殖基因FoxM1、STIM1、Orai1的mRNA表达量呈负相关,与抗增殖基因RanBP9、Tap73、Caspase-3、PTEN、P53的mRNA表达量呈正相关,与侵袭基因EFEMP1、Notch1、Id1、Src的mRNA表达量呈负相关(P<0.05)。结论:骨肉瘤组织中NOV呈相对低表达,且NOV mRNA表达量与肿瘤细胞增殖、侵袭活性呈负相关。

肾母细胞瘤过度表达基因对肾小管转分化机制的影响

目的通过肾母细胞瘤过度表达基因(CCN3)对体外培养转化生长因子β1(TGF-β1)参与人肾小管上皮细胞株(HK-2)转分化机制的影响,探讨CCN3的作用及可能途径。方法利用体外细胞培养技术培养HK-2,并将其分为3组,正常对照组,TGF-β1组、10μg/L,CCN3组、50μg/L。利用细胞免疫技术,检测3组的上皮细胞标志性蛋白钙黏蛋白E-cadherin的表达,激光共聚焦显微镜下观察并扫描成像。利用IMS图像分析系统对扫描图像进行分析。结果 TGF-β1组E-cadherin的表达明显低于正常对照组(P<0.05),CCN3组的肾小管上皮细胞在加入CCN3及TGF-β1后,E-cadherin的表达明显高于TGF-β1组(P<0.05)。结论 TGF-β1加速肾小管转分化机制,CCN3能延缓TGF-β1所致的肾小管转分化进程。

p16和p53抑癌基因在肾母细胞瘤中的表达及与预后关系

目的 探讨p16、p5 3抑癌基因在肾母细胞瘤中的表达及与临床预后的关系。 方法 应用免疫组织化学方法S -P和ABC法检测p16和 p5 3基因的表达。 结果 2 0例肾母细胞瘤标本p16蛋白染色阳性 7例 ,阳性率为35 %;其中上皮型 10例 ,阳性 4例 (占 40 %) ;间叶型 5例 ,阳性 1例 (占 2 0 %) ;胚胎型 3例 ,阳性 1例 (占 33%) ;混合型 2例 ,阳性 1例 (占 5 0 %)。p5 3蛋白阳性染色 5例 ,阳性率为 2 5 %。其中上皮型及混合型 12例中 ,p5 3阳性 2例 (占 16 .7%) ;而间叶型及胚胎型 8例中 ,阳性 3例 (占 37.5 %)。结论 对肾母细胞瘤患者同时进行p16和 p5 3检测更能准确地判断其病理性质和预后。

基于加权基因共表达网络分析和机器学习筛选肾母细胞瘤特征基因及其靶向中药预测

目的:本研究旨在确定肾母细胞瘤的潜在生物标志物,并预测其靶向中药。方法:从NCBI基因表达综合数据库下载4个微阵列数据集(GSE4530、GSE11151、GSE66405和GSE73209)。采用差异表达分析、加权基因共表达网络分析(Weighted Gene Co-expression Network Analysis,WGCNA)和最小绝对收缩和选择算子(Least Absolute Shrinkage and Selection Operator,LASSO)回归算法筛选肾母细胞瘤的核心标志物并对差异表达基因(Differentially Expressed Genes,DEG)进行功能和通路富集分析。随后,绘制箱线图展示核心基因在样本中的表达模式,构建受试者工作特征曲线(Receiver Operating Characteristic curve,ROC)验证核心基因的诊断效能。最后,通过HERB数据库检索核心基因潜在靶向中药。结果:204个DEGs和15个关键模块基因交集得到14个枢纽基因。DEGs主要富集于羧酸生物合成过程、细胞-细胞连接组装、轴突引导、癌症中的微小核糖核酸、紧密连接、焦点粘附、酒精性肝病、Wnt信号通路等生物学过程和通路。基于机器学习算法筛选出4个核心基因[跨膜蛋白酶丝氨酸2(Transmembrane Protease Serine 2,TMPRSS2)、晶状体蛋白λ1(Crystallin,Lambda 1,CRYL1)、靠停蛋白8(Claudin 8,CLDN8)和G蛋白偶联受体56(G Protein-Coupled Receptor 56,GPR56)],通过ROC曲线分析发现4个核心基因均具有较高的诊断价值,在疾病样本中基因表达均显著下调。在HERB数据库检索得到16味潜在靶向中药。结论:本研究系统地鉴定了4个肾母细胞瘤特征基因(TMPRSS2、CRYL1、CLDN8和GPR56),为未来研究肾母细胞瘤患者的潜在诊断候选基因提供了立足点。此外,白果、播娘蒿等潜在靶向中药可能干预肾母细胞瘤病理进程。

RGS4蛋白在小儿肾母细胞瘤组织中的表达及临床意义

目的分析G蛋白信号调节蛋白4(RGS4)在小儿肾母细胞瘤组织和癌旁组织中的表达差异,探讨RGS4与小儿肾母细胞瘤发生发展的关系。方法收集37例小儿肾母细胞瘤患者术后肾癌组织及8例癌旁组织,采用免疫组织化学法检测RGS4蛋白的表达水平;另收集患者手术切除新鲜癌组织及对应癌旁组织标本各8例,采用q RT-PCR和Western blot分别检测RGS4 m RNA和蛋白的表达水平。结果免疫组织化学染色结果显示,RGS4蛋白在小儿肾母细胞瘤组织及癌旁组织中均存在阳性表达,其在小儿肾母细胞瘤组织中的高表达率低于癌旁组织[37.83%(14/37)vs.87.5%(7/8),χ2=4.675,P<0.05];RGS4 m RNA在小儿肾母细胞瘤组织中的表达水平显著低于癌旁组织(1.064±0.549 vs.5.374±0.735,t=13.290,n=8,P<0.01);Western blot结果显示,RGS4蛋白在小儿肾母细胞瘤组织中的表达量低于癌旁组织(0.301±0.092 vs.0.779±0.041,t=13.424,n=8,P<0.01)。结论 RGS4在小儿肾母细胞瘤组织中表达下调,可能与小儿肾癌的发生发展有关。

Glypican-3蛋白在儿童肾母细胞瘤中的表达及其与MSCT征象关系研究

目的探讨Glypican-3蛋白在儿童肾母细胞瘤的表达及其与MSCT征象的关系。方法用ABC法检测GPC3蛋白在35例肾母细胞瘤标本中表达,回顾分析我院35例儿童肾母细胞瘤的MSCT征象,测定GPC3标记肿瘤细胞的阳性率并研究MSCT征象与GPC3蛋白标记肿瘤细胞阳性率的关系。结果 GPC3蛋白在12例正常肾组织中阳性率为17%、35例瘤旁组织中阳性率为14%、肿瘤组织中阳性率为89%,GPC3蛋白在肾母细胞瘤中的表达明显高于正常肾组织及瘤旁肾组织中的表达(P<0.05);GPC3蛋白在肾母细胞瘤中的表达与临床分期、淋巴结转移、术后复发呈正相关(P<0.05),而与肿瘤部位、大小及肿瘤病理分化程度无明显关系(P>0.05)。结论肾母细胞瘤的CT表现与GPC3的表达存在一定相关性。应用MSCT结合GPC3蛋白免疫组化指标的检测可进一步提高儿童肾母细胞瘤的正确诊断率及预后的评估。

骨肉瘤组织中NOV基因表达量检测及与细胞增殖、迁移的相关性研究

目的:探讨骨肉瘤组织中肾母细胞瘤过表达基因(NOV)表达量检测及与细胞增殖、迁移的相关性。方法:2014年5月~2017年8月在孝感市中心医院接受手术治疗的骨肉瘤患者的病灶组织及瘤旁正常组织各97例,分别作为骨肉瘤组、正常对照组。采用荧光定量PCR检测不同组织标本中NOV基因、增殖相关基因、侵袭相关基因的表达量,采用Pearson检验评估骨肉瘤组织中NOV基因表达量及其与细胞增殖、迁移的相关性。结果:骨肉瘤组中NOV mRNA的表达量显著低于正常对照组(P<0.05);骨肉瘤组中KISS-1、TAp73 mRNA的表达量低于正常对照组(P<0.05),VCP、FoxM1、RIPK4、STIM1mRNA的表达量高于正常对照组(P<0.05);骨肉瘤组中DLX1、Sema6A mRNA的表达量低于正常对照组(P<0.05),EFEMP1、GPR56、SOX5、CRYAB mRNA的表达量高于正常对照组(P<0.05)。Pearson检验发现,骨肉瘤组织中NOV基因表达量与细胞增殖基因、侵袭基因的表达量直接相关。结论:骨肉瘤组织中NOV基因表达量低于瘤旁正常组织,且具体表达量与肿瘤细胞增殖、侵袭活性直接相关,可作为骨肉瘤恶性程度判断的可靠指标。

p16蛋白在肾母细胞瘤中的表达

目的:探讨p16蛋白在肾母细胞瘤中的表达及临床意义。方法:应用S-P免疫组织化学方法对42例肾母细胞瘤常规石蜡标本进行p16蛋白检测。结果:42例中p16蛋白表达缺失率为69.05％,p16蛋白阳性表达与病理组织类型、患儿预后显著相关(P<0.01),阳性表达者预后好。结论:p16蛋白表达可作为判断肾母细胞瘤预后的指标。

基于基因芯片的肾母细胞瘤生物信息学分析

目的:整合并利用生物信息学分析肾母细胞瘤基因表达谱芯片,挖掘肾母细胞瘤发生的关键基因。方法:利用GEO2R在线分析工具对GEO数据库肾母细胞瘤基因芯片数据GSE2712进行差异表达基因筛选,使用R软件对差异表达基因进行火山图绘制,进一步结合DAVID和STRING在线生物信息学工具对差异表达基因进行调控网络分析并构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction, PPI)网络,使用Cytoscape软件进行Hu b基因筛选。结果:共筛选出肾母细胞瘤差异表达基因955个,其中表达上调基因157个,表达下调基因798个。对差异表达基因进行GO富集分析和KEGG通路富集分析,利用在线生物信息学工具构建PPI网络,使用Cytoscape软件获取PPI网络中前10位Hub基因,分别是FN1,ALB,VEGFA,KDR,IGF1,PECAM1,FLT1,TEK,FGF1和ANGPT1。结论:应用生物信息学能有效分析基因芯片数据,获取肾母细胞瘤发生的关键基因,为肾母细胞瘤的治疗提供新的思路。

通过RNA-seq技术对儿童肾恶性横纹肌样瘤病理组织差异表达基因的富集分析

肾恶性横纹肌样瘤(malignant rhabdoid tumor of kidney,MRTK)是恶性横纹肌样瘤的一种,是常发生于婴幼儿肾脏的一种高侵袭性肿瘤,预后极差,男性发病率稍高于女性(1.5∶1)[1]。该病由Beckwith等[2]在1978年首次提出。起初MRTK被认为是肾母细胞瘤的一种亚型,1981年Haas等[3]发现了其不同于肾母细胞瘤和肾横纹肌肉瘤的独特性,故将其独立命名。随着研究的深入,学者们发现大多数MRTK患者存在22号染色体单体缺失或22q111.2的hSNF/INI1基因突变失活,故INI-1蛋白在核内表达丧失对于该病的诊断具有重要意义[4]。

急性粒单核细胞白血病患者骨髓NOV基因表达与预后的相关性

目的:观察肾母细胞瘤过度表达基因(nephroblastoma over-expressed gene,NOV)在急性粒单核细胞白血病(acute myelomonocytic leukemia,AMML)患者骨髓中的表达,探讨骨髓NOV基因表达与AMML患者预后的关系,指导AMML的预后评估。方法:选取2015年1月至2018年12月本院收治的41例AMML患者为研究对象,所有患者均接受支持疗法、化疗等综合疗法干预,并随访17个月;分别于患者化疗前、化疗1个周期、化疗结束时,采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法测定NOV基因信使RNA(mRNA)的表达量;参照相关标准判断AMML患者的预后;分析AMML患者骨髓NOV基因表达与预后的相关性。结果:化疗1个周期、化疗结束后,患者NOV基因mRNA的表达量较化疗前降低,且化疗结束时表达量最低(P<0.05);41例AMML患者中,30例患者预后良好,11例预后不良;化疗1个周期、化疗结束后两组患者骨髓NOV基因表达均较化疗前降低,且预后不良组患者各时点骨髓NOV基因表达均高于预后良好组(P<0.05);进行Logistics回归分析结果显示,化疗前、化疗1个周期、化疗结束时NOV基因表达均是AMML患者预后不良的影响因素(OR>1,P<0.05),其中化疗前NOV表达对AMML患者预后不良的影响最为明显;绘制ROC曲线结果显示,化疗前NOV基因mRNA的表达量预测AMML患者预后的AUC为0.879,预测价值较好。结论:AMML患者的预后可能与骨髓NOV基因表达有关,NOV基因过表达可能预示AMML患者预后不良高风险,检测NOV基因表达对指导临床早期评估AMML患者预后具有重要作用。