肾炎防衰液通过FGF21/SIRT1信号通路防治糖尿病肾病的机制研究

目的观察肾炎防衰液对糖尿病肾病(DN)小鼠的干预作用,并基于成纤维细胞生长因子21(FGF21)/沉默信息调节蛋白1(SIRT1)信号通路探讨其防治DN的潜在分子机制。方法将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、肾炎防衰液组及厄贝沙坦组,每组10只。除正常组外,其余组小鼠采用高脂饲料喂养联合小剂量多次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)方法构建DN模型。造模成功后,肾炎防衰液组给予肾炎防衰液20.93 g/(kg·d)灌胃,厄贝沙坦组给予厄贝沙坦22.75 mg/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予等量的生理盐水灌胃,均每日1次,连续12周。灌胃期间观察各组小鼠的体重和血糖水平;灌胃结束后,检测各组小鼠肾功能指标[尿白蛋白肌酐比(UACR)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)]、肾重/体重比、脂代谢指标[血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平]、血清FGF21水平,HE、PAS、Masson染色观察肾脏病理形态,免疫组化染色观察肾脏组织中SIRT1蛋白表达情况,免疫荧光染色观察肾脏组织中LC3、p62蛋白表达情况。结果灌胃前,各造模组小鼠体重、血糖明显高于正常组(P均<0.05)。灌胃结束后,模型组小鼠UACR、肾重/体重比及血清TG、TC、LDL-C、FGF21水平均明显高于正常组(P均<0.05);HE、PAS、Masson染色见肾小球体积增大,肾小管上皮细胞广泛空泡变性坏死,肾小球硬化、纤维化改变明显;肾脏组织中SIRT1、LC3蛋白表达少于模型组(P均<0.05),p62蛋白表达多于模型组(P<0.05)。与模型组比较,肾炎防衰液组及厄贝沙坦组小鼠UACR和肾炎防衰液组血清TG、TC、LDL、FGF21水平均明显降低(P均<0.05),HE、PAS、Masson染色见小鼠肾脏病理损伤改善,肾脏组织中SIRT1、LC3蛋白表达增多而p62蛋白表达减少(P均<0.05)。结论肾炎防衰液可明显减轻DN小鼠肾组织损伤,保护肾脏,机制可能与调控FGF21/SIRT1通路、增强自噬有关。

肾炎防衰液对肾间质纤维化防治作用的实验研究

目的:动态观察肾炎防衰液对单侧输尿管梗阻(UUO)所致肾间质纤维化大鼠TGF-β1表达的影响,探讨其作用机制。方法:111只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、对照组、肾炎防衰液大、中、小剂量组。分别在术后第2周、第4周处死动物,采用免疫组化方法检测肾组织中TGF-β1蛋白表达。结果:随着梗阻时间的延长,模型组大鼠肾组织TGF-β1表达增加;与模型组各对应时间点比较,肾炎防衰液治疗后可使肾组织中的TGF-β1表达明显降低(P<0.05)。结论:肾炎防衰液可通过抑制TGF-β1表达,减轻肾间质纤维化。

肾炎防衰液通过SPHK1/S1P信号通路对糖尿病肾病大鼠肾脏炎症的干预作用

目的:探讨肾炎防衰液通过鞘氨醇激酶1-1磷酸鞘氨醇(SPHK1/S1P)信号通路对糖尿病肾病大鼠肾脏炎症的干预作用。方法:采用单侧肾切除+高脂饲养喂养+链脲佐菌素(STZ)"三联"造模方法构建糖尿病肾病大鼠模型,模型组分别予肾炎防衰液和厄贝沙坦治疗8周,测定24 h尿蛋白定量及血生化指标,检测肾脏Sph K1、S1p2、TNF-α、NF-κBp65表达水平的变化。结果:肾炎防衰液可以降低DKD大鼠24 h尿蛋白定量(P<0.01),减少DKD肾组织Sph K1、S1p2、TNF-α、NF-κBp65mRNA表达(P<0.05),降低Sph K1、p NF-κBp65的蛋白表达。结论:肾炎防衰液可通过抑制Sph K1/S1P信号通路的表达,减轻肾脏炎症反应,对糖尿病肾病大鼠肾脏起到一定的保护作用。

肾炎防衰液对糖尿病肾病大鼠的防治作用及对于MCP-1表达的影响

目的:研究肾炎防衰液对糖尿病肾病大鼠的防治作用。方法:建立大鼠糖尿病肾病模型,随机分为模型组、贝那普利组和肾炎防衰液组,另设假手术组;给予贝那普利组和肾炎防衰液组分别灌胃以贝那普利混悬液(1.0 mg·kg-1·d-1)和肾炎防衰液(11.4 g·kg-1·d-1);模型组和假手术组灌以等量生理盐水。实验进入第8周后取材,检测血清肌酐、尿素氮,采用HE和Masson染色检测肾脏病理、免疫组化法检测肾组织MCP-1的表达。结果:各组大鼠血清尿素氮水平差异无统计学意义(P>0.05);模型组血清肌酐水平明显高于假手术组(P<0.05),而肾炎防衰液组较模型组为低(P<0.05);模型组肾小球硬化指数、肾小管损伤指数、肾小管间质纤维化指数以及肾组织中MCP-1表达显著高于假手术组(P<0.05);肾炎防衰液组肾小球硬化指数、肾小管损伤指数、肾小管间质纤维化指数以及MCP-1表达均较模型组为低(P<0.05)。结论:肾炎防衰液可以降低血清肌酐水平,减轻糖尿病肾病大鼠肾小球硬化及肾间质纤维化的程度,下调糖尿病肾病大鼠肾组织MCP-1的表达,延缓糖尿病肾病进展。

肾炎防衰液对延缓慢性肾脏病抗氧化应激机制研究

目的:研究肾炎防衰液对延缓慢性肾脏病抗氧化应激的疗效及作用机制。方法:采用UUO建立大鼠肾间质纤维化模型,随机分为模型组、贝那普利组和肾炎防衰液组,另设假手术组;术后7 d、14 d、21 d分批取材,检测肾脏羟脯氨酸含量及T-AOC、总T-SOD和MDA含量,免疫组化法检测肾组织MCP-1蛋白及TNF-α蛋白的表达,Real time PCR法检测肾脏NADPH氧化酶p22phox mRNA的表达。结果:与模型组相比,肾炎防衰液组UUO大鼠肾组织中T-AOC、总T-SOD和MDA含量均升高(P<0.05),肾组织MCP-1蛋白、TNF-α蛋白及NADPH氧化酶p22phox mRNA的表达均减少(P<0.05)。结论:肾炎防衰液可以升高T-AOC、总T-SOD和MDA水平,降低MCP-1蛋白、TNF-α蛋白及NADPH氧化酶p22phox mRNA的表达,减轻大鼠肾间质纤维化的程度,从而验证了肾络癥瘕理论在治疗慢性肾脏病中的作用。

肾炎防衰液对糖尿病肾病大鼠氧化应激的干预作用

目的:探讨肾炎防衰液对糖尿病肾病大鼠氧化应激的干预作用。方法:采用单侧肾切除+高脂饲养喂养+链脲佐菌素(STZ)"三联"造模方法构建糖尿病肾病大鼠模型,造模成功后予肾炎防衰液、厄贝沙坦干预8周,测定24 h尿蛋白定量及血液生化指标,肾脏行PAS、MASSON染色,检测血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD),肾组织NADPH p22phoxmRNA的表达。结果:肾炎防衰液可以减少MDA产生(P<0.01),升高SOD含量(P<0.05),降低肾脏p22phoxmRNA的表达(P<0.05),减少24 h尿蛋白定量(P<0.01)及肾脏病理损伤。结论:肾炎防衰液可以减轻糖尿病肾病大鼠氧化应激反应,发挥对糖尿病大鼠肾脏的保护作用。

基于“肾络癥瘕”理论探讨肾炎防衰液治疗肾间质纤维化的药效物质基础与机制

目的:运用网络药理学与分子对接探寻肾炎防衰液治疗肾间质纤维化(RIF)的活性成分和作用机制。方法:通过TCMSP平台和BATMAN-TCM数据库筛选肾炎防衰液的活性成分及作用靶点;利用GeneCards数据库、DisGeNET平台获取RIF相关靶点;将两者的共有靶点与其对应的中药成分通过Cytoscape3.7.2软件构建“成分-靶点”网络,利用Centiscape插件筛选出重要的活性成分;通过Clue GO 2.5.4插件对共有靶点进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,获取肾炎防衰液治疗RIF的潜在作用通路,采用Autodock和PyMol将核心成分和靶点蛋白进行分子对接及可视化处理。结果:肾炎防衰液经筛选后获得200个活性成分,76个参与治疗RIF的潜在靶点,可能通过参与糖尿病并发症的晚期糖基化终末产物(AGE)-晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路、流体剪切应力与动脉粥样硬化、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、松弛素信号通路、缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路、白介素-17(IL-17)信号通路、血管内皮生长因子(VEGF)信号通路、脂肪细胞脂肪分解的调节、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路、Toll样受体(TLRs)信号通路等途径参与RIF的治疗,分子对接结果提示肾炎防衰液的核心成分与INS、IL-6、ALB、VEGFA、TNF具有较好的亲和力。结论:肾炎防衰液的多种活性成分具改善RIF的作用,该方可能通过抑制炎症反应、调控自噬、调节糖脂代谢等途径延缓RIF的发展。

基于“心肾相关”的肾炎防衰液改善糖尿病肾脏病大鼠肾脏及心脏病理的研究

目的:研究基于“心肾相关”的肾炎防衰液对糖尿病肾脏病(DKD)大鼠的治疗作用以及对肾脏及心脏病理的影响。方法:雄性SD大鼠40只,随机分出假手术组10只,余30只通过单侧肾结扎+链脲佐菌素(STZ)诱导成功建立DKD模型后,随机分为模型组、贝那普利组、肾炎防衰液组(n=10)。治疗组分别予以贝那普利1.0 mg/kg·d^-1、肾炎防衰液16.3 g/kg·d^-1灌胃,余2组予以等量0.9%NaCl溶液。连续给药12周后,取血检测肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血管紧张素II(AngII);用HE、PAS、Masson染色观察肾脏病理变化,HE、Masson染色观察心脏病理变化。结果:肾炎防衰液组和贝那普利组的Scr、BUN、AngII水平相较于模型组均明显降低,差异均具有显著性(P<0.01,P<0.05)。在肾脏病理中,与模型组相比,治疗组在HE、PAS、Masson染色中均体现出减轻肾病病理损害的作用;在心脏病理中,HE染色可见治疗组能减轻心脏病理损害,而Masson染色各组均未见明显纤维化组织。结论:基于心肾相关的肾炎防衰液能有效改善DKD大鼠肾功能,减轻其肾脏、心脏病理损害。

肾炎防衰液对硫酸苯酯诱导小鼠肾足细胞损伤及自噬作用机制研究

[目的]观察肾炎防衰液对硫酸苯酯(PS)诱导的小鼠肾脏足细胞损伤及自噬相关蛋白表达的影响,探讨其对足细胞损伤及自噬的干预作用。[方法]选取SD大鼠,分别灌胃肾炎防衰液及缬沙坦水溶液,制备低、中、高浓度含药血清及西药对照血清。体外培养足细胞,分为空白对照组(Con)组、PS刺激(PS)组、肾炎防衰液低、中、高浓度治疗组(SYFS-L、SYFS-M、SYFS-H)、缬沙坦(XST)组。细胞活力检测(CCK-8)法筛选最合适的PS干预浓度及含药血清给药浓度,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot)检测Podocin、CD2AP、BNIP3、p62、LC3Ⅱ/ⅠmRNA和蛋白表达。[结果]CCK-8法检测细胞增殖率确定了190μmol/L浓度的PS处理足细胞24 h作为本实验的造模方法。与Con组比较,PS组CD2AP、Podocin、BNIP3、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白及mRNA表达显著下调,p62蛋白及mRNA表达显著上调;与PS组比较,肾炎防衰液给药组可明显上调CD2AP、Podocin、BNIP3、LC3 mRNA和蛋白的表达,降低p62的表达,且优于缬沙坦组。[结论]PS可能通过抑制足细胞线粒体自噬造成足细胞损伤,而肾炎防衰液通过上调LC3、BNIP3,下调p62蛋白表达,增强细胞自噬,抑制细胞凋亡,改善足细胞损伤。

肾炎防衰液对5/6肾切除大鼠肾组织FN表达的影响

目的探讨肾炎防衰液对5/6肾切除(5/6nephrectomize,5/6NT)大鼠肾组织纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)表达的影响。方法选用SD雄性大鼠,建立5/6NT大鼠肾纤维化模型。随机分为8组:正常组、假手术组、模型组、苯那普利组、尿毒清组和肾炎防衰液低、中、高剂量组。采用免疫组织化学方法,以苯那普利、尿毒清为实验对照,检测肾炎防衰液对肾组织FN表达的影响。结果模型组肾组织FN强阳性表达,在系膜基质和肾小管基底膜出现大量棕黄色颗粒;苯那普利组、尿毒清组FN中等量表达,在系膜基质和肾小管基底膜出现中等量棕黄色颗粒;肾炎防衰液低、中、高剂量组肾组织FN轻度表达明显少于模型组,在系膜基质和肾小管基底膜出现少量棕黄色颗粒,并呈剂量依赖关系。结论肾炎防衰液抑制5/6NT大鼠肾组织FN的表达,可能是该方减缓肾小球硬化和肾纤维化发展的作用机制之一。

肾炎防衰液延缓慢性肾脏病5期非透析患者透析时机的探索研究

目的:初步探索肾炎防衰液延缓CKD5期非透析患者透析时机的作用。方法:将136例CKD5期非透析患者分为对照组(67例)和治疗组(69例),对照组予以常规西医治疗,治疗组予以肾炎防衰液中医辨证加减治疗,随访结束后通过Kaplan-Meier生存曲线分析两组治疗延缓患者首次透析时间以及累积生存率。结果:治疗组终点事件发生率34.78%(24/69)显著低于对照组终点事件发生率83.58%(56/67)(P<0.01)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示治疗组患者中位生存时间25个月(95%CI:18.2-31.8),对照组中位生存时间9个月(95%CI:7.6-10.4),log-rank检验显示差异有统计学意义(P<0.01)。治疗组平均延缓首次透析时间12.6个月(95%CI:10.5-14.7),对照组平均延缓首次透析时间8.5个月(95%CI:7.4-9.6),差异有统计学意义(P<0.01)。结论:以肾炎防衰液为主方的中医药辨证治疗可以延缓CKD5期非透析期患者首次进入透析时间,减少CKD5期患者透析事件发生率。

肾炎防衰液改善慢性肾功能衰竭大鼠肾性贫血的作用机制

目的:探索肾炎防衰液改善慢性肾功能衰竭大鼠肾性贫血的作用机制。方法:32只雄性SPF级Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、肾炎防衰液组、罗沙司他组,每组8只,除对照组外,其余3组采用左侧肾切除联合腺嘌呤灌胃方法制作肾性贫血模型,根据组别分别以去离子水、肾炎防衰液、罗沙司他灌胃,12周后,分别检测血常规、肾功能、铁代谢指标及血清炎症因子,Western blot检测肾组织脯氨酰羟化酶2(PHD-2)、低氧诱导因子2α(HIF-2α)蛋白表达。结果:与模型组比较,肾炎防衰液能够显著降低慢性肾功能衰竭大鼠尿素氮、血肌酐水平(P<0.01),升高血中红细胞、血红蛋白、血清铁、铁蛋白水平(P<0.01),降低大鼠血清铁调素、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子α水平(P<0.01),上调肾组织HIF-2α蛋白表达(P<0.01)。结论:肾炎防衰液能够在改善慢性肾功能衰竭大鼠肾功能同时,能够通过改善铁代谢紊乱状态,降低血清铁调素以及炎症因子水平,上调HIF-2α蛋白表达改善肾性贫血。

从脾论治消渴病肾病

消渴病肾病发生的病因与脾密切相关,脾散精功能障碍是导致消渴病肾病发生的始动环节,脾失健运、脾病及肾是消渴病肾病进展的关键因素。治疗时应重视从脾论治,重在恢复脾运。早期内热滞脾,方以大柴胡汤合半夏泻心汤加减,开郁清热、恢复脾运;中期脾虚痰瘀,癥瘕扰肾,方以参苓白术散合肾炎防衰液加减,健脾升清,运脾化痰,逐瘀消癥;晚期脾肾衰败,癥瘕积聚,方以真武汤合肾炎防衰液加减,温补脾肾,消癥散结。病程中尤应抓住消渴病肾病早中期的关键时期,健脾运津,脾肾同治,使脾安则肾愈安,力求治病求本。