Caspase-6诱导肾癌细胞株GRC-1细胞凋亡的研究

目的 探讨 Caspase- 6在肾癌细胞株 GRC- 1中的表达及其对肾癌细胞的凋亡诱导作用。方法 应用 RT- PCR方法检测了肾癌细胞株 GRC- 1中 Caspase- 6基因的表达水平 ;以腺病毒 adv5作载体 ,构建了含 Caspase- 6基因的转基因载体 ,用脂质体包裹法转染 GRC- 1细胞株 ,用 RT-PCR方法检测转染后 GRC- 1细胞中 Caspase- 6基因的表达。 MTT法检测转染 Caspase- 6对GRC- 1细胞株生长的影响。结果 肾癌细胞株 GRC- 1中未检出 Caspase- 6表达。 RT- PCR法证实转染 Caspase- 6后 GRC- 1中 Caspase- 6表达明显 ,MTT检测显示对 GRC- 1细胞的生长有抑制作用 ,通过形态学观察及 DNA电泳证实这种作用主要是通过促进细胞凋亡而实现的。结论 Cas-pase- 6对肾癌细胞的生长有抑制作用 ,并可诱导肾癌细胞凋亡。

逆转录病毒介导HyTK基因对肾癌细胞株GRC－1的杀伤作用

目的：了解逆转录病毒介导的HyTK基因转移联合更昔洛韦(GCV)对肾癌细胞的杀伤作用。 方法：利用逆转录病毒介导将HyTK基因导入人肾癌细胞株GRC-1，经用潮霉素筛选，获得稳定表达HyTK基因的GRC-1/HyTK细胞；应用PCR、RNA、Dot blot分子杂交及MTT等方法检测，在DNA、RNA水平的表达以及HyTK联合GCV对GRC-1/HyTK细胞的杀伤作用。 结果：PCR、Dot blot检测证明，HyTK基因的整合及mRNA水平的表达；MTT法测定示GCV对GRC-1/HyTK细胞有明显的杀伤作用。其IC50值为3.49 μg/ml，而对其亲代GRC-1细胞无明显杀伤作用。 结论：逆转录病毒介导的HyTK基因转移联合GCV可作为肾癌基因治疗的一种有效方法。

双特异性磷酸酶-1过表达对肾癌细胞株A498增殖和侵袭的影响

目的构建携带人双特异性磷酸酶-1(dual specificity phosphatase-1,DUSP-1)基因的过表达慢病毒载体并包装病毒,感染人肾癌细胞株A498后观察DUSP-1的过表达对肾癌细胞株A498增殖和侵袭能力的影响。方法从p CMV6-XL5-DUSP-1质粒上获得目的基因片段,采用DNA重组技术将DUSP-1基因插入到慢病毒表达载体质粒Plv-EGFP(2A)Puro中,获得重组plv-EGFP(2A)Puro-DUSP-1载体。重组慢病毒表达质粒及辅助包装质粒p H1、p H2共转染293T细胞进行慢病毒包装,收集病毒上清并感染肾癌细胞株A498,利用Western blot检测细胞DUSP-1蛋白的表达情况。用MTS法检测细胞增殖能力的变化,Transwell法检测细胞侵袭能力的变化。结果成功构建携带DUSP-1过表达载体。包装病毒后成功感染A498细胞株,DUSP-1蛋白表达较对照A498细胞株显著上调。重组质粒组细胞在490 nm吸光值明显上升(P<0.05);细胞侵袭试验中,重组质粒组的穿膜细胞数明显高于空载体组(P<0.05)。结论成功构建了人DUSP-1基因的重组慢病毒表达载体p LV-EGFP(2A)Puro-DUSP-1,进行病毒包装后成功培养稳定高表达DUSP-1基因的肾癌细胞株;DUSP-1基因的过表达具有促进肾癌细胞株A498增殖和侵袭的作用。

金雀异黄素对肾癌细胞GRC-1增殖及p27表达的影响

背景及目的:肾癌发病率在东西方国家间有较大差异,而东方国家人群中豆制品的消耗量较高可能是其肾癌发生率较低的原因之一。本实验拟研究大豆来源的酪氨酸蛋白激酶抑制剂金雀异黄素(genistein)对肾癌细胞系GRC-1细胞的增殖的影响,并初步探讨此种影响与抑癌基因p27的关系。方法:使用倒置显微镜、MTT法、流式细胞仪观察肾癌细胞系GRC-1细胞在受到金雀异黄素作用后其细胞增殖情况的变化;并用Westernblot法测量GRC-1细胞中P27蛋白表达水平的变化。结果:(1)经20μmol/L金雀异黄素处理的细胞变为梭形,伪足减少,核分裂相减少,细胞间连接减少;而经过40μmol/L金雀异黄素处理出现大量细胞碎片,细胞形态极度不规则,有丝分裂相少见,细胞间少有连接。(2)经20μmol/L金雀异黄素处理72h的细胞与对照组相比,其存活率为45.72%,其中有73.8%的细胞处在G1期,26.2%的细胞处在G2期;对照组为G1期31.6%,G2期3.8%。(3)经20μmol/L金雀异黄素处理72h的细胞裂解液中P27蛋白条带的灰度值为65.4±4.7,对照组为52.3±6.3。结论:金雀异黄素可显著抑制肾肿瘤细胞的增殖,使细胞周期阻滞于G1/M、G2/S期,其机理可能是通过提高肿瘤细胞中P27蛋白的表达水平实现的。

LncRNA PVT1对肾癌细胞株786-0增殖、侵袭和迁移的影响研究

目的:探讨长链非编码核糖核酸PVT1(LncRNA PVT1)在肾癌细胞株786-0中表达及其对肾癌细胞株786-0增殖、侵袭、迁移的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法比较人正常肾细胞株与人肾癌细胞株786-0中LncRNA PVT1表达差异,采用小干扰RNA(siRNA)转染786-0,使LncRNA PVT1基因沉默后通过CCK-8法检测LncRNA PVT1沉默对细胞增殖能力的影响,Transwell小室法检测LncRNA PVT1沉默对786-0细胞迁移能力、侵袭能力的改变,通过蛋白质印记法(Western blot)检测增殖相关蛋白β-catenin、cyclin D1及侵袭迁移相关蛋白N-cadherin、vimentin、E-cadherin表达情况。结果:与正常组、癌旁组相比,肾癌组细胞LncRNA-PVT1相对表达量显著升高(P<0.05);与空白组、阴性对照组相比,siPVT1组LncRNA-PVT1相对表达量显著降低(P<0.05),转染后48 h后OD值显著降低(P<0.05),细胞β-catenin、Cyclin D1蛋白水平显著降低(P<0.05),侵袭细胞数、迁移细胞数显著降低(P<0.05),N-cadherin、vimentin蛋白表达显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:肾癌细胞株786-0中LncRNA PVT1高表达,沉默LncRNA PVT1表达可抑制786-0细胞增殖、降低细胞侵袭、迁移能力。

人表皮生长因子受体2抑制剂联合白细胞介素-2对人肾癌细胞株的疗效观察

目的:了解曲妥珠单抗(Trastuzumab,商品名为赫赛汀)联合白细胞介素-2(IL-2)对肾癌细胞在体外的杀伤抑制作用,同时检测肾癌细胞在药物作用前后人表皮生长因子受体2(HER2)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达情况。方法:肾癌细胞系通过细胞培养技术进行培养,用单四唑(MTT)法观察曲妥珠单抗联合IL-2对该细胞系的抑制杀伤效果,进而运用链霉抗生物素-过氧化物酶免疫组化(S-P)法对HER2、MRP1表达进行测定。结果:曲妥珠单抗联合IL-2对肾癌细胞的生长抑制及耐药性呈时间和剂量依赖性。经药物处理后,HER2、MRP1表达明显下降(P<0.05)。结论:曲妥珠单抗能有效地抑制肾癌细胞的生长,对瘤细胞的耐药性也有一定的逆转作用。

转染P21^(WAF1)基因对GRC—1肾癌细胞凋亡的影响

目的:建立GRC—1肾癌细胞凋亡模型并探讨P21WAF1基因对肾癌细胞凋亡的影响。方法:采用顺铂诱导法建立肾癌细胞凋亡模型及转染P21WAF1基因方法观察P21WAF1基因的作用。结果:①用20μmol顺铂诱导GRC—1肾癌细胞。建立了细胞凋亡模型,凋亡细胞占细胞总数为29.4％。②成功转染了P21WAF1基因至GRC—1肾癌细胞;③转染P21WAF1基因的GRC—1肾癌细胞,培养至第10代细胞加入20μmol顺铂后,凋亡细胞占细胞总数为75.6％。④凋亡细胞比率29.4％与75.6％之间存在显著性差异,P<0.01。结论:①成功建立了肾癌细胞凋亡模型;②转染P21WAF1基因对肾癌细胞凋亡有促进作用。

肾癌相关新基因GYLZ-RCC18反义寡核苷酸转染对肾癌细胞系GRC-1的作用

目的 探讨肾癌相关新基因GYLZ RCC18在肾癌发生发展中的作用机制。 方法 采用逆转录PCR方法检测GYLZ RCC18在肾癌和正常肾细胞系中的表达 ,将第一编码区起始处的2 0个碱基的反义和正义寡核苷酸导入肾癌细胞系GRC 1,连续观察对肾癌细胞生长、增殖凋亡、死亡率、形态学的影响。 结果 GYLZ RCC18在肾癌细胞系中表达明显高于正常肾细胞系 ;导入GYLZ RCC18反义寡核苷酸后 ,GRC 1细胞的核分裂可明显减少 ,导致GRC 1细胞死亡 ,抑制癌细胞的生长和增殖活性 ,并可特异诱导GRC 1连续凋亡。 结论 GYLZ RCC18是肾癌发生发展密切相关的癌基因 ,其表达可促进肾癌细胞的生长和增殖 ,并通过抗癌细胞死亡和凋亡机制对癌细胞起保护作用。

恶性肿瘤细胞生长液培养早期胚胎的实验研究

目的 :寻找一种体外胚胎培养的良好培养液。方法 :小鼠交配后第 4天取胚胎 ,分别用肾癌细胞株GRC - 1的生长液和基础胚胎培养液 (FD +2 0 %胎牛血清 )进行体外培养 ,观察胚胎的脱带率、贴壁率和扩展率。结果 :肾癌细胞株GRC - 1的生长液可使体外培养胚胎的脱带率、贴壁率和扩展率分别达到 89.6 8%、86 .5 1%和 84 .92 % ,远远高于对照组的脱带率、贴壁率和扩展率 (P <0 .0 1)。结论 :肾癌细胞株GRC - 1的生长液对体外胚胎培养具有明显的促进作用。

丁酸钠诱导结肠癌细胞株凋亡的实验研究和机制探讨

丁酸钠是膳食纤维在肠道厌氧菌作用下产生的一种4碳短链脂肪酸（丁酸）钠盐。研究发现，丁酸钠可通过不同途径诱导多种肿瘤细胞的凋亡。本研究通过观察丁酸钠对结肠癌细胞株HT-29的促凋亡作用及其对p53三个重要靶基因p21waf1、Bax和Gadd45的调控，同时以人胚肾293细胞（二倍体）作对照，观察丁酸钠对正常细胞的毒性作用，旨在进一步探讨其抗肿瘤机制。

Genipin对肾癌细胞解偶联蛋白2和线粒体的影响

我们选取解偶联蛋白2（UCP2）作为切入点,采用不同剂量Genipin干预肾癌GRC-1细胞,探讨Genipin对肾癌的作用及其机制.一、材料与方法使用40、80、120 μmol/L 3种浓度的Genipin干预细胞48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡,噻唑蓝（MTT）法计算GRC-1细胞凋亡率;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测量UCP2 mRNA含量,酶联免疫吸附试验（ELISA）法定量细胞内UCP2蛋白表达;使用荧光探针检测细胞内钙离子与线粒体活性氧（ROS）含量;分光光度仪检测线粒体膜通道转运孔（MPTP）开放度和线粒体膜电位（△Ψm）的变化.数据采用SPSS 19.0统计学软件分析,组间均数采用单因素方差分析.