表达Ki67-siRNA的溶瘤腺病毒抑制人肾癌ACHN细胞Ki67基因表达及增殖研究

目的:研究表达Ki67-siRNA的溶瘤腺病毒(ZD55-Ki67)对肾癌ACHN细胞Ki67基因表达及增殖抑制作用。方法:ZD55-Ki67、溶瘤腺病毒ZD55、表达Ki67-siRNA的增殖缺陷腺病毒Ad-Ki67感染人肾癌ACHN细胞。Western印迹法检测E1A表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹、免疫组织细胞化学法检测Ki67表达;原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;MTT法检测细胞存活;结晶紫染色法检测细胞毒作用。结果:感染ZD55-Ki67、ZD55的ACHN细胞表达E1A;抑制Ki67表达作用依次为ZD55-Ki67>Ad-Ki67>ZD55。ZD55-Ki67、ZD55、Ad-Ki67感染的ACHN细胞凋亡率(%)分别为(56.3±3.1)、(25.3±2.5)、(37.0±3.0),均显著高于对照组(5.5±2.1)(P<0.01),每种病毒之间均有显著差异(P<0.01);存活率(%)分别为(40.9±2.2)、(71.3±6.6)、(86.8±3.1),每种病毒之间均有显著差异(P<0.01);对ACHN细胞的细胞毒作用ZD55-Ki67>ZD55>Ad-Ki67。结论:表达Ki67-siRNA的溶瘤腺病毒具有显著的抑制肾癌ACHN细胞Ki67基因表达、诱导凋亡、杀伤肾癌细胞作用。

虫草素联合阿霉素调控肾癌ACHN细胞系凋亡迁移的机制探讨

目的:探究肾癌ACHN细胞系经阿霉素组、阿霉素与虫草素联用组以及虫草素组刺激后,对细胞凋亡及迁移的影响及其相关机制探讨。方法:体外培养肾癌ACHN细胞系,采用MTT法检验不同浓度阿霉素组、阿霉素与虫草素联用组、虫草素组处理肾癌ACHN细胞系后细胞存活率;通过细胞划痕实验观察不同处理组肾癌ACHN细胞系的细胞迁移情况,形态学观察细胞外部形态,用HE染色和DAPI染色察看细胞内部变化和细胞核数量;并采用Western blot方法检测细胞内Bcl-2、Bax、MMP-2、MMP-9蛋白的表达情况。结果:与阿霉素高剂量组相比,联用组能够显著抑制肾癌ACHN细胞迁移,促进凋亡;并且发现减少细胞形态出现异常,HE和DAPI染色观察发现癌细胞数量明显减少,细胞核体积变大比率明显增加,细胞质中荧光强度减弱;Bax、Bcl-2、MMP-2蛋白表达差异显著。结论:虫草素与阿霉素联用组能够与阿霉素高剂量组达到同样抑制肾癌ACHN细胞迁移,并且显著促进凋亡蛋白基因表达的作用。本结果为天然植物有效成分与化学合成类药物联用治疗癌症提供了参考,为降低抗癌药物长时间耐药性提供了新途径。

姜黄素抑制肾癌ACHN细胞增殖及促凋亡的实验研究

目的观察姜黄素对人肾癌ACHN细胞株增殖及细胞凋亡的影响,探讨姜黄素诱导ACHN细胞株凋亡的作用机制。方法不同浓度姜黄素作用人肾癌ACHN细胞24 h后,应用MTT比色法检测姜黄素对人肾癌ACHN细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测姜黄素诱导细胞的凋亡率;RT-PCR检测姜黄素对ACHN细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65 mRNA表达的影响;Western blot方法检测其对细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65I、κB蛋白表达的影响。结果姜黄素对人肾癌ACHN细胞有明显的抑制作用,可引起细胞凋亡,并且存在剂量和时间依赖;不同浓度姜黄素作用细胞24 h后,Bcl-2、NF-κBP65 mRNA水平下降,Bax mRNA水平升高(P<0.05),Bcl-2、NF-κBP65蛋白表达量下降,BaxI、κB蛋白表达量升高(P<0.05)。结论姜黄素通过上调IκB,下调NF-κB活性,调控凋亡基因Bcl-2/Bax的表达,抑制人肾癌ACHN细胞的增殖,诱导人肾癌ACHN细胞的凋亡。

基于PI3K/Akt通路探讨莪术二酮诱导人肾癌ACHN细胞凋亡的实验研究

目的:探讨PI3K/AKt信号通路在莪术二酮体外诱导人肾癌ACHN细胞凋亡中的作用。方法:体外培养人肾癌ACHN细胞株,分别以不同药物浓度(12.5、50.0、200.0 mg/L)的莪术二酮在不同时间点(24、48、72 h)处理ACHN细胞,应用CCK-8法测定细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western Blot检测p-PI3K、p-Akt、Bax、Bcl-2、Caspase-3、p53等蛋白的表达。结果:莪术二酮能够抑制ACHN细胞增殖,呈浓度与时间依赖性;并可诱导ACHN细胞凋亡,呈浓度依赖性;同时可以下调p-PI3K、p-Akt及Bcl-2蛋白的表达,而上调P53、caspase-3、Bax蛋白的表达。结论:莪术二酮可通过抑制PI3K/AKt信号通路诱导ACHN细胞凋亡,从而抑制ACHN细胞的增殖。

胡黄连苷Ⅱ通过线粒体途径诱导肾癌细胞凋亡的实验研究

目的研究胡黄连苷Ⅱ(picrosideⅡ)对人肾癌ACHN细胞凋亡的影响及作用机制。方法将体外培养的肾癌ACHN细胞分为对照组、不同浓度胡黄连苷Ⅱ(1μg/mL、10μg/mL及100μg/mL)组,采用CCK-8法测定细胞增殖率,采用Hoechst 33258核染色法和Annexin V/PI检测细胞凋亡,采用Western blot法检测肾癌ACHN细胞内Bax及Bcl-2蛋白表达。结果不同浓度的胡黄连苷Ⅱ能抑制肾癌ACHN细胞生长并诱导细胞凋亡,随着胡黄连苷Ⅱ作用浓度的递增,肾癌ACHN细胞凋亡率呈剂量依赖性递增;胡黄连苷Ⅱ作用后,Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达下降。结论胡黄连苷Ⅱ通过改变线粒体凋亡途径中凋亡相关信号分子Bax及Bcl-2的表达,抑制肾癌ACHN细胞增殖并促进细胞凋亡。