细胞因子对肾癌细胞株786-0、GRC-1 Fas、FasL表达的调节及其意义

目的 :研究细胞因子对肾癌株Fas、FasL表达的影响及其意义。方法 :单独或联合应用IFNγ ,IFNα ,IL 2 ,TNFα刺激肾癌株 786 0、GRC 1细胞并检测Fas、FasL表达 ,以Fas单克隆抗体 (FasAb)诱导其凋亡 ,以JurkatT细胞共培养试验检测其FasL功能。结果 :1 IFNγ、IFNα均能显著上调 786 0、GRC 1细胞的Fas表达 (P <0 0 1,P <0 0 1) ,并促进FasAb诱导的凋亡 (P <0 0 1,P <0 0 1)。 2 TNFα、IFNα能分别上调 786 0、GRC 1细胞的FasL表达。IFNγ能显著上调 786 0、GRC 1细胞的FasL表达(P<0 0 1,P <0 0 1) ,并促进JurkatT细胞凋亡 (P <0 0 1,P <0 0 1)。结论 :IFNγ、IFNα可增强肾癌细胞株的Fas表达 ,并促进FasAb介导的凋亡。但其亦能上调肾癌细胞FasL表达并增强其对淋巴细胞的攻击作用。

葛根素对肾癌GRC-1细胞多药耐药的逆转作用

目的探讨葛根素对肾癌GRC-1细胞多药耐药的逆转作用。方法体外培养GRC-1人肾细胞癌株,并分为空白对照组、阿霉素处理组(10mg·L-1ADM)、葛根素处理的对照组(0.48g·L-1Pur)、阿霉素联合葛根素处理组(10mg·L-1ADM+0.24g·L-1Pur或10mg·L-1ADM+0.48g·L-1Pur),药物处理24h后,采用细胞毒性实验检测GRC-1细胞的生存率,用流式细胞术(Annexin-V/PI双标记)及TUNEL法检测细胞的凋亡情况。结果以对照组细胞生存率为100%,ADM组细胞生存率为(69.7±0.04)%,显著低于对照组(P<0.05),经0.12、0.24和0.48g·L-1Pur联合用药后,细胞生存率分别为(70.1±0.03)%、(63.2±0.02)%和(42.1±0.04)%,均明显低于空白对照组(P<0.05),且0.24和0.48g·L-1Pur联合用药的细胞生存率显著低于ADM处理组(P<0.05);0.12和0.24g·L-1Pur单独用药的细胞生存率分别为(97.4±0.02)%和(90.1±0.01)%,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),而0.48g·L-1Pur单独用药的细胞生存率为(75.0±0.03)%,显著低于空白对照组(P<0.05)。此外,与空白对照组相比,0.24和0.48g·L-1Pur处理细胞后,细胞凋亡率明显升高(P<0.05),且随Pur剂量增加而升高;而0.24和0.48g·L-1Pur联合用药组细胞凋亡率均明显高于ADM组(P<0.05)。结论葛根素可有效促进肾癌GRC-1细胞的凋亡,并可减轻GRC-1细胞对阿霉素的耐药性。

逆转录病毒介导HyTK基因对肾癌细胞株GRC－1的杀伤作用

目的：了解逆转录病毒介导的HyTK基因转移联合更昔洛韦(GCV)对肾癌细胞的杀伤作用。 方法：利用逆转录病毒介导将HyTK基因导入人肾癌细胞株GRC-1，经用潮霉素筛选，获得稳定表达HyTK基因的GRC-1/HyTK细胞；应用PCR、RNA、Dot blot分子杂交及MTT等方法检测，在DNA、RNA水平的表达以及HyTK联合GCV对GRC-1/HyTK细胞的杀伤作用。 结果：PCR、Dot blot检测证明，HyTK基因的整合及mRNA水平的表达；MTT法测定示GCV对GRC-1/HyTK细胞有明显的杀伤作用。其IC50值为3.49 μg/ml，而对其亲代GRC-1细胞无明显杀伤作用。 结论：逆转录病毒介导的HyTK基因转移联合GCV可作为肾癌基因治疗的一种有效方法。

抑癌基因p21^(WAF1/CIP1)在肾癌细胞GRC-1中的表达

引言ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１基因是新近发现的一种抑癌基因［１，２］．定位于６Ｐ２１．２，由三个外显子组成，表达蛋白分子质量为２１ｋｕ，故也称Ｐ２１．Ｐ２１生物学功能是通过与ｃｄｋ２或其它众多的ｃｄｋ相结合并抑制其活性，使细胞在Ｇ１期处于停滞状态，并使...

miR-137对肾癌GRC-1细胞增殖与凋亡的影响

目的研究miR-137对肾癌GRC-1细胞增殖与凋亡的影响。方法采用miR-137模拟物转染至肾癌GRC-1细胞,实验分为未转染组(未进行miR-137模拟物转染)、miR-137对照组(转染随机序列)、miR-137转染组(进行miR-137模拟物转染)。荧光定量PCR检测各组转染后48h细胞中miR-137表达水平,应用噻唑蓝细胞增殖试验(MTT)、流式细胞检测技术与免疫荧光评价miR-137对肾癌GRC-1细胞增殖和凋亡的影响。结果转染miR-137模拟物48h后,荧光定量PCR检测发现未转染组、miR-137对照组及miR-137转染组GRC-1细胞中miR-137的相对表达量依次为(24.43±2.03)%、(26.57±2.55)%、和(73.30±3.29)%,差异有统计学意义(P<0.05)。MTT细胞增殖实验与流式细胞仪检测结果显示,与未转染组、miR-137对照组相比,miR-137转染组转染48h后肾癌GRC-1细胞的增殖率显著降低,凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),而未转染组、miR-137对照组肾癌GRC-1细胞的增殖率、凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.02)。结论 miR-137可明显抑制肾癌GRC-1细胞增殖和促进其凋亡,故有望成为肾癌基因治疗的新靶点。

金雀异黄素对肾癌细胞GRC-1增殖及p27表达的影响

背景及目的:肾癌发病率在东西方国家间有较大差异,而东方国家人群中豆制品的消耗量较高可能是其肾癌发生率较低的原因之一。本实验拟研究大豆来源的酪氨酸蛋白激酶抑制剂金雀异黄素(genistein)对肾癌细胞系GRC-1细胞的增殖的影响,并初步探讨此种影响与抑癌基因p27的关系。方法:使用倒置显微镜、MTT法、流式细胞仪观察肾癌细胞系GRC-1细胞在受到金雀异黄素作用后其细胞增殖情况的变化;并用Westernblot法测量GRC-1细胞中P27蛋白表达水平的变化。结果:(1)经20μmol/L金雀异黄素处理的细胞变为梭形,伪足减少,核分裂相减少,细胞间连接减少;而经过40μmol/L金雀异黄素处理出现大量细胞碎片,细胞形态极度不规则,有丝分裂相少见,细胞间少有连接。(2)经20μmol/L金雀异黄素处理72h的细胞与对照组相比,其存活率为45.72%,其中有73.8%的细胞处在G1期,26.2%的细胞处在G2期;对照组为G1期31.6%,G2期3.8%。(3)经20μmol/L金雀异黄素处理72h的细胞裂解液中P27蛋白条带的灰度值为65.4±4.7,对照组为52.3±6.3。结论:金雀异黄素可显著抑制肾肿瘤细胞的增殖,使细胞周期阻滞于G1/M、G2/S期,其机理可能是通过提高肿瘤细胞中P27蛋白的表达水平实现的。

靶向siRNA干扰hIAP-2联合姜黄素抑制肾癌GRC-1细胞增殖的实验研究

目的应用hIAP-2特异性siRNA干扰肾癌GRC-1细胞hIAP-2基因的表达,探讨siRNA-hIAP-2联合姜黄素对肾癌GRC-1细胞增殖和凋亡的影响。方法体外化学合成针对hIAP-2的siRNA,通过阳离子脂质体将siRNA-hIAP-2转染肾癌GRC-1细胞,实时荧光定量PCR检测hIAP-2 m RNA表达水平,免疫印迹检测其蛋白表达水平,MTT法及流式细胞术分别测定siRNA-hIAP-2联合姜黄素处理后对肾癌GRC-1细胞增殖及凋亡的影响。结果靶向hIAP-2的siRNA可以有效抑制肾癌GRC-1细胞的hIAP-2的表达,siRNA-hIAP-2和姜黄素均可抑制GRC-1细胞增殖并诱导其一定程度的凋亡,当联合应用靶向hIAP-2的siRNA和姜黄素时,上述作用显著增强(P<0.05)。结论体外化学合成的siRNA-hIAP-2可以有效抑制肾癌GRC-1细胞的hIAP-2的表达,并能显著增强姜黄素诱导肾癌细胞GRC-1凋亡的敏感度,提示hIAP-2可作为姜黄素治疗肾癌的有效增敏靶点。

氧化锌纳米颗粒诱导促死亡自噬杀伤肾癌细胞的实验研究

目的探讨氧化锌纳米颗粒(ZnO NPs)对肾透明细胞癌细胞Caki-1的杀伤效应及其与自噬的相关性。方法于96孔板内制备Caki-1单层细胞(2×10^3/孔),用不同浓度(1、5、10、15、20、25μg/ml)的ZnO NPs处理后或用15μg/ml ZnO NPs处理不同时间(6、12、24 h)后,噻唑兰(MTT)法检测ZnO NPs对Caki-1细胞的生长抑制作用。随后,用Western blot法检测不同处理组细胞自噬效应的变化,最后再次利用MTT法及Hoechst33342/PI染色法测定ZnO NPs与自噬抑制剂或增强剂共处理后细胞活力的改变。结果ZnO NPs对Caki-1细胞具有剂量及时间依赖性的杀伤效应。且ZnO NPs亦可诱导剂量及时间依赖性的自噬效应。将ZnO NPs与自噬抑制剂渥曼青霉素(Wort)共处理后,微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ型(LC3-Ⅱ)蛋白的积累减少。ZnO NPs与自噬诱导剂海藻糖(Trehalose)共处理后,LC3-Ⅱ蛋白的积累增多。同时,将ZnO NPs与Wort或氯喹共处理后,细胞活力相较于ZnO NPs单独处理组有所回升;而将ZnO NPs与Trehalose联合处理细胞后,细胞活力进一步降低。结论ZnO NPs对Caki-1细胞具有剂量及时间依赖性的杀伤效应;在Caki-1细胞中可诱导促死亡自噬效应,抑制自噬可降低ZnO NPs对细胞的杀伤作用,增强自噬可促进ZnO NPs对细胞的杀伤作用;ZnO NPs可促进自噬体的形成,而非抑制自噬底物的降解。

HSV-TK/ACV系统促肾癌细胞株GRC-1细胞凋亡的实验研究

目的 观察HSV TK/ACV系统对肾癌GRC 1细胞的杀伤作用及旁观者效应。方法 将含不同浓度的肾癌GRC 1/TK细胞与肾癌GRC 1细胞混合培养 ,分为 4组 ,分别含GRC 1/TK细胞 0 %、2 5 %、5 0 %及 10 0 % ,分别用无环鸟苷 6 0 μg/ml进行处理 ,观察细胞形态改变、测定活细胞数并行流式细胞术、电子显微镜检查。结果 实验组与对照组GRC 1细胞均无明显变化 ;含 2 5 %以上GRC 1/TK细胞可观察到明显的杀伤作用 ,并有凋亡峰及凋亡小体形成。结论 HSV TK/ACV系统对肾癌GRC 1细胞具有明显的杀伤作用及旁观者效应 。

肾癌相关新基因GYLZ-RCC18反义寡核苷酸转染对肾癌细胞系GRC-1的作用

目的 探讨肾癌相关新基因GYLZ RCC18在肾癌发生发展中的作用机制。 方法 采用逆转录PCR方法检测GYLZ RCC18在肾癌和正常肾细胞系中的表达 ,将第一编码区起始处的2 0个碱基的反义和正义寡核苷酸导入肾癌细胞系GRC 1,连续观察对肾癌细胞生长、增殖凋亡、死亡率、形态学的影响。 结果 GYLZ RCC18在肾癌细胞系中表达明显高于正常肾细胞系 ;导入GYLZ RCC18反义寡核苷酸后 ,GRC 1细胞的核分裂可明显减少 ,导致GRC 1细胞死亡 ,抑制癌细胞的生长和增殖活性 ,并可特异诱导GRC 1连续凋亡。 结论 GYLZ RCC18是肾癌发生发展密切相关的癌基因 ,其表达可促进肾癌细胞的生长和增殖 ,并通过抗癌细胞死亡和凋亡机制对癌细胞起保护作用。

不同时相的肾癌细胞系GRC-1细胞Fas的表达

细胞表面的Ｆａｓ（ＡＰＯ１／ＣＤ９５）可以传导凋亡信号，诱导Ｆａｓ所在细胞的凋亡性死亡，在机体内清除细胞和维持机体内稳定中有重要作用。Ｆａｓ的表达强度是其诱导凋亡性细胞死亡的先决条件，广泛研究Ｆａｓ的表达和影响因素十分必要。作者应用逆转录聚合酶链...

鸦油乳与土贝母对肾癌细胞系GRC—1细胞周期的影响

报道了用流式细胞术观察鸦胆子油乳剂和土贝母制剂对人肾颗粒细胞癌细胞系GRC－1细胞周期的影响。实验结果表明：这二种药物均可使细胞周期的S期细胞百分比含量明显减少；使G1期细胞比率明显升高。提示：鸦胆子油乳剂与土贝母制剂对S期细胞敏感，可能通过抑制S期细胞DNA合成发挥其抗癌作用。