下瘀血汤对慢性肾功能衰竭大鼠肾组织PCNA阳性细胞、Ⅳ型胶原及FN变化的影响

目的:探讨下瘀血汤延缓慢性肾功能衰竭的作用机制。方法:采用5/6肾切除法制作大鼠任性肾衰模型,用SP法观察下瘀血汤、生大黄煎液及洛汀新对大鼠紧组织PCNA阳性细胞计数、Ⅳ型胶原及FN表达的影响。结果:下瘀血汤对CRF大鼠肾组织PCNA阳性细胞计数,Ⅳ型胶原及FN的表达均有显著降低作用,作用与洛河新相仿。结论;下瘀血汤可抑制CRF大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质沉积,可能是其防止肾小球硬化,延缓肾衰的作用机理之一。

狼疮性肾炎肾活检组织中PCNA与Bcl-2的表达及意义

目的 观察狼疮性肾炎 (lupusnephritis ,LN)肾组织内凋亡调控基因Bcl 2及增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达 ,探讨凋亡在LN发病中的作用。方法 应用ELPS(enhancedlabelled polymersystem)检测 2 9例LN肾穿刺活检组织PCNA和Bcl 2的表达 ,并与正常组进行对比分析。结果 LN组肾小球内PCNA阳性细胞数与正常对照组肾组织比较 ,有显著性差异 (P <0 .0 0 1)。LN组肾小球内Bcl 2阳性表达细胞明显高于正常对照组 (P <0 .0 0 1) ,阳性表达细胞见于系膜细胞、毛细血管内皮细胞和细胞性新月体内。LN组肾小球Bcl 2阳性细胞数与PCNA阳性细胞数、肾小球细胞总数有显著正性线性相关 (r =0 .70 1.P <0 .0 1;r =0 .5 5 0 ,P <0 .0 1)。结论 LN肾组织肾小球内细胞高增殖和Bcl 2高表达 。

肾癌组织中CD40/p53/PCNA表达的研究

目的研究肾癌组织中CD40分子的表达与癌发生浸润转移的关系,以及其与p53、PCNA等因素之间的相关性。方法用免疫组织化学二步法对福尔马林固定、石蜡包埋的肾细胞癌组织(32例)和癌旁组织(10例)中CD40、p53和PCNA的表达情况进行回顾性研究,分析CD40分子表达水平高低与肾癌临床分期、病理分级和发生淋巴结转移的相关性,以及其与p53、PCNA等因素之间的相关性。结果CD40、p53和PCNA在肾细胞癌组织中表达的阳性率分别为87.5%、9.4%和59.4%,与肾癌癌旁组织组相比,差异有统计学意义(P<0.01);CD40的阳性过度表达与肿瘤临床分期、病理组织学分级和淋巴结转移显著相关(P<0.05);p53和PCNA与淋巴结转移显著相关(P<0.01);CD40在肾癌的过度表达与p53不存在相关性(P>0.05),但与PCNA显著相关(P<0.05)。结论CD40分子在肾癌中的异常表达可为肾癌的诊断、治疗及指导预后提供可靠依据,并为进一步研究肿瘤生物学,尤其是抑制FAS和TNFR介导的细胞凋亡与基因治疗肾细胞癌打下基础。

应用组织芯片研究人肾癌中Survivin、EGFR和PCNA的表达与预后的关系

目的检测Survivin、EGFR和PCNA在人肾癌组织中的表达,以探讨三者在肾癌中表达的相关性及其与预后的关系。方法利用组织芯片技术构建82例肾癌与26例癌旁正常肾组织芯片,应用免疫组织化学Envision法检测Survivin、EGFR和PCNA在肾癌组织中的表达。结果肾癌中Survivin、EGFR和PCNA的总表达率分别为74.4%(61/82)、57.3%(47/82)和78.0%(64/82),显著高于正常肾组织(P<0.05)。Survivin和PCNA在肾癌中的表达随着病理分级升高而升高,Survivin和EGFR在肾癌中的表达随着临床分期的升高而升高。肾癌的预后与Survivin、EGFR的阳性表达率有关(P<0.05)。Survivin、EGFR、PCNA三者在肾细胞癌的发生发展中关系密切(P<0.01)。结论Survivin、EGFR、PCNA在肾癌中均有过量表达,可能参与肾癌的发生、发展。Survivin、EGFR阳性表达均可以提示肾癌的不良预后。

骨髓间充质干细胞移植对缺血再灌注损伤肾组织细胞增殖的影响

目的探讨外源性的骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)对缺血再灌注肾损伤的肾组织细胞增殖的影响。方法取SD雄性大鼠胫、股骨骨髓,percoll密度梯度分离法分离骨髓MSCs。32只雌性SD大鼠复制缺血再灌注肾损伤的模型,随机分为两个组:移植组和对照组。移植组经下腔静脉移植骨髓MSCs,对照组给予等量生理盐水,分别于1天、2天、3天、4天处死大鼠,两组大鼠每天均经腹腔注射5-溴脱氧尿苷嘧啶(bromodeoxyuridine,BrdU)。留取肾组织采用免疫组织化学染色方法检测BrdU阳性细胞在肾组织内的分布情况。结果在缺血再灌注后的第二天,移植组和对照组都有表达BrdU阳性细胞,并随时间延长BrdU阳性细胞个数逐渐增多,但移植组BrdU阳性细胞明显高于对照组,两者有统计学意义(P值<0.05)。结论移植的外源性骨髓MSCs能够促进损伤肾脏的细胞增殖,参与肾损伤的修复。

狼疮性肾炎病变肾组织中bFGF、CD68和PCNA表达的研究

目的 通过对狼疮性肾炎 (LN)与肾小球轻微病变 (GML)肾组织中bFGF、CD6 8、PCNA的原位检测和相关分析 ,以了解它们在LN发病中的意义及其相互关系。方法 以 14例GML为对照组 ,采用ABC免疫组化法对 2 3例LN病例的肾穿刺组织 ,分别检测其bFGF、CD6 8和PCNA表达情况。结果 与GML病例相比 ,LN组肾小球bFGF表达明显增强 (P <0 0 5 ) ,CD6 8和PCNA表达的阳性细胞数也明显增多 (P <0 0 1) ;IV型LN组肾小球bFGF明显强于II型LN组 ;LN组肾小球内CD6 8+ 与PCNA+ 细胞数间呈正相关 (r =0 5 6 ,P <0 0 5 ) ,其中IV型LN组中有肾小球新月体形成的病例 ,CD6 8+ 与PCNA+ 细胞数间也呈正相关 (r =0 86 ,P <0 0 5 )。结论 LN病变肾小球bFGF、CD6 8和PCNA表达均明显增强 ,其表达在某种程度上可反映临床LN病变程度的严重性。

草鱼头肾发生组织学与免疫组织化学观察

为研究草鱼头肾的组织发生发育,应用组织学技术,对1～103 dph(day post hatching)的草鱼头肾进行观察分析,描述了头肾的组织结构变化及免疫球蛋白M(IgM)阳性细胞及过碘酸雪夫氏(PAS)阳性细胞的发生和分布。结果显示,6 dph,出现头肾原基,原基中原肾管分化形成的肾小管之间出现散在的干细胞。7 dph至16 dph,造血干细胞逐渐分化成不同类型的细胞,免疫细胞数量逐渐增加;17 dph至103 dph,肾小管逐渐退化至完全消失,网状内皮系统支持下的淋巴造血组织构成头肾的主要部分。40 dph肾上腺细胞团开始出现。65 dph与成鱼头肾的组织结构接近,作为淋巴—肾上腺组织存在。PAS阳性细胞最早在7 dph出现;IgM阳性细胞最早出现于17 dph;之后,IgM阳性细胞及PAS阳性细胞逐渐增多,分布于整个头肾组织。研究表明,65 dph草鱼头肾在组织上发育基本成熟;头肾作为草鱼免疫器官的早期发育可以分为3个阶段:无参与免疫反应的细胞、只具有参与非特异性免疫反应的细胞以及参与非特异性免疫反应及特异性免疫反应的细胞组织结构逐步发育完善。

AZT对大鼠种植性肝癌细胞凋亡及bax蛋白和PCNA表达影响的研究

目的:观测端粒酶抑制剂3’-叠氮-3’-脱氧胸腺核苷(AZT)对大鼠种植性肝癌组织细胞凋亡及bax蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制。材料和方法:对Walker-256荷瘤大鼠行直视下瘤内注射AZT6天后观测肿瘤细胞凋亡率并采用免疫组化EnVision法检测肿瘤组织中bax蛋白及PC-NA的表达,并与对照组进行对照。结果:AZT组及对照组肿瘤细胞凋亡率分别为(12.439±0.802)%、(3.903±0.182)%,AZT组明显高于对照组(P<0.05);对照组bax蛋白及PCNA阳性细胞表达率分别为(16.851±10.064)%和(54.234±24.589)%,AZT组bax蛋白及PCNA阳性细胞表达率为(39.279±17.041)%和(27.278±13.961)%,经AZT处理后bax蛋白表达被明显调高(P<0.05),PCNA表达明显降低(P<0.05)。结论:AZT能调高大鼠walker-256肿瘤组织bax蛋白的表达,抑制PCNA表达,促进肿瘤细胞凋亡。

CD44对5／6肾切除大鼠残肾细胞增生和表型转化的影响

目的探讨5／6肾切除大鼠残肾纤维化过程中，细胞粘附分子CD44对肾脏固有细胞增生和表型转化的作用及意义。方法大鼠分为5／6肾切除组(肾切除组)和假手术组，HE染色观察肾组织的病理改变．免疫组织化学方法检测细胞粘附分子CD44、细胞增殖抗原(PCNA)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果残肾组织出现肾小球系膜细胞增生、肾小球硬化，肾小管萎缩或扩张，肾间质炎性细胞浸润及残肾纤维化的病变。残肾组织CD44、PCNA和α-SMA的表达明显增多(P<0．01)．CD44的表达与α-SMA、PCNA的表达成正相关。结论残肾组织CD44的高表达可能是5／6肾切除大鼠细胞增生并发生表型变化的重要原因之一。

增殖细胞核抗原与转化生长因子β_3在肾母细胞瘤中的表达及意义

目的探讨增殖细胞核抗原(PCNA)和转化生长因子β3(TGF-β3)在肾母细胞瘤组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学分别检测PCNA和TGF-β3在9例正常肾组织和21例肾母细胞瘤组织中的表达,比较两者在肾母细胞瘤组织中的表达差异。结果PCNA在肾母细胞瘤和正常组织中的阳性表达率分别为95.23%(20/21)和33.33%(3/9),而TGF-β3在肾母细胞瘤和正常组织中的阳性表达率分别为19.04%(4/21)和66.67%(6/9);PCNA和TGF-β3在肾母细胞瘤中的阳性表达与正常组织相比均具有显著性差异(P<0.05)。结论PCNA和TGF-β3可能在肾母细胞瘤的发生中起作用,并可能与肾母细胞瘤组织细胞的转化及增殖相关。

BCL-2、PCNA在肾癌中的表达及临床意义

肿瘤研究已进入分子水平,癌基因、抑癌基因、凋亡调控及其相关蛋白的研究越来越受到医学界的重视。本文仅对BCL-2、增殖细胞抗原(PCNA)在肾癌中的表达及临床意义作一综合评述。

小鼠小脑皮质细胞PCNA表达的加龄变化

小鼠小脑皮质细胞ＰＣＮＡ表达的加龄变化赵春芳崔慧先张明（北京医科大学组胚教研室）增殖细胞核抗原ＰＣＮＡ主要出现在进行ＤＮＡ合成即Ｓ期的细胞核中。近年来的研究表明它对ＤＮＡ分子合成有重要意义。本研究应用免疫组织化学技术对ＰＣＮＡ在生后小鼠发育阶段小脑皮...

小儿肾母细胞瘤中p21^(WAF1)、PCNA的表达及其临床意义

目的:探讨p21WAF1和增生细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的检测在小儿肾母细胞瘤的诊断和预后评估方面的应用价值。方法:对1985年—2002年的32例经病理证实的小儿肾母细胞瘤石蜡标本,用免疫组织化学的方法检测p21WAF1和PCNA的表达水平,并评价它们的临床意义。结果:PCNA和p21WAF1的表达均与肾母细胞瘤组织学分型、临床肿瘤分期和淋巴结转移相关;p21WAF1表达指数(p21WAF1expression index, PI)和PCNA表达指数(PCNA expression index, PCI)呈负相关,表明p21WAF1的高表达可能对细胞增生周期有抑制作用。结论:本研究从细胞周期调控的角度为推测肾母细胞瘤发生、诊断和预后评估提供了新的思路。

慢性移植物抗宿主病狼疮小鼠模型肾组织细胞凋亡及Th1/Th2细胞因子的研究

目的研究慢性移植物抗宿主病(cGVHD)狼疮样小鼠模型肾组织细胞凋亡及Th1/Th2细胞因子的改变。方法20只B6D2F1代杂交鼠,随机分为模型组(10只)及对照组(10只),12周后处死。采用原位末端标记法(TUNEL)染色观察肾组织细胞凋亡;免疫组织化学、Westernblot和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测Fas、FasL基因转录及蛋白表达情况。结果TUNEL法结果显示模型组肾组织细胞凋亡较对照组增多。免疫组织化学提示:各组均有Fas、FasL表达,正常对照组有极少量Fas表达,表达部位在肾小球系膜细胞;FasL表达部位在近端肾小管上皮细胞。聚合酶链反应(PCR)结果:模型组较正常对照组FasmRNA表达增高。模型组较正常对照组FasLmRNA表达差异无显著性。正常对照组干扰素(IFN)-γ和白细胞介素(IL)-4阳性细胞极少;模型组肾组织血管周围浸润的炎性细胞中可见IFN-γ和IL-4阳性细胞,且IL-4阳性细胞明显高于IFN-γ,提示Th2细胞表达占优势。模型组比正常对照组INF-γ和IL-4阳性细胞明显升高,RT-PCR结果显示:模型组IFN-γ与正常对照组比较差异无显著性;模型组IL-4较正常对照组显著升高。结论cGVHD狼疮样小鼠模型肾组织细胞凋亡异常及Th1/Th2细胞因子失衡,在狼疮肾炎(LN)的发病中起重要作用。

大黄酸对肾小球硬化肾皮质凋亡蛋白酶-3活性及细胞凋亡的影响

目的观察大黄酸对肾小球硬化及细胞凋亡的影响,以探讨大黄酸对肾小球硬化的保护作用。方法一侧肾切除加尾静脉注射阿霉素制作肾小球硬化大鼠模型,随机分为对照组、肾病组、大黄酸治疗组和苯那普利治疗组,分别在第6、8、10、12周处死每组6只大鼠,免疫组织化学染色测定肾皮质凋亡蛋白酶3(caspase3),比色法测定caspase3活性,凝胶电泳迁移率转换实验(EMSA)检测核因子κB(NFκB)活性,原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测肾组织细胞凋亡,观察caspase3、NFκB的表达与肾组织细胞凋亡情况。结果肾病组出现明显蛋白尿,血白蛋白下降及胆固醇上升,肾小球硬化指数、细胞凋亡指数、NFκB活性及caspase3表达随时间延长均明显高于对照组(P<0.05或P<0.01)。各时点比较,第10周肾病组见大量TUNEL阳性细胞,并略高于12周(9.3±2.3比8.4±1.2,P>0.05),caspase3表达也最为显著,明显高于12周(11.4±2.5比8.2±1.7,P<0.05),主要分布在肾皮质毛细血管周围,与凋亡细胞表达趋于一致。大黄酸或苯那普利治疗后,8周起TUNEL阳性细胞明显减少,并维持在一定水平,NFκB活性和caspase3表达均降低(P<0.05),肾脏病理变化及生化改变明显改善,肾皮质caspase3表达与细胞凋亡指数呈正相关(r=0.836,P<0.01)。结论大黄酸对肾小球硬化有明显防治作用,可能通过影响NFκB、caspase3活性在肾小球硬化早期调控病理改变,caspase3表达下降可能是大黄酸减轻肾小球硬化细胞凋亡的分子机制之一。

ATP7B和PCNA在大鼠、小鼠空肠及肾的表达

随机选取6只SD大鼠(Rattus norvegicus)和7只昆明小鼠(Mus musculus),用免疫组织化学单标和双标法检测其空肠及肾ATP7B与PCNA的表达,并分析表达的相关性。结果发现,对于大鼠及小鼠,ATP7B主要表达于小肠腺与空肠上皮的纹状缘、近腔面和近基底部,肾小管与集合管;PCNA在空肠腺及小肠绒毛中轴的结缔组织中表达,在肾小管、集合管及肾小球的少数细胞表达;ATP7B与PCNA虽在空肠上皮、肠腺、肾小管和集合管有共表达现象,但二者在大鼠与小鼠空肠及肾的免疫反应阳性物积分光密度间均无显著相关性(P>0.05)。提示ATP7B与PCNA在正常大鼠与小鼠空肠及肾的表达相似,ATP7B的表达与组织增殖活跃程度间的相关性不明显。

强肌健力方对脾肾两虚证大鼠胸腺增殖细胞核抗原表达的影响

目的观察强肌健力方对脾肾两虚证大鼠胸腺组织的作用及机理。方法将72只SD大鼠随机分为5组,即正常对照组(10只),模型组(16只),强肌健力方组(15只),黄芪减量方组(15只),单味黄芪组(16只)。采用灌服大黄复制脾虚模型(14天),在脾虚基础上采用肌肉注射氢化可的松复制肾虚模型(10天)。造模同时分别给予蒸馏水、强肌健力方、黄芪减量方、单味黄芪灌胃,连续给药24d后,取胸腺组织行HE染色,光学显微镜下观察各组大鼠胸腺组织形态学的变化,用免疫组化的方法测定增殖细胞核抗原(PCNA)表达。结果模型组体质量比正常对照组显著减轻(P<0.01),而各用药组均可使大鼠体质量升高(P<0.05或P<0.01);模型组大鼠胸腺组织有不同程度损伤,而强肌健力方组、单味黄芪组能使已遭损伤的胸腺组织得以修复;与正常对照组比较,模型组胸腺组织PCNA蛋白表达减少,阳性面积率显著降低(P<0.01);而强肌健力方能使胸腺组织PCNA表达升高(P<0.05)。结论强肌健力方能有效促进脾肾两虚证大鼠胸腺组织细胞增殖,并对受损的胸腺组织具有保护作用,其健脾益气的作用机理与升高PCNA表达有关。

免疫组织化学方法在人/山羊嵌合体人源细胞鉴定中的应用

目的 在胎山羊宫内移植人造血干细胞 (hHSC)获得人 /山羊嵌合体基础上 ,应用免疫组织化学技术分析嵌合体实验山羊肝、肺和肾组织中人源细胞的生长及分化情况。方法 对 7头经荧光激活的细胞分选 (FACS)、荧光原位杂交 (FISH)和分子生物学方法鉴定为阳性的实验山羊 ,在出生后不同时间取其肝、肺和肾组织 ,制作石蜡切片 ,然后采用免疫组织化学的EnVision系统 ,用特异性人增殖期细胞核抗原 (PCNA)单抗、人肝细胞特异性抗原 (HSA)单抗及人 β 2微球蛋白 (β 2M )单抗鉴定这些组织中的人源细胞。结果 7头实验山羊的肝组织中有一定比例的PCNA和HSA抗体阳性染色细胞 ,肺和肾组织内有PCNA及 β 2M抗体阳性染色细胞 ,正常人的肝、肺和肾细胞也呈阳性染色 ,而非hHSC移植的正常山羊的肝、肺和肾组织中未见有阳性染色细胞。结论 胎山羊宫内移植hHSC所形成的嵌合体的肝脏中有人源细胞存活 ,并检测到表达人肝细胞特异抗原的人肝样细胞。免疫组化鉴定的阳性结果与分子生物学等方法的鉴定结果相符。此外 ,在嵌合体山羊肺和肾组织中也发现有人源细胞。