非洲绿猴肾细胞株AGMr(HindⅢ)-1高度重复顺序的克隆及初步应用

从非洲绿猴肾细胞株分离高度重复顺序AGMr（HindⅢ）－1基因，以pUC18质粒为载体构建重组质粒pUC18／AGMr（HindⅢ）－1，转化E．coliJM83。酶切分析、SouthernBlot分析和序列分析均证明克隆成功，但所用的第165代Vero细胞株与另一非洲绿猴肾BSC－1细胞株的序列相比较，172个碱基中有6个位点突变。用该重组质粒作探针，对Vero细胞培养的狂犬疫苗作SouthernBlot分析表明，未经纯化的半成品中残余细胞DNA长度约400～5000bp。斑点杂交分析表明，杂交特异性良好，残余细胞DNA最小检出量约4pg。提示AGMr（HindⅢ）－1高度重复顺序可特异地应用于Vero细胞残余DNA检测。

抗菌肽葛佬素在非洲绿猴肾细胞株COS-7中的表达及其活性的初步分析

目的 观察自行设计的葛佬素cDNA在非洲绿猴肾细胞株COS 7中的表达及其表达产物的抗菌作用。 方法 分析同种族蛋白质AttacinAcDNA序列各种遗传密码子的出现频度 ,结合已知的葛佬素蛋白质序列 ,设计、合成其cDNA序列。经测序验证后 ,将葛佬素基因插入真核细胞表达载体pCDSI中 ,构建载体pBZHG。随后以脂质体为载体 ,对COS 7细胞进行质粒pBZHG和空载体pCDSI的转染 ,72h后收集细胞培养上清液 ,进行杀菌活性的检测 (以正常COS 7细胞培养上清作对照 )。 结果 人工设计的葛佬素cDNA序列在COS 7中得到表达。与转染空载体的细胞和正常细胞比较 ,转染pBZHG的COS 7细胞培养上清对大肠杆菌J5具有杀菌活性。 结论 笔者所设计的葛佬素cDNA序列是正确的 ,由此可为深入研究葛佬素的抗菌及抗内毒素作用提供实验依据。

人胚肾细胞株对脂多糖刺激的反应及关键基因的表达

人胚肾细胞株是研究Toll样受体（TLR）最常使用的细胞。为更好地认识其特性，我们进行了相关研究。一、材料与方法1．细胞培养及反转录一聚合酶链反应（1it—PCR）：人胚肾细胞株293T、293A、HEK293采用杜尔伯科改良伊格尔培养基（DMEM）进行常规培养，总RNA抽提后行RT—PCR，引物均为自行设计。

不同浓度千金子对G250基因高表达肾癌Renca细胞株Livin蛋白表达的影响研究

目的观察不同浓度千金子对G250基因高表达肾癌Renca细胞株Livin蛋白表达的影响.方法将125只大鼠分为正常对照组、模型对照组、高剂量千金子治疗组、中剂量千金子治疗组以及低剂量千金子治疗组,每组大鼠25只.正常对照组正常饲养,其余各组采用皮下注射法构建肾脏移植瘤模型.高剂量千金子治疗组、中剂量千金子治疗组以及低剂量千金子治疗组分别于成瘤5d后连续给予千金子治疗,注射浓度分别为20mg/mL、10mg/mL以及2.5mg/mL,剂量为200mg/kg,1次/d,连续15d接受千金子治疗.正常对照组与模型对照组造模后给予注射等剂量生理盐水.比较各组大鼠抑瘤率、G250基因蛋白、Livin基因蛋白的表达.结果与模型对照组相比,高、中、低剂量千金子治疗组5-25d平均抑瘤率较高（P〈0.05）,且各组平均抑瘤率呈逐渐增高趋势;与中剂量千金子治疗组以及低剂量千金子治疗组相比,高剂量千金子治疗组平均抑瘤率较高（P〈0.05）.与正常对照组相比,模型对照组,高、中、低剂量千金子治疗组肾脏组织中Livin基因表达水平较低（P〈0.05）;G250基因表达水平较高（P〈0.05）;与中剂量千金子治疗组以及低剂量千金子治疗组相比,高剂量千金子治疗组Livin基因表达水平较高（P〈0.05）;G250基因表达水平较低（P〈0.05）.结论高浓度千金子对肾癌Renca细胞株具有良好的抑制作用,可能与下调G250基因表达,上调Livin蛋白表达相关.

甲基化抑制剂对肾癌细胞株中γ-caenin蛋白表达的影响

目的研究甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肾痛A498细胞增殖及γ-连环蛋白(γ-catenin)表达的影响。方法使用不同浓度(10^(-7)、10^(-6)、10^(-5)mol/L)的特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR处理A498肾癌细胞株。MTT检测5-Aza-CdR对肾癌细胞株A498抑制作用。细胞免疫化学检测5-Aza-CdR处理A498肾癌细胞株后γ-catenin表达的变化。结果 5-Aza-CdR能明显抑制肾癌细胞的增殖,且与药物浓度及作用时间有关。药物处理后y-连环蛋白表达增加。结论 y-catenin蛋白表达受甲基化的抑制,提示5-Aza-CdR可使γ-catenm基因去甲基化而抑制A498肾癌细胞株增殖。

葡萄糖、胰岛素和尿酸对猪近端肾小管上皮细胞株血红素氧合酶-1的影响

目的观察不同浓度葡萄糖、胰岛素和尿酸的培养条件下猪近端肾小管上皮细胞株(LLC-PK1)血红素氧合酶(HO-1)活性的改变,以探讨代谢相关因素在细胞水平对肾小管上皮细胞的影响。方法以LLC-PK1为研究对象,观察葡萄糖浓度为5、10、22、33 mmol/L,胰岛素浓度为0、10-9、10-8、10-7mol/L,尿酸浓度为0、0.1、0.2、0.4 mmol/L培养48 h条件下,LLC-PK1细胞HO-1活性的改变。结果0.1 mmol/L0、.2 mmol/L和0.4 mmol/L尿酸刺激48 h后,LLC-PK1的HO-1活性增加,并呈剂量依赖关系,而上述浓度的葡萄糖和胰岛素刺激48 h对LLC-PK1的HO-1活性无影响。结论一定浓度的尿酸可使LLC-PK1的HO-1活性升高,提示尿酸在细胞水平对肾小管上皮细胞的氧化应激过程产生影响。

奈达铂与顺铂对人肝肾细胞损伤作用的对比

目的对比奈达铂(NDP)与顺铂(DDP)对人肝细胞HL-7702、人胚肾细胞293T的不良反应。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同浓度的NDP和DDP对HL-7702、293T细胞的抑制作用。流式细胞仪(FCM)检测加NDP和DDP前后,HL-7702、293T细胞凋亡率的变化。测定HL-7702、293T细胞损伤前后细胞的活性氧自由基(ROS)及细胞裂解液中丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果 MTT显示不同浓度的NDP和DDP对HL-7702、293T细胞均有一定的抑制作用,且DDP对HL-7702、293T细胞的损伤作用明显高于NDP(P<0.05)。FCM也表明DDP对HL-7702、293T细胞的抑制作用较NDP明显。NDP和DDP均能导致HL-7702、293T细胞ROS、MDA含量增加,SOD活性降低。DDP对HL-7702、293T细胞的氧化损伤更明显(P<0.05)。结论 NDP和DDP对HL-7702、293T细胞均有细胞毒性和氧化损伤作用。NDP对HL-7702、293T细胞的损伤作用较DDP小。

流感病毒鼠肺适应株FM1诱导犬肾细胞MDCK凋亡的实验研究

流感病毒鼠肺适应株FM1攻击犬肾细胞36 h后,通过对其细胞形态学的观察、DNA电泳图谱的分析及流式细胞仪的检测,显示受到病毒攻击后犬肾细胞在形态学上主要表现为细胞圆缩,核固缩、碎裂等,在细胞周围形成典型的圆形凋小体;琼脂糖凝胶电泳实验图谱可见到清晰的ladder梯状条带;流式细胞仪的检测提示在正常的二倍体峰前可见明显的亚二倍体峰,并有一定的细胞凋亡率。根据以上结果可得出结论:在流感病毒鼠肺适应株FM1攻击犬肾细胞MDCK后诱导了细胞凋亡的发生。

T肽对树突细胞的协同作用及其对肾癌细胞抗肿瘤效应和免疫微环境的影响

目的探究T肽对树突细胞(DC)的协同作用及其对肾癌细胞的抗肿瘤效应和免疫微环境的影响。方法 (1)将人DC的培养皿分为3组:A组人DC的培养皿加入生理盐水100μl,B组人DC的培养皿加入T肽50μg/100μl,C组人DC的培养皿加入脂多糖(LPS)50μg/100μl;使用流式细胞仪检测DC成熟度,并观察DC表面共刺激分子表达。(2)将人DC的培养皿分为两组:D组人DC的培养皿加入生理盐水100μl,F组人DC的培养皿加入T肽50μg/100μl;观察人DC分泌IL-12b的情况。(3)将人肾癌细胞的培养皿分为2组:E组人肾癌细胞的培养皿加入生理盐水100μl,F组人肾癌细胞加入人DC悬液100μl;D组人肾癌细胞加入T肽50μg/100μl和人DC悬液100μl;观察T肽协同DC对肾癌细胞的凋亡率,并且检测趋化因子CCL2、CCL5、CCL20、CCL22和CCL27的表达。结果 T肽促进DC的成熟,促进其表面共刺激分子表达水平上调;T肽可促进DC分泌IL-12b;T肽联合DC组对肿瘤细胞的抑制作用最强,差异有统计学意意义(P<0.05);DC组和T肽联合DC组对肾癌细胞免疫微环境的影响明显,而且T肽联合DC组对肾癌细胞免疫微环境的影响最明显(P<0.05)。结论 T肽对DC具有协同作用,且可增强DC的抗肿瘤效应和对免疫微环境的影响。

葛根素对肾癌GRC-1细胞多药耐药的逆转作用

目的探讨葛根素对肾癌GRC-1细胞多药耐药的逆转作用。方法体外培养GRC-1人肾细胞癌株,并分为空白对照组、阿霉素处理组(10mg·L-1ADM)、葛根素处理的对照组(0.48g·L-1Pur)、阿霉素联合葛根素处理组(10mg·L-1ADM+0.24g·L-1Pur或10mg·L-1ADM+0.48g·L-1Pur),药物处理24h后,采用细胞毒性实验检测GRC-1细胞的生存率,用流式细胞术(Annexin-V/PI双标记)及TUNEL法检测细胞的凋亡情况。结果以对照组细胞生存率为100%,ADM组细胞生存率为(69.7±0.04)%,显著低于对照组(P<0.05),经0.12、0.24和0.48g·L-1Pur联合用药后,细胞生存率分别为(70.1±0.03)%、(63.2±0.02)%和(42.1±0.04)%,均明显低于空白对照组(P<0.05),且0.24和0.48g·L-1Pur联合用药的细胞生存率显著低于ADM处理组(P<0.05);0.12和0.24g·L-1Pur单独用药的细胞生存率分别为(97.4±0.02)%和(90.1±0.01)%,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),而0.48g·L-1Pur单独用药的细胞生存率为(75.0±0.03)%,显著低于空白对照组(P<0.05)。此外,与空白对照组相比,0.24和0.48g·L-1Pur处理细胞后,细胞凋亡率明显升高(P<0.05),且随Pur剂量增加而升高;而0.24和0.48g·L-1Pur联合用药组细胞凋亡率均明显高于ADM组(P<0.05)。结论葛根素可有效促进肾癌GRC-1细胞的凋亡,并可减轻GRC-1细胞对阿霉素的耐药性。

Janus激酶抑制剂对高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化的作用

目的评估Janus激酶抑制剂AG490对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKC),分别给予高糖和高糖+AG490干预,Western blot检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙粘素(E-Cadherin)及信号蛋白STAT1、STAT3、磷酸化STAT1(p-STAT1)和p-STAT3的表达,酶联免疫吸附法测定细胞上清液中TGF-β1和Ⅰ型胶原的分泌,逆转录聚合酶链反应检测TGF-β1 mRNA表达。结果与低糖对照组比较,高糖培养的HKC中α-SMA、p-STAT1和p-STAT3表达明显上调,E-Cadherin表达明显下调,TGF-β1 mRNA表达增加,细胞培养上清液中TGF-β1和Ⅰ型胶原分泌增加。AG490明显下调p-STAT1和p-STAT3表达的同时,明显抑制高糖刺激HKC中α-SMA表达的升高,减轻E-Cadherin表达下降程度,降低TGF-β1 mRNA表达及TGF-β1和Ⅰ型胶原的分泌。结论JAK参与了高糖诱导的HKC转分化,并刺激TGF-β1和细胞外基质分泌,JAK抑制剂AG490能有效拮抗其作用。

姜黄素抑制肾癌ACHN细胞增殖及促凋亡的实验研究

目的观察姜黄素对人肾癌ACHN细胞株增殖及细胞凋亡的影响,探讨姜黄素诱导ACHN细胞株凋亡的作用机制。方法不同浓度姜黄素作用人肾癌ACHN细胞24 h后,应用MTT比色法检测姜黄素对人肾癌ACHN细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测姜黄素诱导细胞的凋亡率;RT-PCR检测姜黄素对ACHN细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65 mRNA表达的影响;Western blot方法检测其对细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65I、κB蛋白表达的影响。结果姜黄素对人肾癌ACHN细胞有明显的抑制作用,可引起细胞凋亡,并且存在剂量和时间依赖;不同浓度姜黄素作用细胞24 h后,Bcl-2、NF-κBP65 mRNA水平下降,Bax mRNA水平升高(P<0.05),Bcl-2、NF-κBP65蛋白表达量下降,BaxI、κB蛋白表达量升高(P<0.05)。结论姜黄素通过上调IκB,下调NF-κB活性,调控凋亡基因Bcl-2/Bax的表达,抑制人肾癌ACHN细胞的增殖,诱导人肾癌ACHN细胞的凋亡。

糖肾宁含药血清对高糖刺激肾小管上皮细胞增殖作用及RhoA/ROCK信号通路影响的实验研究

目的:探讨糖肾宁含药血清对高糖刺激肾小管上皮细胞增殖作用及Rho A/ROCK信号通路的影响。方法:10%FBS的RPMI 1640培养细胞,培养细胞分为正常组、模型组、厄贝沙坦组和糖肾宁组,按每孔3000个细胞接种于96孔板中。每组8个复孔,加入6%的各组含药血清培养,分别于12、24、48、60 h观察细胞形态并应用MTT法检测细胞增殖情况;Western blotting检测Rho A、ROCK1、α-SMA和E-Cadherin蛋白的表达。结果:正常组细胞呈扁平不规则多角形,高糖刺激下,细胞呈梭型,加入含药血清后呈扁平不规则多角形。MTT:24、48 h,正常组与模型组比较,有极显著性差异(P<0.01),60 h,正常组与模型组比较,有显著性差异(P<0.05);24 h,糖肾宁组与厄贝沙坦组比较,有显著性差异(P<0.05);48 h,糖肾宁组与厄贝沙坦组、Y27632组比较,有极显著性差异(P<0.01);60 h,糖肾宁组与厄贝沙坦组、Y27632组比较,有显著性差异(P<0.05)。Western blotting:正常组与模型组、Y27632组比较Rho A蛋白表达减少,有极显著性差异(P<0.01);糖肾宁组与模型组比较,有极显著性差异(P<0.01);糖肾宁组与Y27632组比较,有显著性差异(P<0.05)。正常组与模型组比较ROCK1蛋白表达减少,有极显著性差异(P<0.01);Y27632组、各治疗组和模型组比较,有显著性差异(P<0.05)。正常组与模型组比较α-SMA蛋白表达减少,有极显著性差异(P<0.01);Y27632组、各治疗组和模型组比较,有显著性差异(P<0.05)。正常组与模型组组比较E-Cadherin蛋白表达增加,有显著性差异(P<0.05);Y27632组与糖肾宁组比较,有显著性差异(P<0.05);模型组与Y27632组、各治疗组比较,有显著性差异(P<0.05)。结论:糖肾宁可抑制高糖培养肾小管上皮细胞增殖和Rho A/ROCK信号通路相关分子的表达,逆转肾小管上皮细胞转分化、减轻肾间质纤维化、延缓DKD进程。

普罗布考对肾小管上皮细胞氧糖剥夺/复氧损伤的影响及其机制研究

背景肾缺血-再灌注损伤的主要病理生理基础是肾小管上皮细胞发生脂质过氧化损伤,而肾小管上皮细胞损伤直接影响尿液的形成。普罗布考是具有很强抗氧化作用的降血脂药,其可以通过提高细胞内抗氧化酶活性降低脂质过氧化水平,具有较好的组织或细胞保护作用。但目前尚未见关于普罗布考对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)引起的人肾小管上皮细胞株(HK-2)损伤影响的报道。目的探讨普罗布考对HK-2 OGD/R损伤的影响及其机制,为老药新用开辟新思路。方法 2017年12月-2018年9月,取HK-2,常规培养至完全贴壁后将其分为正常对照组、OGD/R组、OGD/R+25μmol/L普罗布考组、OGD/R+50μmol/L普罗布考组、OGD/R+100μmol/L普罗布考组。正常对照组不予处理,OGD/R组、OGD/R+25μmol/L普罗布考组、OGD/R+50μmol/L普罗布考组、OGD/R+100μmol/L普罗布考组进行OGD/R模型的建立,之后OGD/R组不予处理,OGD/R+25μmol/L普罗布考组、OGD/R+50μmol/L普罗布考组、OGD/R+100μmol/L普罗布考组分别加入25、50、100μmol/L普罗布考;分别于12、24、48 h时,计算各组细胞增殖活性,确定普罗布考最佳作用时间与浓度,用于后续实验。取HK-2,常规培养至完全贴壁后将其分为正常对照组(不予处理)、OGD/R组(建立OGD/R模型)、普罗布考组(给予最佳作用浓度的普罗布考)、OGD/R+普罗布考组(建立OGD/R模型后给予最佳作用浓度的普罗布考);于普罗布考最佳作用时间,观察各组细胞形态,检测各组乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)水平、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性、谷胱甘肽(GSH)水平、GPX4水平。结果 OGD/R组、OGD/R+25μmol/L普罗布考组、OGD/R+50μmol/L普罗布考组、OGD/R+100μmol/L普罗布考组12、24、48 h时细胞增殖活性低于正常对照组(P<0.05);OGD/R+50μmol/L普罗布考组、OGD/R+100μmol/L普罗布考组24、48 h时细胞增殖活性高于OGD/R组、OGD/R+25μmol/L普罗布考组(P<0.05)。OGD/R+50μmol/L普罗布考组、OGD/R+100μmol/L普罗布考组24、48 h时细胞增殖活性高于本组12 h时(P<0.05)。由于用药原则为在相似的作用下,一般选择较低浓度及较短作用时间,因此采用50μmol/L普罗布考作用24 h进行后续实验。OGD/R组悬浮细胞增多,细胞皱缩体积减小,失去正常形态,折光性减弱;普罗布考组细胞形态结构正常,贴壁完整;OGD/R+普罗布考组悬浮细胞减少,细胞折光性较好。OGD/R组、OGD/R+普罗布考组LDH活性高于正常对照组(P<0.05);普罗布考组、OGD/R+普罗布考组LDH活性低于OGD/R组(P<0.05);OGD/R+普罗布考组LDH活性高于普罗布考组(P<0.05)。OGD/R组、OGD/R+普罗布考组MDA水平高于正常对照组(P<0.05);普罗布考组、OGD/R+普罗布考组MDA水平低于OGD/R组(P<0.05);OGD/R+普罗布考组MDA水平高于普罗布考组(P<0.05);OGD/R组GPX活性低于正常对照组(P<0.05);普罗布考组、OGD/R+普罗布考组GPX活性高于OGD/R组(P<0.05);OGD/R+普罗布考组GPX活性低于普罗布考组(P<0.05)。OGD/R组GSH水平低于正常对照组(P<0.05);普罗布考组、OGD/R+普罗布考组GSH水平高于OGD/R组(P<0.05)。OGD/R组GPX4水平低于正常对照组(P<0.05);普罗布考组、OGD/R+普罗布考组GPX4水平高于OGD/R组(P<0.05)。结论普罗布考对OGD/R引起的HK-2损伤具有保护作用,可能机制是通过激活GPX,尤其是提高GPX4水平,直接或间接抑制脂质过氧化物的过度产生。

5-氮杂-2’-脱氧胞苷抑制肾癌细胞增殖及逆转γ-catenin基因甲基化作用

目的:研究甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肾癌OS-RC-2细胞生长的抑制作用及对γ-catenin基因甲基化状态的影响,初步探讨肾癌发病机制及临床治疗的可行性。方法:不同浓度5-Aza-CdR处理肾癌细胞OS-RC-2后,采用倒置显微镜观察5-Aza-CdR处理OS-RC-2肾癌细胞株前后细胞形态学变化;四唑蓝(MTT)比色观察细胞经药物处理前后的生长活性;流式细胞仪检测5-Aza-CdR对OS-RC-2肾癌细胞株凋亡的影响;Western blot检测5-Aza-CdR处理OS-RC-2肾癌细胞株后γ-catenin蛋白表达的变化;甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测细胞处理前后γ-catenin基因的甲基化状态。结果:形态学观察显示,用药后癌细胞体积缩小,核固缩,染色质凝聚成块;5-Aza-CdR明显抑制肾癌细胞OS-RC-2的生长;细胞凋亡率增高;药物处理后γ-catenin蛋白表达恢复;未经5-Aza-CdR处理的OS-RC-2细胞中γ-catenin基因启动子区域高甲基化,经10-5mol/L5-Aza-CdR处理72h后,γ-catenin基因启动子区域高甲基化得到逆转。结论:5-Aza-CdR能有效逆转肾癌OS-RC-2细胞γ-catenin基因的异常甲基化,恢复γ-catenin蛋白表达,诱导肾癌细胞凋亡。

丹参对马兜铃酸致肾小管上皮细胞损害的保护作用研究

目的:探讨丹参对马兜铃酸(aristolochicacid,AA)所致肾小管上皮细胞损害的保护作用。方法:以95%DMEM培养液加5%小牛血清培养肾小管上皮细胞株(NRK-52E),加入不同浓度的丹参和马兜铃酸,采用MTT法来观察肾小管上皮细胞存活以及生长的状况;用碘化丙啶(PI)染色方法确认细胞凋亡的发生。结果:马兜铃酸浓度超过10mg/ml时肾小管上皮细胞的活力显著抑制(P<0.05)。以丹参3.0、15、30、60mg/ml处理后的肾小管上皮细胞再加入AA(10mg/ml浓度),则肾小管上皮细胞的活力明显增加,且随着丹参浓度的增加其作用愈趋明显(P<0.01),丹参明显抑制AA所造成肾小管上皮细胞的凋亡(P<0.01)。结论:丹参(3.0、15、30、60mg/ml)通过减少马兜铃酸致肾小管上皮细胞的凋亡,可明显保护肾小管上皮细胞,且其作用随着丹参浓度的增加而加强。

糖肾平含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖作用及RhoA/ROCK信号通路影响的研究

目的:探讨糖肾平含药血清对高糖刺激肾小管上皮细胞增殖作用及Rho A/ROCK信号通路的影响。方法:制备鼠含药血清;培养肾小管上皮细胞分为:正常组,高糖组,抑制剂(Y27632)组,厄贝沙坦组,糖肾平低、中、高剂量组,3000细胞/孔种于96孔板,每组8个复孔,12、24、48、60 h观察细胞,MTT法检测细胞增殖。Western blotting检测肾小管上皮细胞中Rho A、ROCK1、α-SMA和E-Cadherin蛋白的表达。结果:高糖诱导后细胞呈梭型或不规则三角形;含药血清干预后,细胞呈扁平不规则多角形。MTT:12 h,与正常组比,各组OD值升高;24、48、60 h,与正常组比,高糖组OD值显著升高(P<0.01);与高糖组比,各治疗组OD值有不同程度降低(P<0.05),48 h,与Y27632组、厄贝沙坦组和糖肾平高剂量组比,糖肾平低、中剂量组OD值降低(P<0.05);60 h,与Y27632组比,糖肾平中剂量组降低;与厄贝沙坦组比,糖肾平各剂量组OD值降低(P<0.05);与糖肾平高剂量组比,糖肾平低剂量组升高(P<0.05)。Western blotting,与正常组比,高糖组E-Cadherin蛋白表达减少,Rho A、ROCK1和α-SMA蛋白表达增加(P<0.01);与高糖组比,各组E-Cadherin蛋白表达增加,Rho A、ROCK1和α-SMA蛋白表达减少,高剂量组有显著差异(P<0.01);与Y27632组比,糖肾平高剂量组ROCK1、E-Cadherin和α-SMA蛋白表达无统计学差异(P>0.05),Rho A蛋白表达减少(P<0.01);与厄贝沙坦组比,糖肾平高剂量组Rho A、ROCK1、E-Cadherin和α-SMA蛋白表达无统计学差异(P>0.05)。结论:糖肾平通过抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖和Rho A/ROCK信号通路相关分子的表达,从而逆转上皮-间质转分化,抑制肾间质纤维化,延缓糖尿病肾病病情进展。

抑制Smad7的表达对肾小管上皮细胞的影响

目的:本研究旨在观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肾小管上皮细胞Smad7表达变化,以及对其凋亡及增殖的影响。方法:大鼠肾小管上皮细胞株NRK-52E分别与终浓度为0(对照组)、10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/LAngⅡ共培养24h。通过AnnexinV-FITC/PIKit用流式细胞仪检测细胞凋亡指数,用免疫组化的方法检测增殖性细胞核抗原(PCNA)和Smad7蛋白的表达,RT-PCR检测Smad7mRNA的表达水平。结果:随着AngⅡ浓度的增加,10-6mol/LAngⅡ组与对照组相比凋亡指数显著增加,分别为(27.06±1.14)%vs(3.09±0.73)%(P<0.001)。与对照组相比,Smad7的表达在含有AngⅡ组中均呈现出低表达水平,并在一定范围内随AngⅡ浓度的增加而逐渐受到抑制,并与细胞凋亡指数成负相关(r=-0.82,P<0.05)。结论:AngⅡ可以抑制肾小管上皮细胞Smad7的表达,同时促进细胞凋亡,二者具有密切关系。

益肾软坚散含药血清拮抗马兜铃酸对人近端肾小管上皮细胞的作用

目的:研究益肾软坚散含药血清能否拮抗马兜铃酸(aristolochicacid,AA)诱发的人近端肾小管上皮细胞株(HKC)促纤维化效应。方法:用马兜铃酸钠盐(AA Na,40mg·L-1)加或不加10%大鼠含药血清与HKC细胞孵育,而后检测信使RNA(mRNA)和蛋白质表达。结果:大鼠含药血清能显著下调AA Na刺激后HKC细胞对转化生长因子β1(TGFβ1)、结缔组织生长因子(CTGF)和金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP1)mRNA及蛋白质的高表达(P<0.05),但对纤溶酶原激活物抑制物1(PAI1)mRNA及蛋白质高表达无显著作用(P>0.05)。结论:益肾软坚散含药血清可下调AA刺激的HKC细胞促细胞外基质(ECM)合成因子及抗ECM降解因子的表达。

1,25-二羟基维生素D_3对人肾小球系膜细胞增殖、周期的影响及其机制

目的观察1,25-二羟维生素D_3(1,25-(OH)_2D_3)对人肾小球系膜细胞株增殖及细胞周期的影响,并探讨其可能作用机制。方法对数生长期人肾小球系膜株细胞分为A、B、C、D组,分别加入终浓度为10^(-8)mol/L的1,25(OH)_2D_3+含5%FBS的L-DMEM培养基、5 mg/L雷帕霉素+含5%FBS的L-DMEM培养基、5 mg/L雷帕霉素+终浓度为10^(-8)mol/L 1,25(OH)_2D_3+含5%FBS的L-DMEM培养基。给药48 h时观测各组细胞增殖及细胞周期分布,检测各组细胞真核细胞翻译起始抑制因子4E结合蛋白(4E-BP1)、磷酸化4E-BP1蛋白。结果给药48h时A、B、C组的细胞凋亡率分别为38.02%、55.62%、99.23%,组间比较,P均<0.05。给药48 h时,A、B、C组G_1期细胞所占比例明显高于D组(P均<0.05),S、G_2/M期细胞所占比例明显低于D组(P均<0.05);B、C组G_1期细胞所占比例明显高于A组(P均<0.05),S、G_2/M期细胞所占比例明显低于D组(P均<0.05);C组G_1期细胞所占比例明显高于B组(P均<0.05),S、G_2/M期细胞所占比例明显低于B组(P均<0.05)。A、B、C组细胞4EBP1、磷酸化4E-BP1蛋白相对表达量及磷酸化4E-BP1/4E-BP1均低于D组(P均<0.05);B、C组细胞4E-BP1、磷酸化4E-BP1蛋白相对表达量及磷酸化4E-BP1/4E-BP1均低于A组(P均<0.05);C组细胞4E-BP1、磷酸化4EBP1蛋白相对表达量及磷酸化4E-BP1/4E-BP1均低于B组(P均<0.05)。结论 1,25(OH)_2D_3可抑制人肾小球系膜细胞株的增殖,阻滞细胞周期于G_1期,其机制可能为1,25-(OH)_2D_3下调4E-BP1的表达。