猪瘟兔化弱毒牛肾细胞疫苗的研究——猪瘟病毒在牛肾细胞上的培养及影响毒价因素的观察

用免疫荧光法对猪瘟兔化弱毒(以下简称兔毒)在牛肾细胞上繁殖释放过程的研究证明,兔毒虽然能够在牛肾细胞上繁殖释放,但接毒后96小时,感染细胞量仅50％,培养物中毒价甚低。为此,我们对猪瘟兔毒在牛肾细胞上的培养及提高其毒价和影响毒价的因素进行了探讨。

猪瘟兔化弱毒牛肾细胞疫苗的研究——牛肾细胞培养及其生物学性状的观察

用牛肾上皮细胞培养猪瘟兔化弱毒,生长繁殖良好,并不断从细胞中释放出来,猪瘟兔化弱毒在牛肾细胞上培养,不引起肉眼可见病变,用免疫荧光法可在接毒后6小时从胞浆中发现特异性荧光,接毒后18小时,可用家兔在细胞培养物中检出病毒。用带毒细胞传代,能促进兔毒在牛肾细胞上的适应能力,细胞传代后经3个多月培养,其间多次换液,不接毒,细胞收液的病毒滴度可稳定的达到1:20000,用盖玻片作带毒传代细胞单层培养,用姬姆萨染色镜检,可在许多细胞浆中发现原生小体样紫色颗粒,用H·E染色,可在胞浆中发现嗜伊红包涵体样颗粒,初步认为猪瘟兔化弱毒在牛肾细胞上培养,可产生包涵体。用牛肾细胞大瓶旋转培养猪瘟兔化弱毒,能生产疫苗,并可多次接毒、收毒,收毒次数达20余次,疫苗毒价可达1:50000,少数批次可达1:100000,对猪有良好免疫力,本试验1987年10月在云南生药厂已完成中试生产,先后冻干疫苗5批,一次效检50000倍合格的占80％,20000倍合格的占20％,各项检验指标符合规程要求,区域试验注射各种猪只40000余头,证明安全有效,疫苗在-18～-20℃保存1年,未见毒价下降。

双价纯化肾综合征出血热地鼠肾原代细胞疫苗的免疫效果

目的 考核双价肾综合征出血热地鼠肾原代细胞纯化疫苗 (汉滩型 +汉城型 )对人体的安全性及免疫原性。方法 分别选择南方和北方两个观察点 ,分别接种 5 18人和 6 5 0人 ,观察接种对象的副反应 ,并测定血清荧光抗体和中和抗体。结果 在观察中仅有 2人呈现度局部副反应 ,总反应率为 0 .5 0 %。IFA抗体阳转率为89.95 % ,ELISA抗体阳转率为 10 0 % ,GMT为 1735。中和抗体阳转率大于 87.38%。结论 该疫苗对人体安全 。

肾综合征出血热地鼠肾细胞灭活疫苗(Ⅱ型)稳定性的研究

采用空斑减少中和试验（ＰＲＮＴ）检测疫苗效力的方法，对肾综合征出血热地鼠肾细胞灭活疫苗（Ⅱ型）进行了系统地稳定性试验研究。结果表明，疫苗置３７℃３ 天，室温３ 周，２～８℃保存一年、一年半、两年和两年半。效力试验检测结果均达到合格标准，证明疫苗稳定性良好。

Beagle狗肾细胞及用于制备乙脑活疫苗的研究

Ｂｅａｇｌｅ乳狗（５－１０日龄）肾块用热消化法制成细胞批放液氮保存，检定合格后做下列试验：（１）复苏培养长满单层后更换维持液，其细胞能维持４天以上，克服了常规消化培养细胞维持时间短（３６小时）的缺陷。（２）传代１４－２株病毒时，１代病毒的滴度即达６．０４－６．２４ＬｏｇＰＦＵ／ｍｌ，１代后的各代（至１１代）病毒滴度无明显提高。（３）该细胞接种１４－２株病毒时不产生明显的破坏性病变（ＣＰＥ），在收毒前采取冻溶１次比冻溶前的病毒滴度提高０．２７－０．５ＬｏｇＰＦＵ／ｍｌ。以ＢＤＫ细胞传１代的１４－２株病毒作生产毒种，收毒前冻溶１次等工艺法制备五批疫苗，全面检定结果均符合《乙脑活疫苗规程》的质量标准。其中病毒滴度为６．０９－６．２４ＬｏｇＰＦＵ／ｍｌ；免疫效价（ＩＤ５０＝ｍｌ）为１．９－４．０×１０－５，与相同滴度的原毒株１４－２ＰＨＫ苗对照无明显差异（ｔ＝０．９６８Ｐ＞０．０５），表明其免疫原性与原毒株相似。

儿童和老年人群接种双价肾综合征出血热纯化疫苗(Vero细胞)安全性观察

目的评价双价肾综合征出血热纯化疫苗(Vero细胞)应用于6～15岁及60岁以上人群的接种安全性。方法对知情同意的6岁以上三个年龄组500名健康人群按2∶1∶2的比例非随机接种双价肾综合征出血热纯化疫苗(Vero细胞),采用同一批疫苗接种16～60岁人群作为对照组,观察6～15岁及60岁以上人群试验疫苗接种反应。结果6～15岁儿童组、16～60岁成人组在初次疫苗接种后中度全身(体温)反应率均为1.00%,6～15岁儿童组在初次疫苗接种后中度局部(局部红肿)反应率为0.50%;6～15岁儿童组、16～60岁成人组在第二次疫苗接种后没有观察到中、强度(体温、局部红肿)反应;>60岁老人组在初次和第二次疫苗接种后均没有发现中、强度反应。三组的全身、局部反应发生率均差异无显著性(P>0.05)。结论双价肾综征出血热纯化疫苗(Vero细胞)在6～15岁儿童组和>60岁老人组人群接种具有良好的安全性。

双价肾综合征出血热沙鼠肾细胞灭活疫苗接种效果观察

现已知我国半数地区间时存在着姬鼠和家鼠二种型别的肾综合征出血热(HFRS)的混合流行,因此,有必要研制能同时预防这二种型别的疫苗。目前我国用于生产疫苗的三株HFRS病毒,对同型各毒株均表现较好的中和作用,但对异型病毒的交叉中和作用较差。经人体免疫三针后,对同型病毒的中和抗体阳转率可达90%,而对异型病毒的阳转率仅30%左右。因而,在我国,研制双价HFRS疫苗的工作早已被提出来了。本文报道我们研制的双价HFRS沙鼠肾灭活疫苗免疫人体的结果。材料与方法一、疫苗:由杭州天元生物药业公司生产的双价肾综合征出血热沙鼠肾细胞灭活疫苗(批号双-4),制造疫苗的毒种为Z10(Ⅰ型)和Z37(Ⅱ型),病毒在沙鼠肾原代细胞培养后,经β-丙内脂灭活,内含0.1%人血白蛋白和0.5mg/ml氢氧化铝佐剂,先分别制成Ⅰ型和Ⅱ型的单价疫苗,再按不同比例混合而成双价疫苗。

肾综合征出血热双价地鼠肾细胞灭活疫苗的安全性及血清学效果评价

目的 :评价肾综合征出血热地鼠肾细胞双价灭活疫苗的安全性及血清学免疫效果。方法 :按统一方法观察接种后副反应发生情况 ,以蚀斑减少中和试验方法测定免疫前后血清中和抗体。结果 :对 10 0人进行系统观察 ,局部反应与全身反应发生率均为 2 .0 0 % ,总反应率为 4.0 0 % ,其中强反应发生率为 1.0 0 % ;无头疼、头晕、恶心、皮疹等全身症状及注射处硬结、痒、烧灼感、淋巴结肿痛等局部症状发生。免疫后Ⅰ型病毒中和抗体阳转率为 92 .5 0 % ,Ⅱ型病毒中和抗体阳转率为 95 .0 0 % ,90 .0 0 %受观察者对两型病毒均阳转。结论

精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗吸附条件的筛选试验

精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗（PPHKRV）中含有一定剂量的佐剂，它可以提高疫苗的免疫原性，现已将AlPO4和Al(OH)3两种佐剂用于PHKRV中，比较不同浓度，不同吸附，pH和不同吸附时间疫苗效价，从中筛选最适宜作为PPHKRV的吸附剂。

广西应用原代地鼠肾细胞人用狂犬病疫苗接种效果的研究

目的评价原代地鼠肾细胞人用狂犬病疫苗的预防接种效果。方法观察性研究。结果广西16年应用原代地鼠肾细胞人用狂犬病疫苗接种狂犬病暴露人群保护率为86．0％，疫苗用量由1982年10万人份增加到1995年的50万人份，使广西狂犬病疫情下降呈剪刀叉的趋势。全国情况也是一样。1987年广西全面建立犬伤门诊后，按照局部伤口清洗，抗血清应用与疫苗免疫“三者并重”原则的处理方法，对狂犬病的预防效果与所产生的社会效果是巨大的。结论原代地鼠肾细胞人用疫苗预防效果良好，价格低廉，比精制鸡胚细胞疫苗与精制录猴肾细胞疫苗等容易在发展中国家中推广使用。

双价肾综合征出血热灭活疫苗(地鼠肾细胞)细菌内毒素检查法

目的建立双价肾综合征出血热灭活疫苗(地鼠肾细胞)细菌内毒素检查法。方法细菌内毒素检查的定量测定法与凝胶限量法两种方法进行干扰实验。结果通过样品进行适当的稀释,凝胶法:样品浓度为1.2×10-3mg/mL,使用灵敏度为0,06EU/mL的鲎试剂进行细菌内毒素检查无干扰作用;定量测定:与凝胶法相同的样品浓度回收率好,无干扰作用。结论双价肾综合征出血热灭活疫苗(地鼠肾细胞)可以建立细菌内毒素检查法。

应用不同代次兔肾细胞培养风疹病毒松叶株的研究

目的为提高兔肾细胞产量用于增加风疹病毒生产。方法 SPF级家兔肾细胞经传代培养10代,对不同代次兔肾细胞进行遗传稳定性、外源因子及兔脑原虫检测后接种风疹病毒松叶株(Matsuba strain)的试验。结果兔肾细胞产量得到提高,由1对兔肾平均生产1瓶细胞增加为8瓶,细胞核型检查传至第10代的细胞染色体数目与初代细胞一致,细胞培养物均一性提高。第0～第3代细胞病毒培养物滴度间无显著性差异,χ2检验返回相关性的P值均大于0.95。结论第1～第3代细胞培养风疹病毒与第0代相比,可获得相同滴度的病毒培养物,p3代兔肾细胞应用于疫苗生产可显著提高细胞及病毒产量。

剖析狂犬病（六）狂犬病疫苗使用须知

狂犬病疫苗是预防狂犬病的有力武器。随着科学技术的发展，狂犬病疫苗的种类不断更新，产品质量也不断提高。目前，我国生产的狂犬病疫苗主要是：原代地鼠肾细胞疫苗和Vero细胞（非洲绿猴肾细胞的传代细胞）疫苗。由于原代地鼠肾细胞疫苗时常出现一些过敏反应，导致个别患者无法完成全程注射，因此又开发出了纯化地鼠肾细胞佐剂疫苗和纯化地鼠肾细胞无佐剂疫苗。

广西应用原代地鼠肾细胞狂犬病疫苗效果研究

目的总结广西壮族自治区１６年（１９８０～１９９５年）应用原代地鼠肾细胞狂犬病疫苗的保护效果，观察浓缩疫苗和建立犬伤门诊的加强保护作用。方法对各地上报疫情资料进行汇总核实，并进行现场流行病学调查和疫苗接种抗体水平的测定。结果随着增加接种疫苗量、普遍建立犬伤门诊、及时处理伤口和应用浓缩疫苗，狂犬病发病率由１９８１年的２４６／１０万，下降到１９９５年的００４／１０万。结论原代地鼠肾细胞疫苗有良好保护作用，初期伤口的处理及应用浓缩疫苗，可加强保护效果。浓缩疫苗保护效果虽较好，仍是粗制品，为避免过敏原的副作用，建议加强纯化疫苗的研究和应用。