超声造影评价右美托咪定对兔肾缺血/再灌注损伤时微循环灌注的影响

目的应用超声造影定量分析技术评价右美托咪定(DEX)对兔肾缺血/再灌注(I/R)损伤时微循环灌注的影响。方法新西兰家兔24只随机分成3组(每组8只):对照组、肾缺血/再灌注损伤组(I/R组)和右美托咪定组(DEX组)。I/R组和DEX组切除右肾建立左肾缺血再灌注损伤模型。DEX组在肾缺血前30 min腹腔注射10μg/kg右美托咪定。再灌注24 h后,测定肾脏大小和肾血流阻力(RI),超声造影观察肾皮质灌注,时间-强度曲线定量分析达峰时间(TTP)、峰值强度(PSI)、曲线上升斜率(Grad)和曲线下面积(AUC)。取肾脏观察病理改变。结果与对照组比较,I/R组和DEX组肾大小和病理改变明显,RI增高,TTP延长,PSI和Grad降低,AUC显著增加(P<0.05);与I/R组比较,DEX组肾大小和病理改变明显改善,RI降低,TTP缩短,PSI和Grad增高,AUC减少(P<0.05)。结论超声造影结合时间-强度曲线参数能动态定量分析右美托咪定改善兔肾缺血/再灌注损伤时的微循环灌注。

改构型酸性成纤维细胞生长因子对大鼠肾缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨改构型酸性成纤维细胞生长因子(modified aFGF,MaFGF)对大鼠肾缺血/再灌注损伤的影响。方法Wistar大鼠32只,随机分为4组,即假手术组、模型组、MaF-GF1组(8μg.kg-1)和MaFGF2组(16μg.kg-1),每组8只。以肾缺血/再灌注损伤为模型,通过光、电镜观察肾组织病理变化。结果MaFGF能明显减轻肾组织水肿、间质浸润以及肾小管扩张与破坏,电镜下见肾小管上皮细胞内细胞器(微绒毛、线粒体、溶酶体等)损伤较轻或基本正常。结论MaFGF对大鼠肾缺血/再灌注损伤有一定的保护作用。

汉黄芩苷对肾缺血/再灌注损伤大鼠肾功能及NF-κB/iNOS/NO通路的影响

目的观察汉黄芩苷对肾缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠肾功能及对NF-κB/iNOS/NO通路的影响并探讨其机制。方法制备肾I/R模型大鼠,按随机数字表法分为模型组、乌司他丁组及汉黄芩苷低(5 mg/kg)、中(25 mg/kg)、高(75 mg/kg)剂量组,模型组及假手术组给予等量0.9%氯化钠注射液灌胃。再灌注后24 h,检测各组大鼠肾功能,苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织病理学变化,试剂盒检测肾组织中过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(iNOS)活性、还原性谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量及一氧化氮(NO)水平,蛋白印迹(WB)法检测肾组织中NF-κB表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠肾功能显著下降,血液中血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)含量显著升高,肾组织出现肾小管上皮细胞水肿、脱落、小管腔坏死等病理变化,组织病理评分明显升高,CAT、SOD、GSH活性显著下降,MDA含量显著升高,NF-κb蛋白核转移水平明显增加,iNOS活性、NO水平显著增高;与模型组比较,汉黄芩苷低、中、高剂量组大鼠肾功能均明显恢复,肾组织病理变化均显著改善,组织病理评分显著降低,CAT、SOD、GSH活性显著升高,MDA含量显著下降,NF-κb蛋白核转移水平明显减少,iNOS活性、NO水平显著降低,均呈剂量依赖效应(均P<0.05)。结论汉黄芩苷具有提高肾功能,保护缺血/再灌注所致肾损伤的功能,其机制可能是通过抑制氧化应激反应和NF-κB/iNOS/NO通路的激活而实现。

中华眼镜蛇毒对肾缺血/再灌注损伤保护机制的实验研究

目的:探讨中华眼镜蛇毒(CCV)对大鼠肾缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用及其机制。方法:雄性SD大鼠55只,随机分为实验组(25只)、对照组(25只)和假手术组(5只)。实验组与对照组分别腹腔注射0.1%的CCV(0.4mg/kg)和1ml的生理盐水,12h后建立肾I/R损伤模型,按处死时间不同又分为5个亚组,每组5只;假手术组单纯分离双肾动脉。按设计时间点留取血清。观察各组血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)、髓过氧化物酶(MPO)、补体C3和C4的变化。结果:肾I/R损伤后,对照组Scr和BUN显著升高,再灌注12h后达正常值5倍以上,MPO水平上调,补体C3水平先升高后降低,1h组与假手术组相比有统计学差异(P<0.05),补体C4水平变化不大。经CCV预处理的实验组,Scr、BUN和MPO值明显下降,补体C3水平低于假手术组,C4水平变化不大。结论:CCV预处理可明显减少补体C3和MPO的活化,改善肾功能。

瑞芬太尼通过激活PI3K/Akt/eNOS通路减轻肾缺血/再灌注损伤

目的探讨术中应用瑞芬太尼对肾缺血/再灌注损伤的作用及机制。方法取雄性C57/BL小鼠50只,随机分为5组:假手术组、缺血/再灌注损伤组(I/R组)、缺血/再灌注损伤+磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002处理组(I/R+LY294002组)、缺血/再灌注损伤+瑞芬太尼处理组(I/R+RF组)、缺血/再灌注损伤+LY294002处理+瑞芬太尼处理组(I/R+RF+LY294002组),每组10只。各组大鼠分别于手术结束6 h后取静脉血或肾脏组织,采用全自动生化分析仪测定静脉血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)水平,采用蛋白质印迹法检测肾脏组织PI3K/蛋白激酶B(Akt)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)通路相关蛋白的表达,H-E染色观察肾脏组织炎症细胞聚集情况,酶联免疫吸附试验测定肾脏组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10等炎性因子的表达,实时定量PCR测定肾脏组织中抗凋亡因子Bcl2和凋亡因子半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的mRNA表达。结果与假手术组相比,I/R组小鼠静脉血BUN、SCr水平均升高,肾脏组织中PI3K表达及磷酸化Akt(p-Akt)/Akt、磷酸化eNOS(p-eNOS)/eNOS均降低,炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10释放均增加,Bcl2 mRNA表达下降而Caspase-3 mRNA表达增高,差异均有统计学意义(P均<0.05),并且肾脏组织中炎症细胞聚集增多。给予瑞芬太尼处理后,I/R+RF组BUN、SCr水平较I/R组降低,肾脏组织中PI3K表达及p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS均增高,TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10释放均减少,Bcl2 mRNA表达上调、Caspase-3 mRNA表达下调,与I/R组相比差异均有统计学意义(P均<0.05),炎症细胞募集也减轻。而使用PI3K抑制剂LY294002处理后,I/R+RF+LY294002组BUN、SCr水平升高,肾脏组织中p-eNOS/eNOS降低,IL-1β、L-6释放增加,Caspase-3 mRNA表达上调,与I/R+RF组相比差异均有统计学意义(P均<0.05),炎症细胞募集也增加。结论肾缺血/再灌注损伤时,瑞芬太尼通过激活PI3K/Akt/eNOS通路减轻肾脏组织炎症反应和细胞凋亡发挥肾脏保护作用。

表观遗传学在肾缺血/再灌注损伤中的研究进展

肾缺血/再灌注(I/R)损伤是急性肾损伤和肾移植的病理基础。近年来随着对肾I/R损伤研究的不断深入发现,表观遗传修饰在肾I/R损伤的发生、发展过程中起重要作用。补体C3启动子发生DNA异常甲基化,抑制组蛋白甲基化和乙酰化转移酶具有肾保护作用,微RNA的不同表达与肾损伤和修复有关,长链非编码RNA可作为判断肾I/R损伤和预后的标志物,影响炎症反应及氧化应激损伤。未来,深入研究表观遗传修饰与肾I/R损伤发生、发展的关系,可能为肾I/R损伤的预防、诊断及治疗提供新的思路,保护肾功能。

热休克蛋白70在大鼠肾缺血/再灌注损伤中的表达及血必净注射液干预作用的研究

目的观察急性肾缺血/再灌注(I/R)热休克蛋白70(HSP70)的表达规律,及中药血必净注射液对肾I/R损伤的保护作用机制,探索药物诱导机体产生HSP70的可行性。方法普通级雌性SD大鼠108只,体重(200±20)g,随机分为3组:正常对照组(A组);模型组(B组)于手术前5～10 min从股静脉注射生理盐水5 ml/kg;活血化瘀中药组(C组)于手术前5～10 min从股静脉注射血必净注射液5 ml/kg,各组再分为再灌注0、6、12、24、36和48 h 6个亚组,每个亚组6只。于各时间点取血测血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN);一侧肾组织用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测HSP70表达;另一侧肾组织用于苏木素-伊红(HE)染色及免疫组化检测。结果B组与C组SCr和BUN于再灌注6h起均显著高于A组,C组低于B组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),表明血必净注射液有对抗肾I/R损伤并保护肾功能的作用。Western blotting扫描及免疫组化结果显示,C组HSP70表达在再灌注12h较B组提前达到高峰,表明血必净注射液诱导HSP70表达提前达高峰,发挥保护作用。结论血必净注射液通过刺激HSP70提前表达并显著升高,引发了内源性肾脏保护机制,为临床上早期预防急性肾功能衰竭发生和寻找肾I/R损伤的药物治疗提供重要的理论依据。

丹参酮ⅡA保护大鼠肾移植术后缺血再灌注损伤的机制研究

目的观察丹参酮ⅡA对大鼠同种异体肾移植术后肾脏保护性因子Klotho基因和氧化应激对肾功能等的影响,分析其对肾缺血/再灌注损伤的保护作用机制。方法 SD大鼠48只,分为假手术组、缺血/再灌注组、丹参酮A组和B组,采用同种异体左肾移植手术。术后丹参酮A、B组分别用5%和10%丹参酮按5 m L/kg灌胃治疗7 d,假手术组和缺血/再灌注组按5 m L/kg体积分别灌服生理盐水。采用RT-PCR法检测肾组织Klotho基因表达,从尾静脉采血测定4组大鼠肾功能:肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、胱抑素C(Cys C)]指标。检测肾组织匀浆中氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)和血清丙二醛(MDA)。结果丹参酮A组和B组大鼠肾移植术后BUN、Cr、Cys C显著降低,肾组织匀浆中MDA降低、SOD提高,Klotho蛋白和lotho-m RNA明显上调,与缺血/再灌注组比较,P<0.05。丹参酮A组和B组组间比较,P>0.05。结论丹参酮ⅡA在肾移植术后可提高SOD活性、抑制MDA的产生,上调Klotho蛋白和lotho-m RNA表达,抑制肾小管上皮细胞凋亡而达到肾缺血/再灌注损伤的保护作用。

hexarelin预处理对小鼠肾脏缺血/再灌注损伤的保护作用

目的研究生长激素释放肽(GHRP)家族成员hexarelin是否对肾缺血-再灌注损伤具有保护作用及其可能机制。方法在体情况下结扎C57BL6/J小鼠左侧肾动脉主干2h、松扎0.5h造成急性全肾缺血/再灌注损伤。hexarelin预处理组于结扎肾动脉前2h给予小鼠皮下注射hexarelin(100μg/kg);单纯肾缺血/再灌注组用生理盐水替代hexarelin;正常对照组仅给予假手术而不结扎肾动脉。肾组织切片TTC染色鉴定肾缺血/再灌注损伤面积。苏木精-伊红染色观察肾组织微观损伤情况。测定肾组织丙二醛(MDA)及总抗氧化能力(T-AOC)含量以判断氧化应激情况。结果与单纯肾缺血/再灌注组相比,hexarelin预处理使肾缺血/再灌注损伤面积平均减小约49%(P<0.01);同时,肾缺血/再灌注导致肾组织丙二醛水平升高及总抗氧化能力降低,而hexarelin预处理则可明显改善由缺血/再灌注导致的MDA升高和T-AOC降低。结论 hexarelin对肾缺血/再灌注损伤具有明显的保护作用,其可能机制可能与降低肾组织氧化应激水平并提高总抗氧化能力有关。

丙酮酸乙酯对肾缺血/再灌注损伤小鼠炎症因子及丝裂素活化蛋白激酶表达的影响

目的 观察丙酮酸乙酯（EP）对小鼠缺血/再灌注（I/R）损伤肾脏的保护作用,研究其对肾组织中炎症因子及丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）信号通路相关蛋白表达的影响. 方法 将50只雄性BABL/c小鼠按随机数字表法分为假手术组（n=8）、模型组（n=10）和EP治疗组（n=32）;EP治疗组再分为EP预处理组和EP 4、6、12 h处理组,每组8只,分别于制模前30 min及制模后4、6、12 h腹腔注射EP 40 mg/kg.采用夹闭双肾动脉30 min制备肾I/R损伤模型.于I/R 24 h取肾组织,采用实时聚合酶链反应（PCR）检测白细胞介素（IL-1β、IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、高迁移率族蛋白B1（HMGB1）的mRNA表达;采用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测MAPK信号转导通路中细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）、c-Jun氨基末端蛋白激酶（JNK）、p38MAPK等的蛋白表达. 结果 实时PCR结果显示,与假手术组比较,模型组小鼠肾组织IL-1β、IL-6、TNF-α、ICAM-1及HMGB1的mRNA表达均显著增高（IL-1β：12.05±8.08比3.18±1.13;IL-6：10.26±6.85比0.81±0.34;TNF-α：5.83±3.85比0.67±0.34;ICAM-1：3.87±2.02比0.29±0.13;HMGB1：652.82±78.50比112.31±32.50,均P＜0.05）;而EP各处理组能显著抑制上述炎症因子的表达,尤其以12 h处理组最为显著,分别为0.45±0.26、 0.66±0.13、 0.21±0.11、 0.05±0.02、 212.26±3.20（均P＜0.05）.Western blotting结果显示,与假手术组比较,模型组小鼠肾组织磷酸化的ERK1/2、JNK、p38MAPK蛋白表达均显著升高（p-ERK1/2：1.13±0.38比0.48±0.34;p-JNK：1.40±0.15比0.36±0.15;p-p38MAPK：0.47±0.15比0.21±0.17,均P＜0.05）;与模型组比较,EP各处理组在不同时间点均能显著抑制ERK1/2、JNK、p38MAPK的活化（均P＜0.05）. 结论 EP能有效防治小鼠I/R肾脏损伤,可能与其调控炎症相关因子及MAPK信号转导的表达有关.

解耦联蛋白2在漆黄素保护肾缺血/再灌注损伤中的作用及机制

目的研究解耦联蛋白2(UCP-2)在漆黄素保护肾缺血/再灌注损伤中的作用及机制。方法6~8周的雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(n=6)、缺血/再灌注组(n=6)、缺血/再灌注+漆黄素组(n=6)。将人肾小管上皮(HK-2)细胞分别进行缺氧/复氧及缺氧/复氧+漆黄素处理(n=3)。检测血肌酐、尿素氮水平。苏木素-伊红及过碘酸雪夫染色观察肾脏病理损伤并统计损伤指数;二氢乙啶超氧化物阴离子探针检测组织氧化应激水平。检测HK-2细胞丙二醛水平以及还原型谷胱甘肽与氧化型谷胱甘肽比值(GSH/GSSG)以评估细胞内氧化应激水平;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)评估细胞凋亡情况;亲脂性羰花青荧光探针(JC-1)检测线粒体膜电位;实时荧光定量聚合酶链式反应(q-PCR)检测解耦联蛋白2(UCP-2)mRNA表达水平;免疫印迹检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)、前体和激活型半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)以及UCP-2的蛋白表达水平。结果与缺血/再灌注组相比,缺血/再灌注+漆黄素组的血肌酐[(48.7±4.4)比(162.1±4.3)μmol/L,P<0.05]、尿素氮[(13.7±0.6)比(25.6±0.6)mmol/L,P<0.05]以及损伤指数(2.0±0.3比3.3±0.2,P<0.05)明显降低,凋亡细胞明显减少(P<0.05),Bcl-2表达升高、BAX与激活型Caspase-3表达降低(均P<0.05)。二氢乙啶染色提示,与缺血/再灌注组相比,缺血/再灌注+漆黄素组氧化应激水平明显降低(P<0.05)。在HK-2细胞中,与缺氧/复氧处理相比,缺氧/复氧+漆黄素处理的细胞中丙二醛水平明显下降(P<0.05)、GSH/GSSG上升(P<0.05)、线粒体膜电位上升(P<0.05)。在HK-2细胞中,与缺氧/复氧处理相比,给予缺氧/复氧+漆黄素处理的细胞UCP-2蛋白(0.7±0.1比0.5±0.1,P<0.05)与mRNA(0.7±0.2比0.2±0.1,P<0.05)的相对表达量均上调;动物模型中,与缺血/再灌注组相比,缺血/再灌注+漆黄素组UCP-2蛋白(0.8±0.1比0.4±0.2,P<0.05)与mRNA表达量(0.8±0.2比0.2±0.1,P<0.05)上升。结论漆黄素保护肾缺血/再灌注损伤导致的线粒体功能障碍与UCP-2的表达上调有关。

冬虫夏草提取液对大鼠实验性肾脏缺血/再灌注后VEGF及肾功能影响

目的 建立大鼠肾缺血/再灌注损伤的动物模型,观察冬虫夏草（CS）提取液对其血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达及肾功能的影响.方法 大鼠60只,随机分为缺血/再灌注组、CSA、B组,手术摘除大鼠右肾,夹闭左动脉45min后再灌注45min,反复3次,建立大鼠肾缺血/再灌注损伤的动物模型,另设空白对照对照组（n=15）,术后CS A、B组采用CS提取液灌胃治疗21d,缺血/再灌注组、对照组灌等量生理盐水.观察各组动物治疗期间活动能力并计算病死率,采用EUSA法测定治疗前后大鼠肾脏组织VEGF及VEGF mRNA表达、血清白介素-8（IL-8）、肌酐（SCr）、胱抑素C（Cys C）及尿素氮（BUN）水平.结果 CSA、B组病死率明显低于缺血再灌注组,肾脏组织VEGF及VEGF mRNA表达均上调,血清IL-8、SCr、Cys C及BUN明显下降,与缺血/再灌注组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）,A、B两组间各指标无显著性差异（p＞0.05）.结论 CS可以上调肾缺血/再灌注损伤模型大鼠VEGF,促进血管新生及肾功能恢复,减轻肾脏血管内皮炎症反应,清除血清Cys C、Cr、BUN进而改善肾功能,对大鼠实验性肾缺血/再灌注损伤有保护作用.