荧光探针法测定原代培养家兔肾脏内髓集合管细胞内pH

目的：建立稳定的原代培养肾脏内髓集合管（ Ｉｎｎｅｒ ｍ ｅｄｕｌｌａｒｙ ｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇ ｄｕｃｔ， Ｉ Ｍ Ｃ Ｄ）细胞的ｐ Ｈｉ测定方法，为进一步研究 Ｉ Ｍ Ｃ Ｄ细胞功能奠定基础。方法：将家兔肾脏 Ｉ Ｍ Ｃ Ｄ细胞用盖玻片培养成细胞单层，制备 Ｉ Ｍ Ｃ Ｄ细胞ｐ Ｈｉ标准曲线，然后测定 Ｉ Ｍ Ｃ Ｄ细胞的 Ｂ Ｃ Ｅ Ｃ Ｆ／ Ａ Ｍ 的荧光强度比值（ Ｆ Ｉ Ｒ），进而将 Ｆ Ｉ Ｒ转换为 Ｉ Ｍ Ｃ Ｄ细胞的ｐ Ｈｉ。结果：本实验观察到 Ｉ Ｍ Ｃ Ｄ细胞的 Ｆ Ｉ Ｒ在ｐ Ｈ ６．８～７．８ 范围内呈显著正相关，回归方程为 Ｙ＝ ０．８４８±１．０８９ Ｘ（ｒ＝ ０．９８８， Ｐ ＜ ０．０１）。１５ 份标本的ｐ Ｈｉ结果为７．２５５±０．０３０，与 Ｍａｎｋｕｓ等报告的结果最接近。结论：以上结果表明 Ｂ Ｃ Ｅ Ｃ Ｆ／ Ａ Ｍ 荧光探针法测定 Ｉ Ｍ Ｃ Ｄ细胞的ｐ Ｈｉ，具有简单、可靠、经济等优点， Ｉ Ｍ Ｃ Ｄ细胞ｐ Ｈｉ测定是研究 Ｉ Ｍ Ｃ Ｄ细胞功能的基础测定之一。

禁水大鼠肾脏与尿液水通道蛋白2表达的改变及意义

目的 研究禁水大鼠肾脏及其尿液AQP2 (aquaporin2 )水通道蛋白量的改变 ,阐明尿液AQP2蛋白与抗利尿激素 (ADH)的关系及其在监测机体水平衡中的作用。方法本实验通过建立禁水大鼠模型 ,用免疫组化和Western印迹分析法测定肾脏内髓及尿液AQP2的含量 ,并比较禁水组大鼠尿液AQP2含量与对照组的差别。结果禁水组大鼠肾脏AQP2蛋白表达量较正常对照组明显增加 ,且AQP2蛋白可在尿液中检测到 ,禁水时尿液AQP2含量明显增多 (P <0 0 1)。结论AQP2是机体缺水时维持机体水平衡的关键蛋白质之一 ,检测尿液AQP2含量是监测机体重吸收状况的一种较好的方法。

利拉鲁肽对2型糖尿病大鼠降血压、利水盐的作用机制探讨

目的通过观察胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物利拉鲁肽对2型糖尿病大鼠肾脏内髓一氧化氮合酶(NOS)、环加氧酶2(COX2)表达的影响,探讨利拉鲁肽降血压和利水盐的作用机制。方法 30只雄性SD大鼠给予高糖高脂饲料喂养,自由摄水,8周后空腹注射链脲佐菌素(STZ),成功建立2型糖尿病大鼠模型18只,选取12只随机分为利拉鲁肽处理2型糖尿病模型(DMT)组和2型糖尿病模型(DM)组,另取12只正常大鼠随机分为利拉鲁肽处理野生型大鼠(WTT)组和野生型大鼠对照(WT)组,每组6只。DMT和WTT组每天予以利拉鲁肽(200μg/kg体质量)皮下注射,DM和WT组每天予以等量生理盐水皮下注射,各组分别在给药后0、2、4、6周检测血糖和血压,给药后6周收集尿液检测K、Na、Cl离子浓度,然后处死大鼠,收集血液检测血K、Na、Cl离子浓度,取肾组织通过Real-timePCR和Western blot检测肾脏内髓NOS和COX2的m RNA和蛋白表达水平。结果利拉鲁肽干预后,DMT组大鼠血糖(F=5.933,P<0.05)及血压(F=22.070,P<0.05)随时间变化逐渐降低。在干预6周后,DMT组大鼠血糖(mmol/L:12.78±3.82 vs.18.75±1.68)和血压(mm Hg:119.98±4.43 vs.136.42±4.48)较DM组均明显降低(P<0.05),血液中K、Na、Cl离子浓度与DM组相比无明显差异,但尿液中K(mmol/L:46.55±6.43 vs.33.13±9.71)、Na(mmol/L:56.33±8.83vs.41.20±7.25)、Cl(mmol/L:159.81±25.06 vs.71.44±12.99)离子浓度高于DM组大鼠(P<0.05),且肾脏内髓NOS、COX2的m RNA和蛋白表达均高于DM组大鼠(P<0.05)。结论利拉鲁肽可能通过NOS诱导COX2的表达增强,发挥利水盐、降血压的作用。

苦参碱通过MAPK/mTOR信号通路诱导IMCD3细胞自噬及机制研究

目的:通过观察苦参碱对小鼠肾脏内髓集合管上皮细胞(IMCD3)自噬的影响,探讨苦参碱诱导细胞自噬可能的分子机制。方法:在小鼠IMCD3中加入不同浓度的苦参碱(0.2、0.4、0.8、1.6 mg/ml),检测苦参碱对细胞活性、细胞的凋亡以及细胞自噬的影响;采用Western blot检测自噬相关的蛋白LC3、ERK、p-ERK、p53、Beclin-1、p70S6K、p-p70S6K、AKT、p-AKT表达水平的变化。结果:当苦参碱浓度为0、0.2、0.4、0.8 mg/ml时,IMCD3活性以及凋亡坏死没有明显变化,当苦参碱浓度为1.6 mg/ml时,细胞凋亡坏死明显增加;苦参碱处理后,细胞中自噬小体的数量明显增加;随着苦参碱处理浓度的增加,细胞中LC3蛋白表达明显升高,p-ERK、p-p70S6K表达明显减弱,ERK、p70S6K、p53、Beclin-1、AKT和p-AKT等蛋白表达无明显变化。结论:苦参碱可通过抑制MAPK/mTOR信号通路的活化促进小鼠IMCD3的自噬。