罗格列酮对同型半胱氨酸诱导大鼠肾脏微血管内皮细胞MCP-1和ICAM-1表达的影响

目的了解同型半胱氨酸（Hcy）对肾脏微血管内皮细胞（RMECs）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）和细胞间黏附分子1（ICAM-1）表达的影响及罗格列酮的干预作用。方法将原代培养的大鼠RMECs分为空白对照组、Hcy刺激组和罗格列酮干预组。分别采用免疫荧光法和酶联免疫吸附试验检测RMECs表达MCP-1、ICAM-1的能力。结果不同浓度的Hcy刺激后，ICAM-1的水平显著增加（P〈0.05），且呈时间和剂量依赖性，尤其在0.1 mmol/L Hcy刺激24～48 h时达高峰。罗格列酮干预后ICAM-1含量显著降低，且随罗格列酮浓度的增加其抑制作用更加明显；0.1 mmol/L的罗格列酮干预24h后，ICAM-1的水平与空白对照组比较，差异无统计学意义（P（0.05）；MCP-1荧光强度在罗格列酮干预后也减弱。结论罗格列酮能抑制Hcy诱导的RMECs表达MCP-1和ICAM-1。

津力达联合通心络减轻高糖环境下肾脏微血管内皮细胞内质网凋亡

目的:观察津力达联合通心络对高糖环境下肾脏微血管内皮细胞内质网凋亡途径的影响,探讨其减轻肾脏微血管内皮细胞损伤的作用机制。方法:将体外培养的肾脏微血管内皮细胞分为正常对照组、高糖组、通心络组、津力达组和通心络+津力达组。干预24 h后,CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率和活性氧簇(ROS)水平。Western blot检测蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、磷酸化PERK(p-PERK)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、caspase-12和Bcl-2的蛋白水平。结果:与正常对照组比较,高糖环境下肾脏微血管内皮细胞活力降低,细胞凋亡率增加,ROS生成增多,PERK、p-PERK、GRP78、CHOP和caspase-12的蛋白水平升高,而Bcl-2的蛋白水平下降(P<0.05)。与高糖组比较,通心络、津力达和通心络+津力达均能不同程度地增强高糖环境下肾脏微血管内皮细胞活力,减少细胞凋亡和ROS生成,抑制PERK、p-PERK、GRP78、CHOP和caspase-12蛋白的水平,提高Bcl-2蛋白的水平(P<0.05)。与津力达组和通心络组比较,通心络+津力达组各指标的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:津力达和通心络均能够减轻高糖环境下肾脏微血管内皮细胞损伤,其机制与减轻内质网应激介导的凋亡途径有关;两者联合应用能够协同增强肾脏微血管内皮细胞保护作用。

肝素通过下调脂多糖诱导的NO和活性氧表达保护肾脏微血管内皮细胞

目的 观察肝素对脂多糖(LPS)刺激肾脏微血管内皮细胞(RMVECs)形态学改变及一氧化氮(NO)和活性氧(ROS)表达的影响.方法 采用三步梯度筛网法原代培养大鼠RMVECs,取长势优异的3~4代细胞进行实验,并分为空白对照组、10 mg/L LPS处理组和2.5、5、10 kU/L肝素预处理组(LPS刺激前0.5 h给予相应剂量肝素干预).透射电镜下观察LPS刺激24 h细胞形态学改变;于LPS刺激5、15、30、45 min采用免疫荧光法检测RMVECs内ROS表达;采用硝酸还原酶法检测RMVECs内NO生成情况.结果 ① 空白对照组RMVECs细胞膜完整,细胞内线粒体和内质网清晰可见,核膜完整,核仁明显.LPS刺激24 h后,RMVECs细胞器空泡变性明显,以线粒体为主,且细胞膜产生大量微粒体.经10 kU/L肝素预处理后,细胞器空泡变性明显减轻,细胞膜形态稳定.② LPS刺激5 min即可在RMVECs细胞内检测到ROS表达和NO生成明显增加,并随时间延长逐渐增加,ROS表达30 min达峰值,NO生成45 min达峰值,与空白对照组同期比较差异均有统计学意义〔30 min ROS(平均荧光值):76.2±5.8比1.5±0.1,45 min NO(μmol/L):70.3±8.6比1.8±0.1,均P<0.01〕.随肝素剂量增加,预处理RMVECs后细胞内ROS表达及NO生成逐渐减少,以10 kU/L作用最明显,与LPS处理组同期比较差异均有统计学意义〔30 min ROS(平均荧光值):16.8±1.7比76.2±5.8,45 min NO(μmol/L):11.8±8.6比70.3±8.6,均P<0.01〕.结论 肝素可通过下调LPS诱导的NO、ROS表达和稳定细胞形态发挥保护肾脏内皮细胞的作用,以10 kU/L作用最明显.

miR-24-3p/S1PR2信号轴对大鼠RMECs损伤的作用与机制研究

目的研究miR-24-3p/1-磷酸鞘氨醇受体2(S1PR2)信号轴对肾小球内皮细胞(RMECs)损伤的作用及影响机制。方法原代分离获得大鼠RMECs,制备急性肾损伤(AKI)模型。采用CCK8检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况、活性氧(ROS)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β的表达;生化试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;实时荧光定量PCR检测细胞中S1PR2(NM_017192.2)的mRNA表达水平,Western blot检测S1PR2和凋亡相关基因caspase-3和caspase-9、血管内皮细胞损伤相关因子细胞分裂周期蛋白20(CDC20)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平。结果LPS组TNF-α、IL-1β水平高于control组,miR-24-3p inhibitor+LPS组TNF-α、IL-1β水平高于inhibitor NC+LPS组,差异有统计学意义(P<0.05)。LPS组MDA、SOD水平高于control组,miR-24-3p inhibitor+LPS组MDA水平高于inhibitor NC+LPS组,但SOD水平低于inhibitor NC+LPS组,差异有统计学意义(P<0.05)。LPS组S1PR2 mRNA表达水平高于control组,miR-24-3p inhibitor+LPS组S1PR2 mRNA表达水平低于inhibitor NC+LPS组,差异有统计学意义(P<0.05)。LPS组S1PR2、caspase-9、caspase-3蛋白表达水平高于control组,CDC20、VEGF蛋白表达水平低于control组,差异有统计学意义(P<0.05);miR-24-3p inhibitor+LPS组S1PR2、caspase-3、caspase-9蛋白表达水平低于inhibitor NC+LPS组,CDC20、VEGF蛋白表达水平高于inhibitor NC+LPS组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-24-3p inhibitor通过联动抑制S1PR2表达,下调caspase-3、caspase-9表达,上调CDC20、VEGF表达,实现抑制TNF-α、IL-1β与MDA表达、降低AKI模型对细胞造成损伤的作用。