乙酰唑胺对大鼠肾脏近曲小管上皮细胞作用的差异蛋白分析及其与AQP1抑制的关系

目的 研究乙酰唑胺抑制大鼠肾脏近曲小管上皮细胞水孔蛋白 1(aquaporin 1,AQP1)表达的内源性机制。方法 将原代培养的大鼠肾脏近曲小管上皮细胞分为两组 ,一组给予 1× 10 - 5mol·L- 1 乙酰唑胺 ,另一组为阴性对照。待细胞长至亚融合状态时裂解细胞 ,用等电聚焦电泳对裂解物进行差异蛋白筛选 ,并对差异蛋白作肽质量指纹谱鉴定。结果 给乙酰唑胺后细胞中出现两个差异蛋白 ,其中等电点 (pI)为 3 8的蛋白给药后的表达减少 ,数据库检索发现其氨基酸序列与来源于大鼠肝脏和睾丸的刷状缘肌球蛋白有 2 1 4 %的相似性 ;而与来源于大鼠脑的糖原磷酸化酶有 2 7%相似性。另外一条pI为 5 5的蛋白被诱导增多 ,它与来源于大鼠肺脏的α亚型磷脂酰肌醇转移蛋白的相似性为 2 0 %。结论 乙酰唑胺可能通过影响pI 3 8蛋白或pI5

六味地黄丸对肾脏近曲小管超微结构作用的定量研究

六味地黄丸具有滋阴补血,强壮身体的功能。对服用六味地黄丸的大鼠肾近曲小管上皮细胞用透射电镜技术、电脑图像分析技术和立体学方法定量计算溶酶体的形态参数后发现:(1)服用六味地黄丸后细胞生成溶酶体的速度明显加快,溶酶体的个数比对照组增多57%,单位细胞体积内溶酶体的表面积比增大;(2)服药后细咆内溶酶体占细胞体积的百分比与对照组接近,不受服药的影响。由于上述(1)使溶酶体在胞浆内的个体密度以及表面积增加,从而提高了细胞的解毒速度并改善了肾功能。

AT_2受体通过NO途径降低肾脏近曲小管AT_1受体表达

目的研究AT2受体激动剂CGP42112对肾脏近曲小管上皮细胞(RPT)AT1受体表达的影响及其作用机制。方法以WKY(Wistar-Kyoto)大鼠的RPT细胞株为研究对象,采用免疫印迹法测定AT2受体激动剂CGP42112对AT1受体蛋白表达的影响,RT-PCR检测AT1受体mRNA表达水平的改变,硝酸还原酶法检测一氧化氮(nitric oxide,NO)含量。结果 AT2受体激动剂CGP42112 10-7mol/L作用24 h可以明显抑制WKY大鼠RPT细胞AT1受体的蛋白与mRNA表达水平(P<0.05)。CGP42112对AT1受体表达的抑制作用可被AT2受体特异性拮抗剂PD123319(10-6mol/L)所阻断。与对照组比较,CGP42112刺激RPT细胞30 min后,NO的合成含量明显升高;NO合成酶抑制剂L-NAME(10-4mol/L)可以阻断CGP42112对AT1受体表达的抑制效应。结论 AT2受体能够抑制WKY大鼠RPT细胞AT1受体的表达水平,该作用可能与NO途径有关。

多巴胺D3受体对肾脏近曲小管上皮细胞D5受体的影响在高血压发生中的作用

目的观察多巴胺 D_3受体对肾脏近曲小管(RPT)上皮细胞上多巴胺 D_3受体表达和功能的影响。方法以 Wistar-Kyoto(WKY)大鼠与自发性高血压大鼠(SHR)为研究对象,利用免疫印迹法观察 D_3受体对 D_5受体蛋白表达的影响;并采用 Na^+-K^+-ATP 酶活性测定方法在转染 D_5受体的人胚肾293细胞(HEK293-D_5)上观察D_3受体对 D_5受体影响的病理生理学意义。结果刺激 D_3受体可增强 D_5受体的蛋白表达,该作用呈浓度和时间依赖性;同时能被 D_3受体特异性阻断剂所阻断;在高血压状态下,这种作用受损。刺激 D_5受体可抑制 Na^+-K^+-ATP 酶的活性,在预先刺激 D_3受体的情况下可使 D_5受体对 Na^+-K^+-ATP 酶活性的抑制作用进一步增强。结论D_3受体对肾脏近曲小管上皮细胞上 D_5受体的表达和功能具有促进作用,这种作用的受损可能在原发性高血压的发生发展中具有一定影响。

内皮素B受体对自发性高血压大鼠肾脏近曲小管上皮细胞多巴胺D3受体的异常调节

目的探讨内皮素 B(ETB)受体对肾脏近曲小管上皮细胞多巴胺 D_3受体表达的影响,以及其与高血压(EH)发生之间的关系。方法以 Wistar-Kyoto(WKY)大鼠和自发性高血压大鼠(SHR)肾脏近曲小管上皮细胞(RPT)株为研究对象,观察刺激 ETB 受体后 D_3受体蛋白表达的变化,D_3受体的蛋白表达采用免疫印迹测定,ETB/D_3受体之间的连接采用免疫沉淀测定。结果 ETB 受体激动剂 BQ3020可增加 WKY 大鼠 RPT 细胞 D_3受体的蛋白表达,该作用呈现出时间依赖性和剂量依赖性关系,而且 BQ3020对 D_3受体蛋白表达的刺激作用可以被D_3受体拮抗剂 BQ788所抑制。在 SHR 细胞,ETB 受体激动剂 BQ3020并不能增加 RPT 细胞 D_3受体的蛋白表达,并且基础状态下 D_3受体的蛋白表达在 SHR 细胞明显低于 WKY 细胞。免疫共沉淀显示在 ETB/D_3受体之间存在同连接,刺激 ETB 受体可增加 ETB/D_3受体之间的连接程度,然而,在 SHR 细胞,不仅基础状态下 ETB/D_3受体之间的连接程度低,而且,刺激 ETB 受体对 ETB/D_3受体之间的连接程度无影响。结论 ETB 受体具有对 D_3受体蛋白表达的调节作用,ETB/D_3受体之间的异常调节可能参与了 EH 发生的发病机制。

AT2受体对自发性高血压大鼠肾脏近曲小管上皮细胞AT1受体表达与功能的影响

目的研究AT2受体激动剂CGP42112对自发性高血压大鼠(SHR)肾脏近曲小管上皮(RPT)细胞AT1受体的表达及功能的影响。方法以RPT细胞株作为研究对象,采用不同浓度AT2受体激动剂CGP42112(10-9～10-7 mol/L)作用24h或同一浓度CGP42112(10-7 mol/L)作用不同时间(8、16、24h),应用Western blotting和RT-PCR法检测AT1受体蛋白和mRNA表达的改变。采用CGP42112(10-7 mol/L)预先作用24h,观察其对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下Na+-K+-ATP酶活性的影响;比较CGP42112(10-7mol/L)作用30min与作用24h后洗脱2h,Na+-K+-ATP酶活性的差异。结果 CGP42112作用于AT2受体后可明显抑制RPT细胞AT1受体蛋白的表达,且呈现一定的浓度与时间依赖性。CGP42112(10-7 mol/L)能够抑制AT1受体mRNA的表达水平。与AngⅡ单独作用比较,CGP42112(10-7 mol/L)预处理24h可使AngⅡ(10-11 mol/L)增强Na+-K+-ATP酶活性的效应明显降低。CGP42112(10-7 mol/L)作用30min后,Na+-K+-ATP酶活性显著降低;但作用24h洗脱后2h,Na+-K+-ATP酶活性与对照组比较无明显差异。结论 AT2受体能够抑制SHR大鼠RPT细胞AT1受体的表达及其介导的Na+-K+-ATP酶活性增强的效应。

肾脏近曲小管上皮细胞囊泡膜H^+-ATP酶的细胞化学定位

为了探讨肾脏近曲小管上皮细胞囊泡膜H+-ATP酶的细胞化学定位，我们在中性环境中，以Tricine-KOH为缓冲浪，P-NPP为底物，用饰作捕捉剂，分组进行了实验。结果：溶酶体内的酶活性可被NaF所抑制，溶酶体和内吞体股上的酶活性则不能被NaF抑制，但能被NEM所抑制。实验提示：溶酶体和内吞体股上的P-NPP酶，是对K+依赖的，对ouabain不敏感的，但可被NEM抑制。

高血压发生中多巴胺D4受体对肾脏近曲小管细胞血管紧张素Ⅱ1型受体的异常调控

目的研究多巴胺 D_4受体对肾脏近曲小管上皮(RPT)细胞上血管紧张素Ⅱ1型受体(AT_1R)表达的异常调控在原发性高血压(EH)发生中的作用。方法以 Wistar-Kyoto(WKY)大鼠的 RPT 细胞株作为研究对象,采用免疫印迹法测定刺激 D_4受体后 AT_1R 的表达变化,并观察其作用机制及信号途径。结果 D_4受体激动剂PD168077(10^(-6)mol/L,24 h)刺激 D_4受体可明显抑制 WKY 大鼠 RPT 细胞 AT_1R 的表达,该作用呈现浓度和时间依赖性关系;PD168077对 AT_1R 表达的抑制作用可被 D_4受体特异性阻断剂 L745870(10^(-6)mol/L)所阻断;相反,在 EH 状态下这种作用受损,PD168077反而增加 AT_1R 的表达。在钙通道拮抗剂尼卡地平存在的情况下 D_4受体对 WKY 细胞 AT_1R 的抑制作用被阻断,提示 D_4受体对 AT_1R 的下调作用可能通过钙通道途径发生影响。结论D_4受体对 AT_1R 蛋白表达具有抑制作用,该作用受损可能在高血压的发生、发展过程中发挥一定作用。

多巴胺D_3受体对大鼠肾脏近曲小管上皮细胞多巴胺D_4受体表达和功能的影响

目的:观察多巴胺D3受体(D3受体)对大鼠肾脏近曲小管(RPT)上皮细胞多巴胺D4受体(D4受体)表达和功能的影响。方法:以Wistar-Kyoto(WKY)大鼠RPT上皮细胞为研究对象,利用免疫印迹法观察D3受体激动剂PDl28907刺激D3受体后D4受体表达的变化;采用哇巴因法测定Na+-K+-ATP酶(ATP为三磷酸腺苷)活性,观察D3受体激动剂PDl28907(10-7mol/L,24 h)预先作用后,D4受体激动剂PD168077(10-7mol/L,15 min)对Na+-K+-ATP酶活性的影响。同时,探讨D3受体激动剂PDl28907影响D4受体表达的作用机制。结果:D3受体激动剂PDl28907刺激可明显增强RPT上皮细胞中的D4受体蛋白表达,该作用呈时间与浓度依赖性关系。D3受体激动剂PDl28907对D4受体蛋白表达的增强作用可被D3受体特异性抑制剂U99194A(10-6mol/L)所阻断。磷脂酶C抑制剂U73122存在的情况下,D3受体激动剂PD128907刺激D3受体后对D4受体的促进表达效应受到显著抑制。与单用D4受体激动剂PD168077相比,在PDl28907(10-7mol/L,24 h)预先刺激的情况下,D4受体激动剂PD168077对Na+-K+-ATP酶活性的抑制作用有所增强。结论:D3受体对大鼠RPT上皮细胞上D4受体表达和功能具有增强作用,此作用可能通过磷脂酶C信号途径发挥影响。

多巴胺D_4受体对肾脏近曲小管上皮细胞胰岛素受体表达和功能的影响

目的研究多巴胺D4受体对肾脏近曲小管上皮(RPT)细胞胰岛素受体表达和功能的影响。方法以RPT细胞株为研究对象,采用免疫印迹法测定D4受体激动剂PD168077刺激D4受体后胰岛素受体的表达变化,并探讨其作用机制。结果D4受体激动剂PD168077(10-7mol/L,24 h)可明显抑制WKY大鼠RPT细胞胰岛素受体的表达,该作用呈现浓度和时间依赖性关系。PD168077对胰岛素受体表达的抑制作用可被D4受体特异性拮抗剂L745870(10-6mol/L)所阻断。与单用胰岛素相比,在PD168077(10-7mol/L,24 h)预先刺激的情况下,胰岛素对Na+-K+-ATP酶活性的刺激作用降低了39%(P<0.05)。钙离子通道阻断剂尼卡地平(10-7mol/L)可以阻断PD168077对RPT细胞胰岛素受体的抑制作用。结论D4受体对胰岛素受体蛋白表达和功能具有抑制作用,此作用可能通过钙离子通道发挥影响。

多巴胺D_4受体对肾脏近曲小管上皮细胞Na^+-K^+-ATP酶活性的影响

目的研究多巴胺D4受体对肾脏近曲小管(RPT)上皮细胞Na+-K+-ATP酶活性的影响及其机制。方法以WKY大鼠的RPT细胞株作为研究对象,测定多巴胺D4受体激动剂PD168077对RPT细胞Na+-K+-ATP酶活性的影响,硝酸还原酶法检测一氧化氮含量。结果PD168077能明显降低RPT细胞Na+-K+-ATP酶的活性,该作用呈浓度和时间依赖性。多巴胺D4受体拮抗剂L745870(10-6mol/L)可阻断PD168077对RPT细胞Na+-K+-ATP酶活性的抑制。与对照组比较,PD168077刺激RPT细胞15 min后,一氧化氮的合成含量明显升高;一氧化氮合成酶抑制剂可以阻断多巴胺D4受体对Na+-K+-ATP酶的抑制效应,提示一氧化氮途径可能参与了多巴胺D4受体对RPT细胞Na+-K+-ATP酶的抑制作用。结论多巴胺D4受体能够抑制WKY大鼠RPT细胞Na+-K+-ATP酶的活性,该作用可能与一氧化氮途径有关。

内皮素B受体对肾近曲小管上皮细胞Na^+-K^+-ATP酶活性的影响

目的探讨内皮素B(ETB)受体对肾脏近曲小管(RPT)上皮细胞Na+-K+-ATP酶活性的影响和机制。方法以WKY(Wistar-Kyoto)大鼠RPT细胞为研究对象,Na+-K+-ATP酶活性采用哇巴因法进行测定。结果ETB受体激动剂BQ3020能明显降低Na+-K+-ATP酶的活性,这一抑制作用呈浓度和时间依赖性,BQ302010-8mol/L刺激15min达最大效应,下降幅度达36.1%;用细胞膜钙通道阻断剂尼卡地平预先刺激细胞后,能够阻断ETB受体对Na+-K+-ATP酶的抑制效应;在无钙状态下,ETB受体激动剂BQ3020对Na+-K+-ATP酶的抑制效应丧失。结论ETB受体在RPT处通过降低Na+-K+-ATP酶活性调节离子转运;细胞外钙内流参与了ETB受体对Na+-K+-ATP酶活性抑制作用的信号途径。

小鼠肾近曲小管上皮细胞顶侧膜钾通道的膜片钳研究

目的研究小鼠肾脏近曲小管上皮细胞顶侧膜K+通道的生理学特性。方法采用膜片钳细胞贴附式单通道记录急性分离的近曲肾小管上皮细胞顶侧膜K+通道电流。结果该通道在超极化状态下表现为内向电流,斜率电导为(11.4±0.6)pS,且通道开放活动随极化程度增大而增加。在反极化状态下表现为外向电流,并具有内向整流特性。结论小鼠肾脏近曲小管上皮细胞顶侧膜上存在一类低电导的K+通道,其分布广泛,可能参与钾离子转运、调节细胞体积及维持电势能的稳定。

多巴胺D_3受体对SHR大鼠肾脏内皮素B受体的异常调节在高血压发生中的作用

目的探讨多巴胺D3受体对肾脏内皮素B(ETB)受体表达及功能的调节与高血压(EH)发生的关系。方法分别以D3多巴胺受体基因敲除(D3-/-)小鼠和肾脏近曲小管上皮细胞(RPT)株为研究对象,观察刺激D3受体后ETB受体蛋白表达和功能的变化,D3受体的蛋白表达采用免疫印迹测定,ETB受体的功能采用Na+-K+-ATP酶活性表示。结果D3-/-小鼠肾脏皮质ETB受体的蛋白表达(0·8±0·2)DU明显低于对照小鼠[(1·2±0·1)DU,P<0·05,n=5];D3受体兴奋剂PD128907(10-7mol/L·24h)刺激D3受体可增加Wistar-Kyoto(WKY)大鼠RPT细胞ETB受体的表达,却抑制自发性高血压(SHR)大鼠ETB受体的表达[WKY(对照1·0±0·1比PD1289071·5±0·1)DU;SHR(对照1·0±0·1比PD1289070·7±0·2)DU;n=9,P<0·05]。用ETB受体激动剂BQ3020(10-8mol/L·15min)刺激ETB受体可明显降低WKY大鼠RPT细胞的Na+-K+-ATP酶的活性,但在SHR的RPT细胞,这种抑制作用却丧失;基础状态下SHR的Na+-K+-ATP酶活性明显高于WKY大鼠。预先刺激D3受体均可使ETB受体对Na+-K+-ATP酶活性的抑制作用进一步加强,但这种作用在WKY的RPT细胞明显强于SHR的RPT细胞(下降幅度SHR9·1%比WKY16·9%)。结论D3受体通过对ETB受体蛋白表达的调节作用,从而调控ETB受体的功能,D3/ETB受体之间的异常调节参与了EH发生的发病机制。

肾脏内皮素B受体参与D3受体介导WKY大鼠尿钠排泄调节

目的肾脏多巴胺和内皮素(ET)系统通过影响近曲小管尿钠排泄在血压调节中发挥重要作用。敲除 ETB 受体基因或 D_3多巴胺受体基因均形成盐敏感性高血压小鼠,并伴有尿钠排泄能力降低;本试验将探索D_3受体和 ETB 受体之间是否存在相互作用以及该作用对 WKY 大鼠尿钠排泄的影响。方法应用 D_3受体激动剂、拮抗剂和 ETB 受体拮抗剂灌注 WKY 大鼠右肾动脉,观察刺激、抑制 D_3、ETB 受体后 WKY 肾功能尤其是尿钠排泄的变化。结果 PD128907刺激 D_3受体后,WKY 尿钠排泄增加,PD128907介导的促尿钠排泄作用可被 D_3受体拮抗剂 GR103691所阻断;ETB 受体拮抗剂 BQ788本身对尿钠排泄无明显影响,但可部分阻断 D_3受体介导的利钠作用。结论 D_3受体的促尿钠排泄作用部分通过 ETB 受体完成。

核糖霉素对新生儿肾功能影响的观察

庆大霉素能致新生儿肾毒作用,已有作者进行了研究。核糖霉素同属庆大霉素类之抗生素,它是否影响新生儿肾功?本文就27例因新生儿感染而住院应用了核糖霉素的患儿,行血β2—MG蛋白及尿N—2酰—β—D—氨基葡萄糖苷酶（简称NAG酶）检测,以观察用药前及用药后变化,判断有否新生儿肾功能损害。现报道如下。 1 对象及方法 1.1 对象:以1991年10月至1992年1月因感染住院新生儿为观察对象。

北柴胡多糖对D-gal诱导的HK-2细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究北柴胡多糖(BCP)体外抗氧化活性,阐明其对D-半乳糖(D-gal)诱导的人肾脏近曲小管HK-2细胞的保护作用。方法:采用热水浸提法提取BCP,检测其抗氧化活性,即体外羟自由基清除率、总抗氧化能力和抗超氧阴离子活性,并与维生素E的体外抗氧化活性进行比较。采用不同浓度BCP和D-gal分别作用于HK-2细胞24 h,采用MTT法检测细胞增殖率,确定BCP和D-gal最适作用浓度。采用D-gal构建人肾脏近曲小管HK-2细胞氧化损伤模型,HK-2细胞分为对照组、D-gal组和不同浓度(25、50、100、200及400 mg·L^(-1))BCP+D-gal组,采用MTT法检测各组细胞增殖率。HK-2细胞分为对照组、D-gal组、BCP+D-gal组和维生素E+D-gal组,采用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色实验观察各组HK-2细胞SA-β-gal染色情况并计算衰老细胞百分率。结果:抗氧化活性检测,与相同浓度维生素E组比较,不同浓度BCP组羟自由基清除率明显升高(P<0.05),总抗氧化能力明显增强(P<0.05),5、10和15 g·L^(-1) BCP组抗超氧阴离子活性明显增加(P<0.05),且不同浓度BCP组体外抗氧化活性均高于同等浓度维生素E组。与对照组比较,处理HK-2细胞24 h,25~400 mg·L^(-1) BCP组HK-2细胞增殖率呈浓度依赖性升高(P<0.05),且200 mg·L^(-1) BCP组HK-2细胞增殖率最高。与对照组比较,不同浓度D-gal组HK-2细胞增殖率呈时间-浓度依赖性降低,在处理条件为20 g·L^(-1)、48 h时,细胞增殖率降低至对照组的64.77%。与对照组比较,D-gal组HK-2细胞增殖率明显降低(P<0.01);与D-gal组比较,100~400 mg·L^(-1) BCP+D-gal组HK-2细胞增殖率呈浓度依赖性升高(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,D-gal组SA-β-gal染色阳性细胞数明显增多,衰老细胞百分率明显升高(P<0.05);与D-gal组比较,BCP+D-gal组和维生素E+D-gal组SA-β-gal染色阳性细胞数明显减少,衰老细胞百分率明显降低(P<0.05)。结论:BCP具有较强的体外抗氧化活性,可通过抑制细胞衰老保护D-gal诱导的HK-2细胞氧化损伤。