肾脑表达蛋白过表达载体对于β-淀粉样蛋白诱导神经细胞凋亡的作用机制

目的探究肾脑表达蛋白(KIBRA)过表达载体对于β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导神经细胞凋亡的作用机制。方法本研究以原代海马神经细胞为研究对象,利用20μmol/L Aβ25-35诱导,构建体外稳定的AD细胞模型,利用siRNA技术构建KIBRA过表达载体,由慢病毒载体转染AD细胞模型,按照处理方法将AD细胞模型分成3组,即空白对照组、阴性对照组和过表达载体组。利用RT-PCR和Western blot检测KIBRA、Caspase-3以及Caspase-9的表达水平,利用AV-PI试剂盒检测细胞凋亡。结果 AD细胞模型中,可见细胞核汇聚,细胞形态不规则,触角形成。慢病毒滴度的检测结果显示KIBRA慢病毒过表达载体慢病毒转染滴度为7×106TU/ml。空白对照组、阴性对照组和过表达载体组的KIBRA的mRNA的相对表达量比较差异有统计学意义(F=9. 068,P <0. 05),过表达载体组的KIBRA的mRNA的相对表达量高于空白对照组和阴性对照组(q值分别为2. 021、2. 981,P <0. 05)。过表达载体组的Caspase-3、Caspase-9的mRNA的相对表达量低于空白对照组和阴性对照组(P <0. 05)。Western blot结果与RT-PCR表达趋势相同。AV-PI结果显示,过表达载体组的细胞总凋亡率低于空白对照组和阴性对照组(q值分别为2. 551、3. 003,P <0. 05)。结论 KIBRA的过表达载体可以抑制AD细胞模型的凋亡,可以作为阿尔茨海默病的潜在治疗靶点。