肾舒复健汤对慢性肾衰竭大鼠PTEN/PI3K/AKT信号通路的影响

目的 基于网络药理学结合动物体内实验探讨肾舒复健汤(黄芪、白术、生地黄等)治疗慢性肾衰竭(CRF)的作用机制。方法 (1)通过TCMSP数据库检索并筛选肾舒复健汤的活性成分,通过Swiss数据库筛选其潜在作用靶点;通过DisGeNET、GeneCards数据库检索CRF疾病相关靶点;通过Venn平台对活性成分潜在作用靶点与CRF疾病相关靶点取交集,获得肾舒复健汤治疗CRF的关键靶点(共同靶点);采用Cytoscape3.7.2软件构建肾舒复健汤治疗CRF的“活性成分-关键靶点”网络,分析核心活性成分;将共同靶点导入STRING数据库,构建蛋白互作(PPI)网络,筛选核心靶点;将共同靶点导入DAVID数据库进行GO功能及KEGG通路富集分析。(2)将大鼠随机分为正常组、模型组、尿毒清组(5 g·kg^(-1))、肾舒复健汤组(11 g·kg^(-1)),每组8只;采用饲喂0.5%腺嘌呤饲料以建立CRF大鼠模型,连续造模21 d;模型复制成功后开始灌胃给药,每日1次,持续干预28 d。检测大鼠血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)及24 h尿蛋白(24 h U-pro)水平;采用HE染色法及MASSON染色法检测大鼠肾脏组织病理变化,计算胶原容积分数(CVF);免疫组化法检测肾脏组织中PTEN、PI3K、p-AKT蛋白表达。结果 (1)网络药理学预测得到肾舒复健汤治疗CRF的活性成分140个,关键靶点(共同靶点)199个,核心活性化合物包括金合欢素、木犀草素、槲皮素等;核心靶点包括蛋白激酶B(AKT1)、肿瘤蛋白53(TP53)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)等;GO功能主要与缺氧反应、血管生成正向调节、蛋白质磷酸化正调节等生物过程相关;关键通路主要涉及癌症途径、PI3K/AKT信号通路、Ras信号通路等;调控PTEN/PI3K/AKT信号通路可能是肾舒复健汤治疗CRF的重要作用机制之一。(2)体内试验显示,与正常组比较,模型组大鼠的血清SCr、BUN及24 h U-pro水平显著升高(P<0.01);肾脏组织病理改变明显,可见大量蓝色胶原纤维沉积,CFV明显升高(P<0.01);大鼠肾组织中PTEN蛋白表达水平显著降低(P<0.01),PI3K、p-AKT蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠的血清SCr、BUN及24 h U-pro水平显著降低(P<0.05,P<0.01);肾脏组织病理损伤明显减轻,纤维沉积面积明显减少,CFV明显降低(P<0.05,P<0.01);大鼠肾组织中的PTEN蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),PI3K、p-AKT蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论 肾舒复健汤能够明显改善CRF大鼠的肾功能,有效改善肾脏组织病理损伤及纤维化,可能与其调节PTEN/PI3K/AKT信号通路密切相关。