新生猪肾近曲小管上皮细胞的体外培养与鉴定

目的 分离新生猪肾小管上皮细胞进行体外培养 ,为研究围生期肾小管上皮细胞生物学行为特征提供理论基础。方法 采用机械分散结合 型胶原酶 (0 .5 g/ L)消化的方法纯化肾小管片段 ,选择含 10 %的 FCS低糖DMEM培养基 ,置于 5 %CO2 ,37℃孵箱培养。 0 .2 5 %胰蛋白酶用于肾小管上皮细胞纯化和传代培养。应用细胞形态学 (光镜和电镜 )、免疫细胞化学 (Pan CK和 CK18单抗 )和酶组织化学 (酸性磷酸酶和碱性磷酸酶 )方法进行肾近曲小管上皮细胞鉴定 ;用流式细胞术做细胞纯度鉴定。结果 出生 12～ 2 4小时的新生猪肾小球直径为 5 0～ 70 μm,出生5～ 6天的肾小球直径为 70～ 98μm。新生猪肾近曲小管上皮细胞体外培养对葡萄糖的需求量不高。培养成功并传 6～8代 ,肾小管上皮细胞纯度达 95 %～ 98%。综合形态学、免疫细胞化学和酶组织化学结果 ,支持细胞来源于肾单位的近曲小管。结论 采用机械分散 -酶消化纯化肾小管 ,0 .2 5 %胰蛋白酶纯化肾小管上皮细胞及低糖 DMEM培养新生猪肾近曲小管的方法是可行的。

葛根素对人肾近曲小管上皮细胞ABCG2表达影响

目的探讨葛根素(Pur)对人肾近曲小管上皮细胞(HK2)内三磷酸腺苷结合盒转运体G2(ABCG2)基因与蛋白表达的影响,阐明葛根素治疗痛风的可能机制。方法体外培养HK2细胞,分为对照组与25、50、100、200 mg/L葛根素给药组。CCK-8法检测葛根素对HK2细胞的影响;检测ALP活性,观察HK2细胞内酶促反应状态;荧光定量PCR法、Western blotting法检测对照组与给药组HK2细胞内ABCG2基因蛋白表达。结果葛根素对HK2细胞有促进增殖作用(P<0.05);100 mg/L葛根素组ALP活性最佳(P<0.01)。荧光定量PCR和Western blotting法检测结果显示,葛根素组HK2细胞内ABCG2基因及蛋白表达明显高于对照组,其中100 mg/L葛根素组HK2细胞内ABCG2最为明显,差异有统计学意义(P<0.01)。结论葛根素能够增加HK2细胞内ABCG2基因蛋白的表达,这可能是葛根素调节痛风患者血尿酸水平的重要分子机制之一。

普罗布考抑制氧化低密度脂蛋白诱导的人肾近曲小管上皮细胞转分化的作用及机制研究

目的研究普罗布考对氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein，Ox-LDL）诱导的人肾近曲小管上皮细胞HK-2转分化的保护作用，并探讨凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1（lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1，LOX-1）及氧化应激在其中的作用和相互关系。方法采用不同浓度Ox-LDL（0-100ug／ml）孵育HK-2细胞，并予普罗布考（20umol／L）和LOX-1抑制剂多聚肌苷酸（250ug／m1）干预。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测细胞增殖情况，用DCFH—DA法检测活性氧（reactive oxygen species，ROS）活性，生化比色法检测一氧化氮（nitric oxide，N0）浓度，Western blot检测E-钙粘素（cadherin）、a平滑肌动蛋白（a-smooth muscle actin，a-SMA）、LOX-1、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（Nicotinamide adenine dinucleotide 2＇-phosphate reduced tetrasodium salt，NADPH）氧化酶4（NOX4）表达。结果12．5～200ug／ml浓度范围内的Ox-LDL对HK-2细胞的增殖无明显影响，25-100ug／ml的Ox-LDL以浓度依赖方式促进HK-2细胞LOX-1、a-SMA蛋白表达上升，E-cadherin下降。而多聚肌苷酸、普罗布考能使LOX-1、a-SMA蛋白表达抑制，E-cadherin表达上调。50ug／ml的Ox-LDL能促进NOX4表达上调，ROS活性增加（451．5ug／ml kg839．8ug／ml，P〈0．05），NO含量略增加（46．0umol／L比46．2umol／L），但无统计学意义（P〉0．05）。而多聚肌苷酸、普罗布考能使NOX4表达下调，ROS活性下降，但对NO浓度无明显影响。结论Ox-LDL可诱导HK-2细胞转分化，其机制可能与其结合LOX-1促进氧化应激有关，而普罗布考可以通过降低LOX-1，抑制氧化应激损伤，从而延缓HK-2细胞转分化的进程。

中毒性急性肾衰早期肾近曲小管上皮细胞细胞骨架的改变

目的 :了解中毒性急性肾衰 (ARF)早期肾近曲小管上皮细胞 (PTC)细胞骨架微丝和微管的改变 ,并探讨其改变的机制。方法 :采用皮下注射氯化汞建立中毒性ARF模型 ,用免疫组化和电镜法观察中毒 6h和 12hPTC细胞骨架微丝和微管的改变 ,并用高效液相色谱法测试细胞内ATP水平。结果 :免疫组化显示微丝随着中毒时间的延长 ,PTC刷状缘损伤逐渐加重 ,胞浆内有片状肌动蛋白分布 ;电镜示中毒 6h微绒毛变成球形小体 ,中毒 12h微绒毛部分缺失 ;免疫组化微管示中毒 6hPTC严重受损 ,着色变浅、不规则 ,中毒 12h着色部分恢复 ;细胞内ATP水平随着中毒时间延长而逐渐下降。结论 :中毒性ARF时 ,PTC细胞骨架微丝和微管发生变化 ,微丝的改变可能与细胞内ATP水平相关。

多巴胺D1受体通过PKC途径调节肾近曲小管上皮肾胺酶的表达

目的研究多巴胺D1类受体对Wistar-Kyoto(WKY)大鼠肾近曲小管上皮细胞(renal proximal tubule,RPT)中肾胺酶(renalase)的表达与活性的影响及其作用机制。方法以WKY大鼠RPT细胞株为实验对象,采用RT-PCR方法检测D1类受体激动剂fenoldopam对renalase mRNA转录水平的影响,免疫印迹法(Western blot)测定蛋白表达的变化,尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NADH)氧化法检测renalase活性。结果多巴胺D1类受体激动剂fenoldopam(10-6 mol/L)作用24 h可显著上调WKY大鼠RPT细胞renalase的mRNA[(1.09±0.07)vs(0.67±0.11)]和蛋白[(1.12±0.10)vs(0.73±0.05)]表达水平(P<0.05)。与对照组相比,fenoldopam(10-6 mol/L)刺激24 h后,RPT细胞renalase的NADH氧化活性也明显增高[(3.98±0.06)vs(3.55±0.13),P<0.05]。fenoldopam上调WKY大鼠RPT细胞的renalase的转录、蛋白合成和活性,并呈一定的浓度依赖性。fenoldopam对renalase的上调作用可以被蛋白激酶C抑制剂(protein kinase C inhibitor,PKCI,即PKC抑制肽19-31,10-6 mol/L)所阻断。结论多巴胺D1类受体能够增强WKY大鼠RPT细胞中renalase的表达水平与活性,该调解作用与PKC信号途径有关。

血必净对百草枯诱导人肾近曲小管上皮细胞-2氧化应激和炎症水平的影响

目的观察血必净注射液对百草枯诱导的人肾近曲小管上皮细胞-2(HK-2)氧化应激和炎症水平的影响。方法常规培养HK-2细胞,按随机数字表法分为空白对照组、百草枯中毒模型组、血必净预处理组、血必净对照组。采用高效液相色谱法(HPLC)检测细胞内百草枯含量;采用化学比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-6 (IL-6)和肿瘤坏死因子-a(TNF-a)水平。结果随时间延长,百草枯中毒模型组和血必净预处理组HK-2细胞内百草枯含量逐渐升高,作用48 h达峰值,且血必净预处理组HK-2细胞内百草枯含量较百草枯中毒模型组明显降低(mg/L :4.26±0.20比5.77±0.18, P<0.05)。与空白对照组比较,百草枯中毒模型组MDA.TNF-a和IL-6含量明显升高[MDA(nmo<mg): 4.47±0.10 比 2.21 ±0.08, TNF-a (ng/L): 206.91 ± 13.22 比 98.14±5.67), IL-6(ng/L):253.33±5.22 比 116.97± 13.54,均 P<0.05〕,SOD 活性明显降低(U/mg : 33.30±0.62 比 41.58±0.17, P<0.05)。与百草枯中毒模型组比较,血必净预处理组HK-2细胞内MDA、TNF- a和IL-6含量明显降低〔MDA(nmol/mg):2.92 ±0.17 比 4.47 ±0.10, TNF-a (ng/L): 166.29 ±15.47 比 206.91 ± 13.22, IL-6 (ng/L ): 209.39 ±3.18 比253.33 ±5.22,均 P<0.05〕,SOD 活性明显升高(U/mg : 38.10±0.67 比 33.30±0.62, P<0.05)。结论血必净可降低HK-2细胞内百草枯含量以及细胞氧化应激和炎症因子水平。

PGC-1α对线粒体氧化应激反应及人肾皮质近曲小管上皮细胞焦亡的影响

目的探讨PGC-1α对线粒体氧化应激反应及人肾皮质近曲小管上皮(HK-2)细胞焦亡的影响。方法将HK-2分为对照组(Con组。21%氧气)和缺氧/复氧组(Hyp-R组。用1%氧气培养12 h后立刻用21%氧气培养12 h)、缺氧/复氧组加溶剂对照组(Hyp-R+S组。用1%氧气培养12 h,加入DMSO溶液后立刻用21%氧气培养12 h)、缺氧/复氧组加药物干预组(Hyp-R+ZLN组。用1%氧气培养12 h,加入PGC-1α激动剂ZLN005后立刻用21%氧气培养12 h)。检测各组细胞凋亡率、活性氧含量、线粒体膜电位水平和细胞上清液中IL-10、IL-18的含量,以及细胞焦亡相关蛋白表达水平和线粒体动力学相关蛋白表达水平。观察各组细胞及线粒体形态结构。结果1.Hyp-R组与Con组相比,Caspase-1、Nlrp3、GSDMD-N、Drp1蛋白表达增多(P<0.05),细胞上清液中IL-18的分泌增多(P<0.05),细胞晚期凋亡率升高(P<0.05),活性氧含量增多(P<0.05),JC-1单聚体荧光含量增多(P<0.05)。2.Hyp-R+ZLN组与Hyp-R组相比,细胞焦亡相关蛋白表达减少,细胞上清液中IL-18的分泌减少(P<0.05),活性氧含量减少(P<0.05),JC-1单聚体荧光含量减少(P<0.05)。3.Hyp-R组的线粒体肿胀、线粒体嵴溶解,细胞具有部分疑似焦亡的特征;Hyp-R+ZLN组被破坏的细胞及线粒体结构得以修复。结论PGC-1α通过调控线粒体生物合成改善线粒体功能、影响HK-2细胞焦亡。

镉对人肾近曲小管上皮细胞毒性的实验研究

目的探讨氯化镉对人肾近曲小管上皮细胞的毒性效应。方法将细胞分成对照组与实验组,计数细胞死亡率,绘制细胞生长曲线,检测乳酸脱氢酶（LDH）活力和丙二醛（MDA）含量。结果随着氯化镉浓度的增高,细胞死亡率、培养液内LDH活力、MDA含量均升高,组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）,与染毒剂量作相关分析,相关系数分别为0.858、0.878、0.931,有明显的相关性（P〈0.01）。结论镉对体外培养人肾近曲小管上皮细胞有明显的毒性效应。

过氧化氢刺激下肾近曲小管上皮细胞内钙离子变化

细胞内钙超载是细胞致死性损伤的一个重要特征：由于细胞膜受损，通透性增高，使细胞外钙顺着浓度梯度大量内流；由于线粒体受损，ATP生成障碍导致钙泵功能障碍，不能排出和摄取细胞浆中过多的钙。但目前的研究仍未搞清细胞内钙超载是细胞损伤的原因抑或结果。本实验观察体外培养的猪近曲小管上皮细胞在亚致死剂量过氧化氢刺激下细胞内钙的动态变化。

人重组骨形态发生蛋白7通过下调半胱氨酸蛋白酶-1/焦孔素D信号通路抑制高糖诱导的近曲小管上皮细胞的焦亡

目的 观察人重组骨形态发生蛋白-7(recombinant human bone morphogenetic protein-7,rhBMP-7)对高糖诱导的人肾皮质近曲小管上皮细胞(human kidney-2,HK-2)的焦亡和炎症反应的作用。方法 体外培养高糖(high glucose,HG)刺激的HK-2细胞模拟糖尿病肾病模型。分为正常浓度葡萄糖对照组(Control)、高浓度葡萄糖组(HG)、Control+rhBMP-7组、HG+rhBMP-7组。采用免疫荧光方法检测HK-2细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SAM)、焦孔素D(gasderminD, GSDMD)蛋白和焦孔素E(gasderminE, GSDME)蛋白;TUNEL染色检测细胞死亡情况;蛋白质印迹法检测各组HK-2细胞中焦亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、半胱氨酸蛋白酶-4(caspase-4)、半胱氨酸蛋白酶-5(caspase-5)、 N-GSDMD和GAPDH的表达;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组HK-2细胞培养上清液中炎症因子白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达。结果 与Control组相比,高糖组HK-2细胞Tunel染色的阳性率明显增加,差异具有统计学意义(P<0.000 1),α-SMA蛋白和α-SMA mRNA表达量也显著增加(P<0.000 1),E-cadherin蛋白和Ecadherin mRNA表达量显著下降(P=0.000 6,P<0.000 1);HG组添加rhBMP-7后α-SMA蛋白和m RNA水平显著下降(P=0.011 7, P=0.002), E-cadherin蛋白和m RNA水平明显升高(P=0.001 5,P<0.000 1)。与对照组比较,HG组HK-2细胞GSDME/GSDMD蛋白的荧光信号明显增强。进而,HG组添加rhBMP-7后GSDME/GSDMD蛋白荧光信号显著减弱。同样,HG组HK-2细胞中焦亡相关蛋白caspase-1、caspase-4、caspase-5以及GSDMD的表达量显著高于对照组,差异明显(均P<0.001)。HG组添加rhBMP-7后焦亡相关蛋白的表达明显下降(分别P<0.001,P=0.002,P<0.001)。与对照组比较,HG组HK-2细胞培养上清液中IL-1β和IL-18蛋白浓度显著增加(均P<0.001)。进而导致rhBMP-7干预后HG组细胞上清液中IL-10和IL-1β蛋白浓度明显减少(P<0.001)。结论 rhBMP-7具有抑制HK-2细胞焦亡的作用,其通过调控caspase-1/GSDMD信号通路减缓高糖诱导的HK-2细胞焦亡。

葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞内钙离子浓度动态变化及其信号传导途径的研究

目的:探讨葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)内钙离子(Ca2+)浓度的动态变化及其信号转导途径。方法:在葡萄糖诱导的HK-2细胞中加入不同浓度的蛋白激酶C抑制剂(Hypericin)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Apopain)、蛋白酪氨酸激酶抑制剂(Genistein)、一氧化氮合酶抑制剂(NAME),利用激光共聚焦显微镜(LSCM)观察HK-2细胞内[Ca2+]动态变化。结果:LSCM下观察发现,150mmol/L葡萄糖可引起HK-2细胞内[Ca2+]增高。150mmol/L葡萄糖诱导的HK-2细胞中加入10-4mmol/LHypericin、10-6mmol/LApopain、10-7mmol/LGenistein、10-2mmol/LNAME可抑制葡葡萄糖诱导的HK-2细胞内[Ca2+]增高。结论:葡萄糖作用于HK-2细胞,可引起细胞内[Ca2+]增高;蛋白激酶C、caspase-3、蛋白酪氨酸激酶、一氧化氮(NO)均参与了葡葡萄糖诱导的HK-2细胞内[Ca2+]增高的信号传导过程。

葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞凋亡信号传导途径的研究

目的:探讨葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)凋亡的信号传导途径。方法:利用葡萄糖诱导细胞凋亡:将不同浓度葡萄糖作用于HK-2细胞不同时间,并经透射电镜观察、流式细胞仪(FCM)检测凋亡细胞。采用抑制剂拮抗葡萄糖诱导凋亡:分别将不同浓度的蛋白激酶C抑制剂(hypericin)、半胱氨酸蛋白酶(caspase-3)抑制剂(apopain)、蛋白酪氨酸激酶抑制剂(genistein)、一氧化氮合酶抑制剂(NAME)作用于HK-2细胞30min,再加50mmol/L葡萄糖作用48h,后行FCM检测HK-2细胞凋亡情况。结果:50mmol/L葡萄糖作用48h可诱导HK-2细胞发生凋亡,并可通过透射电镜观察到凋亡小体,而FCM检测发现10-4mmol/Lhypericin、10-4mmol/L和10-6mmol/Lapopain、10-7mmol/Lgenistein、10-2mmol/LNAME可明显抑制葡萄糖诱导的HK-2细胞凋亡。结论:蛋白激酶C、caspase-3、蛋白酪氨酸激酶、一氧化氮(NO)都参与了葡萄糖诱导HK-2细胞凋亡的信号传导过程。

Janus激酶抑制剂对高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化的作用

目的评估Janus激酶抑制剂AG490对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKC),分别给予高糖和高糖+AG490干预,Western blot检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙粘素(E-Cadherin)及信号蛋白STAT1、STAT3、磷酸化STAT1(p-STAT1)和p-STAT3的表达,酶联免疫吸附法测定细胞上清液中TGF-β1和Ⅰ型胶原的分泌,逆转录聚合酶链反应检测TGF-β1 mRNA表达。结果与低糖对照组比较,高糖培养的HKC中α-SMA、p-STAT1和p-STAT3表达明显上调,E-Cadherin表达明显下调,TGF-β1 mRNA表达增加,细胞培养上清液中TGF-β1和Ⅰ型胶原分泌增加。AG490明显下调p-STAT1和p-STAT3表达的同时,明显抑制高糖刺激HKC中α-SMA表达的升高,减轻E-Cadherin表达下降程度,降低TGF-β1 mRNA表达及TGF-β1和Ⅰ型胶原的分泌。结论JAK参与了高糖诱导的HKC转分化,并刺激TGF-β1和细胞外基质分泌,JAK抑制剂AG490能有效拮抗其作用。

复方积雪草有效组分对人肾小管上皮细胞补体C_3表达的影响

目的:探讨复方积雪草有效组分——积雪草苷/大黄素干预肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人肾近曲小管上皮细胞(HPTEC)补体C3mRNA及蛋白的表达水平。方法:采用HPTEC,模型组TNF-α10ng/ml诱导,治疗组在TNF-α诱导的同时,以不同浓度的积雪草苷、大黄素以及积雪草苷合大黄素进行干预,于24h后分别提取细胞RNA及上清,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶链免疫方法(ELISA)分别检测HPTECC3mRNA和蛋白的表达。结果:正常HPTEC具有C3mRNA和蛋白表达,经TNF-α诱导后C3表达明显上调,用不同浓度的积雪草苷、大黄素以及积雪草苷合大黄素干预后,C3mRNA及蛋白水平表达出现不同程度的下调,呈一定的剂量依赖关系和协同作用。结论:复方积雪草有效组分能够抑制炎性细胞因子TNF-α上调所致的肾局部C3过度产生。

高糖对肾小管上皮细胞系细胞因子表达的影响

目的观察高糖诱导肾小管上皮细胞中转化生长因子β1(TGF-β1)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-Cadherin)的改变及酪氨酸激酶(JAK)抑制剂AG490对其的影响。方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞系(HKC),分别给予高糖和AG490干预,采用免疫沉淀和Western blot检测JAK2磷酸化的表达;Western blot检测α-SMA、E-cadherin及信号蛋白STAT1、STAT3等的水平;ELISA法测定细胞上清液中TGF-β1和Ⅰ型胶原的分泌;RT-PCR检测TGF-β1mRNA表达。结果与低糖组比较,高糖培养HKC中α-SMA、p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3表达明显上调,E-Cadherin表达明显下调,TGF-β1mRNA表达增加;细胞上清液中TGF-β1、Ⅰ型胶原分泌增加。AG490明显抑制高糖刺激HKC中α-SMA表达的升高,减轻E-Cadherin表达下降程度,降低TGF-β1mRNA表达及TGF-β1、Ⅰ型胶原的分泌。结论JAK/STAT信号途径可能参与高糖诱导的HKC中TGF-β1和细胞外基质的分泌。

鱼胆毒素致肾小管上皮细胞损伤的药物干预研究

目的观察不同药物对鱼胆毒素(鲤醇硫酸酯钠)致人肾近曲小管上皮细胞(HK-2)损伤的影响。方法从新鲜草鱼胆汁中提取鲤醇硫酸酯钠,通过体外培养HK-2细胞系,应用MTT法评价鲤醇硫酸酯钠对HK-2细胞增殖抑制作用,并观察丹参、地塞米松、氨氯地平、水飞蓟宾、腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)多种药物对鲤醇硫酸酯钠染毒HK-2细胞的干预效果。结果 (1)HK-2细胞存活率随着鲤醇硫酸酯钠浓度的增加和时间的延长而降低;(2)丹参可促进HK-2细胞增殖,HK-2细胞经丹参预处理再鲤醇硫酸酯钠染毒24h后,细胞存活率显著增加,并随丹参浓度的增加而增加(P<0.01),但地塞米松、氨氯地平、水飞蓟宾、腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)干预鲤醇硫酸酯钠染毒HK-2细胞后,其细胞存活率无明显增加。结论丹参可有效降低鱼胆汁毒素致肾小管上皮细胞的损伤,提高细胞活力。

万古霉素诱导人肾小管上皮细胞损伤及其Smad4表达的研究

目的 研究万古霉素诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)损伤及其Smad同源物4(Smad4)表达,并探讨其潜在的作用机制。方法 使用不同终浓度(0、1、2、3、4、5 mmol/L)的万古霉素溶液作用于HK-2细胞24 h,显微镜下观察万古霉素对细胞形态的影响;蛋白质免疫印迹法检测Smad4、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、Bcl-2的蛋白水平;TUNEL法检测HK-2细胞凋亡情况;CCK8法检测HK-2细胞活力来研究万古霉素对肾脏的毒性作用。构建Smad4过表达质粒,通过CCK8法和TUNEL实验检测Smad4过表达对万古霉素诱导的HK-2细胞损伤的影响。结果 与对照组比较,随着万古霉素浓度升高,HK-2细胞逐渐变形,数量逐渐减少;细胞活力显著降低,凋亡率显著增加(P<0.05、0.01)。与对照组比较,促凋亡蛋白Bax表达显著增高,而抗凋亡蛋白Smad4、Bcl-2表达则显著降低(P<0.05、0.01、0.001)。过表达Smad4后,使万古霉素诱导的HK-2的细胞活力显著增加,凋亡率显著降低(P<0.05、0.001)。结论 万古霉素能够诱导人肾小管上皮细胞损伤,其作用机制可能与调控Smad4的蛋白降解密切相关。

梗阻性黄疸肾缺血再灌注损害及其机制的研究

目的 探讨梗阻性黄疸大鼠在短暂性肾缺血再灌注过程中肾功能改变与脂质过氧化反应及肾近曲小管上皮细胞内游离钙离子浓度变化之间的关系。方法 实验大鼠分为正常对照组 (S组 ) 正常肾缺血再灌注组 (SRI组 ) 梗阻性黄疸组 (J组 ) 梗阻性黄疸肾缺血再灌注组 (JRI组 )。在胆道梗阻 1周后行双侧肾动脉夹闭 10min后放开 ,观察再灌注后 0 4 12 2 4h等不同时相点观察肾功能的变化。采用钙离子荧光指示剂Fura 2 /Am负载测定各组 2 4h时相点肾近曲小管上皮细胞内游离钙离子浓度。结果 JRI组内生肌酐清除率随再灌注时间延长持续性下降 ,J组及JRI组肾组织丙二醛水平明显升高同时超氧化物歧化酶含量下降。JRI组肾近曲小管上皮细胞内游离钙离子浓度显著升高。结论 在梗阻性黄疸状态下大鼠肾脏对缺血再灌注损伤的敏感性明显升高 ,缺血再灌注损伤可能与梗阻性黄疸术后急性肾功能衰竭的发生有关。氧自由基及钙超载参与了这一过程。

肌醇加氧酶在糖尿病肾病发病机制中的作用

[目的]研究高糖环境下大鼠肾近曲小管上皮细胞肌醇加氧酶(myoinositol oxygenase,MIOX)的表达及糖尿病肾病大鼠体内肌醇耗竭的机制。[方法]体外培养大鼠近曲肾小管上皮细胞株(NRK-52E),将其分为正常对照组(NG)、高糖组(HG)和渗透浓度对照组(MG),并分别于12、24、48、72 h应用RT-PCR法检测MIOX的mRNA表达,免疫荧光细胞化学法检测其蛋白的表达。[结果]HG组MIOXmNA与蛋白表达水平在12 h出现升高,二者分别在24 h与48 h达高峰。NG组的MIOXmRNA及蛋白表达水平各时间点差异无显著性意义(P>0.05);与NG组和MG组相比,HG组MIOX的mRNA及蛋白表达均明显升高(P<0.01)。MG组明显高于NG组(P<0.05)。[结论]高糖能促进大鼠肾近曲小管上皮细胞肌醇加氧酶(MIOX)的表达,并可能通过MIOX的形成增加介导肌醇的耗竭,提示MIOX参与了糖尿病肾病的发生发展。