大鼠肾近球小管细胞胞饮体膜氢泵活性和水的渗透性转运的特征

本实验采用异硫氰酸-葡聚糖荧光素(fluorescein isothiocyanate-dextran,FITC-dextran)体内标记法,研究大鼠肾近球小管细胞胞饮体(endosome)膜上 H^+-ATP 酶的活性及水的渗透性转运。通过观察在胞饮体外加入一定量 ATP 后,胞饮体内 pH 值的时间反应曲线,从而测定 ATP-依赖的 H^+在胞饮体膜上的转运情况。胞饮体内的酸化速度及 pH 的最低值与加入的 ATP 浓度有关。在加入 ATP 前,胞饮体内的 pH 值为7.4,加入不同浓度的 ATP 后,即[ATP]为0.005,0.05,0.5,5和10mmol/L,胞饮体内 pH 最低值分别为7.30,6.99,6.68,6.38和6.39。此种由 ATP 引起的酸化反应,被0.5mmol/L N-ethylmaleimide(NEM)抑制97%,但不被钒酸盐和 oligomycin 所抑制。实验还同时观察了此种胞饮体水的渗透性转运机制。通过在胞饮体膜内外建立一个蔗糖浓度梯度。观察 FITC-dextran 荧光信号的快速动力学变化过程,从而测定由于渗透压梯度引起的水在胞饮体膜上转运的特征。在230℃时,水的渗透性通透系数(osmotic water permeability coefficient,P_f)为0.03cm/s;加入0.5mmol/L HgCl_2后,水的转运被抑制70%。此抑制反应可被5mmol/L 巯基乙醇(β-Mcrcaptoethanol)完全逆转。上述结果提示:大鼠肾近球小管胞饮体膜含有H^+-ATP 酶和水的转运通道。胞饮?

灯盏花素对大鼠糖尿病早期的肾脏保护作用

目的探讨灯盏花素对大鼠糖尿病早期肾脏的保护作用及其对肾近球小管Na+,K+-ATPase活性的影响。方法将链脲佐菌素诱导的DM大鼠分为模型组(DM组)和灯盏花素治疗组(BR组),另设正常对照组(NC组)。BR组给予腹腔注射灯盏花素盐水注射液20mg(/kg·d),NC组和DM组大鼠给予同体积的生理盐水。4周后麻醉下行双侧输尿管插管,收集半小时尿并行心脏穿刺取血,测定尿量,检测血糖(BG)和血、尿肌酐,放免法(RIA)测定尿微量白蛋白、尿β2-微球蛋白及血清内源性洋地黄样物质,计算尿白蛋白排泄率和肌酐清除率。取双肾称重并计算肾脏肥大指数。在体视显微镜下手工分离单根PT,用液闪法测其Na+,K+-ATPase活性。结果DM组BG、尿量、肾脏肥大指数、尿β2-MG、UAER、Ccr及PT的Na+,K+-ATPase活性与NC组相比均显著性升高(P<0.01),而血清EDLS水平则显著性下降(P<0.01);灯盏花素治疗后,血清EDLS水平显著性升高(P<0.01),其他指标均明显下降(P<0.05)。结论灯盏花素对DM大鼠肾脏有明显的保护作用,其机制可能部分与下调PT的Na+,K+-ATPase活性有关。